Какуета: «Какую-то» или «какую то» — как правильно пишется слово?

Содержание

«Украину медленно, но верно превращают в какую-то анти-Россию»

Киев стремится нейтрализовать тех, кто выступает за «добрососедские отношения» с Россией и вместо того, чтобы решать насущные проблемы населения, занимается «охотой на ведьм». Так президент РФ Владимир Путин и заместитель председателя Совета Безопасности Дмитрий Медведев прокомментировали открытое на Украине уголовное дело в отношении лидера партии «Оппозиционная платформа — За жизнь» (ОПЗЖ) Виктора Медведчука. В свою очередь, украинский президент Владимир Зеленский с удовлетворением отметил, что «впервые за много лет в стране не увеличилось, а уменьшилось количество олигархов».

Президент РФ Владимир Путин в пятницу на совещании с постоянными членами Совбеза выступил в защиту украинского политика Виктора Медведчука. Лидера ОПЗЖ на Украине обвиняют в госизмене и покушении на хищение нацресурсов в Крыму.

«Судя по всему — и это очень печально — Украину медленно, но верно превращают в какой-то антипод России, в какую-то анти-Россию, в какую-то площадку, с территории которой мы постоянно, судя по всему, будем получать новости, требующие с нашей стороны особого внимания с точки зрения обеспечения безопасности Российской Федерации»,— начал свое выступление Владимир Путин.

«Что, всех, кто работает с Россией, будут теперь на Украине привлекать к уголовной ответственности?» — задал он риторический вопрос.

«По политическим мотивам избирательно кому-то в вину ставится работа с Россией в сфере экономики, хотя многие, в том числе и лица из высшего политического руководства страны (Украины.— “Ъ”) активно работают на протяжении многих лет в России и, кстати говоря, в Крыму тоже — и ничего, это считается нормой»,— возмутился Владимир Путин. О ком именно идет речь, он уточнять не стал.

По словам президента Путина, последние решения украинских властей являются «совершенно очевидной зачисткой политического поля», а направлены они на то, чтобы нейтрализовать тех, кто выступает за «добрососедские отношения» с РФ и мирное урегулирование кризиса в Донбассе.

Дело в отношении Виктора Медведчука прокомментировал в ночь на пятницу и председатель «Единой России», зампред Совбеза РФ Дмитрий Медведев. «Угрозы двум политикам (господину Медведчуку и его однопартийцу Тарасу Козаку. — “Ъ”) реальными сроками за мифические преступления не смогут поправить рейтинги действующих должностных лиц. Скорее, наоборот, приведут к дальнейшей деградации системы власти, обострят ее политическое слабоумие»,— цитирует господина Медведева пресс-служба «Единой России». Политик также посоветовал президенту Украины Владимиру Зеленскому заняться «решением внутренних и внешних проблем, которых на Украине море, а не устраивать охоту на ведьм», если ему «хочется остаться в народной памяти не только актером комедийного сериала».

Напомним, что в четверг Печерский районный суд Киева избрал Виктору Медведчуку меру пресечения в виде круглосуточного домашнего ареста до 9 июля. Политик также обязан носить электронный браслет и не покидать территорию Киевской области. Ранее на этой неделе Генпрокуратура и Служба безопасности Украины (СБУ) обвинили политика в причастности к трем уголовным эпизодам. Во-первых, речь идет об истории с переоформлением украинской фирмы «Новые проекты», которая с 2012 года разрабатывала месторождение в Черном море, в российскую юрисдикцию. Во-вторых, его обвиняют в передаче в 2020 году спецслужбам РФ «секретных данных» о местонахождении одного из подразделений вооруженных сил Украины, а также в причастности к проекту «Луч», который якобы занимается вербовкой выезжающих в РФ украинских граждан. Ранее, в феврале украинские власти также наложили санкции на Виктора Медведчука и его жену Оксану Марченко, в результате чего активы одного из богатейших людей Украины были заморожены.

Возмущение преследованием их лидера не перестают высказывать и в ОПЗЖ.

«Уже первые судебные слушания по этому выдуманному делу показали, что все так называемые улики сфальсифицированы, состряпаны с массой нарушений и не имеют под собой никаких фактов… Явная пустота обвинений заставила суд отказать во взятии оппозиционного политика под стражу»,— говорится в заявлении партии, опубликованном в пятницу. В ОПЗЖ пришли к заключению: «План власти отправить за решетку Виктора Медведчука провалился».

С этим явно не согласен президент Зеленский, который в пятницу тоже прокомментировал дело.

«Впервые за много лет не увеличилось, а уменьшилось количество олигархов. Минус Медведчук»,— написал он в авторской колонке для украинского издания «Фокус». По словам главы государства, политик благодаря «законным инструментам» лишился возможности использовать медиаактивы и госимущество, чтобы «откровенно бить по стране и наносить разрушительный вред» госбезопасности.

Марина Коваленко

«Мэр не должен представлять какую-то партию, думать, как угодить ей или группе предпринимателей, он должен представлять население» — KVnews.ru

Выступлением Валерия РОЩУПКИНА, возглавлявшего Омск с 1994 по 2000 год, «Коммерческие вести» начали цикл обсуждения темы будущего мэра Омска. Каким должен быть руководитель областного центра, города-миллионника, что ему необходимо сделать в Омске в первую очередь, а какие задачи для мэра стратегические? С такими вопросами мы обратились к читателям. Сегодня своим мнением с нами поделился генеральный директор Торгового дома «Минск» Виктор ЖАРКОВ.

– При сегодняшней системе выборов мэра первое, что ему необходимо, – это стать членом команды губернатора. Сразу после назначения он должен пойти к губернатору и четко с ним определить программу развития города, чтобы под каждым словом глава области подписался и потом не было никаких разночтений и войн. Под каждой строчкой четко должно быть прописано финансирование: что область даст городу и каким путем. После этого мэр может приступать к работе.

Если вышеуказанный вопрос положительно решается, могу сказать, что бы я сделал дальше. В России работают национальные проекты. Мы это видим и по дорогам, паркам, и дворам. Здорово, но мэрия должна активно включиться в данный процесс. Пока она просто занимается проведением тендеров, выявляет победителей работ и потом контролирует. Это не совсем правильно. Есть болевые точки, которые требуют незамедлительного решения. Чтобы наш город выглядел достойно, надо привести его в порядок. 

Первое. Надо разобраться с гаражами, которые усеяли весь город. Я имею в виду страшные железные конструкции, которые портят Омск. 

Второе. До конца довести работу с НТО. Их еще очень много во дворах, за домами, стоят не понятно на каких основаниях. Торговля должна иметь нормальное лицо, а многие киоски портят внешний облик города. Мэрия работает в этом направлении, но нужно ускоряться.

Третье. Уборка города. Все усилия бросить на нее. Если мы чуть-чуть отойдем от центральных магистралей, во дворы, то везде увидим грязь, бурьян. Кстати, это касается и центральной части города. Сейчас хотя бы привели в порядок фасады домов. 

Четвертое. Убрать маршрутки с центральных магистралей, оставив им роль подвозчика пассажиров на конечные пункты магистральных маршрутов троллейбусов и автобусов большой вместимости.

Пятое. Очистить улицы, дома и здания от рекламы разных видов и размеров кроме законодательно разрешенной.

Шестое. В центре города сделать только платные парковки, что уменьшит пробки на дорогах и очистит центр города от излишней загруженности транспортом.  

Седьмое. Привести в порядок опоры линии электропередачи электротранспорта и освещения. Заменить аварийные, выровнять остальные, покрасить, максимально убрать провода и кабели в подземные короба.

Восьмое. Восстановить и оградить газоны на магистралях и во дворах.

Это лишь часть повседневной работы мэра, которую горожане сразу увидят и отметят. Все остальное – что мэр должен заниматься инвестиционной привлекательностью города – просто слова. Можно кучу программ навыдумывать, но если под них не будет финансирования, то грош им цена. А реальные дела сразу видны.

Омск очень выгодно отличается от Новосибирска, где нет ни одного свободного квадратного метра, чтобы посадить дерево, там все застроено. В Омске пока такого нет. И все кусочки земли, которые у нас сохранились, ни в коем случае нельзя отдавать под точечную застройку, надо разбивать парки, делать детские площадки. Тогда народ из Омска не будет массово уезжать.

Конечно, мэр должен наладить работу с депутатами. Но мэр не должен представлять какую-то партию, думать, как угодить ей или группе предпринимателей, он должен представлять население.

Юрзинов: постараемся принести «Трактору» какую-то философию

https://rsport.ria.ru/20191106/1560628274.html

Юрзинов: постараемся принести «Трактору» какую-то философию

Юрзинов: постараемся принести «Трактору» какую-то философию — РИА Новости Спорт, 06.11.2019

Юрзинов: постараемся принести «Трактору» какую-то философию

Владимир Юрзинов-младший, назначенный в субботу главным тренером хоккейного клуба «Трактор», после первой тренировки с челябинской командой рассказал о начале… РИА Новости Спорт, 06.11.2019

2019-11-06T12:45

2019-11-06T12:45

2019-11-06T12:50

хоккей

владимир юрзинов-младший

трактор

/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content

/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content

https://cdnn21.img.ria.ru/images/rsport/111902/00/1119020095_125:0:2597:1391_1920x0_80_0_0_027f60d63c578bcd7b173b8aea2a1638. jpg

МОСКВА, 6 ноя — РИА Новости. Владимир Юрзинов-младший, назначенный в субботу главным тренером хоккейного клуба «Трактор», после первой тренировки с челябинской командой рассказал о начале работы.Юрзинов-младший сменил на посту Петериса Скудру. В текущем регулярном чемпионате КХЛ челябинская команда занимает предпоследнее место в таблице Восточной конференции.

РИА Новости Спорт

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

2019

РИА Новости Спорт

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Новости

ru-RU

https://rsport.ria.ru/docs/about/copyright.html

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/

РИА Новости Спорт

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

https://cdnn21. img.ria.ru/images/rsport/111902/00/1119020095_0:0:2722:2042_1920x0_80_0_0_129234031de0ba89ece27e0a9de4d60a.jpg

РИА Новости Спорт

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

РИА Новости Спорт

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

хоккей, владимир юрзинов-младший, трактор

Самое главное – это чтобы было интересно пройти со своим персонажем какую-то часть его жизни – Студия театрального искусства

Спектакль “Мальчики” был включен в программу фестиваля “Золотая маска” (2006 год) и в молодежную программу VI Международного театрального фестиваля им.А.П.Чехова. “Мальчики” – история отношений Алеши Карамазова и гимназистов, театр по Достоевскому без достоевщины. Сергей Женовач и молодые актеры Театра “Студия театрального искусства” говорят о своих героях в непривычной сердечной простоте. Этот спектакль сделан с дальним прицелом. Сокровенным желанием Достоевского было всеобщее примирение через сострадание, переход от драки к любви. Мысль Достоевского осталась и сейчас обретает то же самое значение, что и в те времена.
Мы беседуем с актерами “Студии театрального искусства” – Анастасией Имамовой, Тихоном Котрелевым, Максимом Лютиковым, Мириам Сехон и Александром Обласовым.

– Как вы считаете, трудно сейчас ставить Достоевского? Особенно большие произведения?

Александр: Многое зависит от режиссера. Если есть хороший руководитель, с ним все легко. Спектакль – это в первую очередь результат работы с замечательным педагогом.

Тихон: В случае со спектаклем “Мальчики” мы столкнулись с тем, что Сергей Васильевич Женовач сам составил свою композицию. Это его видение романа. Ведь нет “готового” Достоевского, у каждого режиссера своё сценическое прочтение. Сергей Васильевич нашел свою болевую точку.

– Это был этапный спектакль? С него всё началось?

Тихон: Нет. Наш первый спектакль – “Об-ло-мов-щи-на…”. Сейчас мы его восстановили на сцене филиала театра имени Маяковского.

Александр: После “Об-ло-мов-щи-ны…” была “Поздняя любовь”, потом Шекспир – спектакль “Как вам это понравится”, а уже затем – “Мальчики”, “Marienbad” и “Ехай”

Тихон: То есть в нашей копилке уже шесть спектаклей.

– А есть проблема с помещением? Есть пространство, которое вам больше нравится?

Александр: Когда мы вместе, любое пространство хорошо.

Тихон: Некоторые наши спектакли зависят от сценического пространства. Поэтому сейчас мы не все спектакли показываем. В мае в Центре имени Мейерхольда состоялась наша первая премьера: “Захудалый род” по неоконченному роману Николая Лескова.

– А где бы вам хотелось сыграть? Или, может, вам хотелось бы сыграть кого-то, и какая-то роль ждет вас?

Мириам: (решительно) Я хочу сняться в черно-белом немом кино!

Максим: Малобюджетном.

Мириам: Да, в малобюджетном. Даже необязательно в черно-белом, но немом – это мечта!

– Мириам, вы в 90-х годах путешествовали с интернациональным театром, вместе с родителями. А какие впечатления от поездки? Есть ли разница в театральной традиции?

Мириам: Театр, в котором я жила, был совсем иной. Там все было по-другому. Тридцать пять лет назад собрались студенты парижской школы Жака Лекока из разных стран и создали театр. Стали работать в шапито, жить в караванах, путешествовать по всему миру. Жили одной семьей: дети, собаки, школьный автобус… В этом театре нет режиссера, и спектакль создается актерами. Много внимания уделяется пластике, у каждого своя техника, разминка. Своим опытом все с удовольствием делятся с коллегами. Нет никаких стилевых и жанровых ограничений: маски, ходули, огонь вместе с традиционными театральными приемами… Это целый мир. Ты не работаешь в театре, а живешь в нем.

– А вы не могли бы рассказать про спектакль “Marienbad”?

Александр: Этот спектакль поставлен по роману Шолома-Алейхема, который сам автор обозначил как “путаницу в письмах, любовных записках и телеграммах”.

Это комедия о том, как варшавские евреи, ведут оживленную переписку между Варшавой и модным курортом Мариенбадом. Этот спектакль, как и другие, – результат четырехлетней работы. Четыре года мы все делали сами. Сами ставили свет, делали декорации…

Максим: Это же такое удовольствие – самому переложить чемодан, перекидать вещи. А сейчас приезжаешь…

Мириам: …А за тебя уже все перекидали!

Максим: Точно – перекидали.

– У вас что же, ностальгия по тем старым мольеровским временам, когда актеры сами себе шили костюмы?

Максим: Ну, не ностальгия. Но все-таки, когда все делаешь сам, другое ощущение.

– Вы как семья существуете? Как вы проводите свободное время?

Александр: Мы действительно как семья, ведь даже свободное от работы время мы часто проводим вместе.

– Вы что, никогда не ссоритесь?

Мириам: Если мы в условиях курса и ссорились – это одно. Студенческая жизнь закончилась, и наш курс – это уже театр, мы работаем вместе. Вне театра между нами случается и любовь, и ссоры, но здесь, в театре, мы – единая команда. А какие у тебя или у кого из актеров сложились отношения вне площадки – никого не интересует.

– А возможна ли при таком организующем центре импровизация?

Тихон:Конечно! Сергей Васильевич дает нам попробовать, придумывать свою роль, сцены самим.

Мириам: Бывает, что на одной репетиции сцена выглядит так, на другой по-другому. Мы порой сами не знаем, откуда что берется в процессе. На репетициях, спектаклях каждый вносит что-то свое, потом это меняется. Сергей Васильевич точно знает, что нужно для спектакля, и мы доверяем ему.

– Как вы относитесь к тому, что часто люди уходят из актерской среды? На ваш взгляд – почему? Не могут привыкнуть к тому, что надо врастать в образ, в чей-то характер и проживания чужой жизни?

Мириам: Есть актеры, которые склонны преувеличивать степень “актерского самозабвения” при работе над ролью, на сцене. Мне кажется, роль – это скорее рассказ о персонаже, а не перевоплощение в него. Это все-таки игра. Нужно попытаться найти идеальный баланс между собой – артистом, собой – человеком и персонажем.

Александр: Чаще всего уходят из профессии от невостребованности, безденежья. Не выдерживают ожидания и уходят в “околотеатральные” или какие-то другие профессии.

– Как вы работаете над ролью? Для вас важен внешний облик? Начинаете ли вы с внешнего, с грима, или с внутреннего?

Тихон: Да каждый раз – по-разному… Многое зависит от литературного материала, от автора. Важно понять, каким в этой роли хочет видеть тебя режиссер. Вот Сергей Васильевич как никто умеет работать с актерами, он не торопит, объясняет, рассказывает. Внешний облик важен, конечно. Костюмы, грим, манера держаться, ходить – это всё “работает” на роль, на раскрытие образа. Но самое главное – это чтобы было интересно пройти с этим персонажем какую-то историю, какую-то часть его жизни, понять его поступки и причину его трудностей.

– А случается так, что вы играете образ, который вам неприятен?

Александр: Конечно. Мы же играем разных героев…

– А не хочется показать такого героя зрителю и сказать: “посмотрите на меня! вот такая я свинья!” Или вы все-таки адвокаты своих героев?

Анастасия : Конечно! Актер должен защищать своего героя, вступаться за него. Ведь чтобы разобраться в человеке, надо его понять и объяснить другим!

Тихон: Можно сравнить и с живописью. Например, если предмет изображен плоско, то он не интересен, а как только у него появляется перспектива и тени, картина становится объемной и интересной.

Анастасия: Надо понять логику персонажа, тогда тебе не придется его оправдывать. Пока работаешь над ролью, постепенно понимаешь мотивацию поступков, образ мышления…

Мириам: В хорошей драматургии не бывает однозначно положительных или отрицательных персонажей.

Анастасия: Если ты понимаешь своего героя, то тебе не надо уже ни обвинять, ни оправдывать, все видно, и характер ясен.

Мириам: Если ты играешь персонажа-злодея, то не станешь же, выходя на сцену, сразу изображать: вот какой я злодей! Ну и что потом? Можешь сразу с этой сцены уходить. Гораздо интереснее все время показывать разное, делать это постепенно. Если нам кто-то нравится, то нравится целиком, со всем плохим и хорошим, что в нем есть. Так и с героем.

– Современная молодежь гораздо больше увлекается музыкой, чем кино или театром, посещает концерты, дискотеки, ночные клубы. А вы ходите на концерты или танцевать?

Мириам: Конечно. Мы ходим на выставки, в музеи. Да кто куда! А в музыке мы предпочитаем классику.

– А самим вам доводилось принимать участие в каких-нибудь музыкальных проектах? Максим:Вон Мириам у нас поет в ансамбле.

Мириам: Это я случайно попала в электронно-джазовый проект. Называется “Green Point Orchestra”, им уже шесть лет. Музыка, которую играет эта группа, – это сочетание электронного звучания и живых инструментов, иногда очень неожиданных. И необычный, оригинальный mix – лаундж, джаз, даб, немного этнических мотивов. А еще у меня есть группа, состоящая из семи девушек. Мы играем музыку в стиле 30-50-х годов. Пока мы называемся “Татьяна”.

– Вы видите разницу между театром и кино? Изменяется ли как-то ваша манера игры?

Тихон: В театре интересно играть – это ежеминутные, неповторяющиеся живые мгновения. Спектакли никогда не бывают одинаковые – разное настроение бывает у актеров, разный зритель. Меняются интонации, акценты, нюансы какие-то новые появляются. Спектакль начинает жить своей “самостоятельной” жизнью, развиваться. А кино – это немного другое искусство. Сняли фильм – и всё, это “навсегда”, изменить или подправить уже ничего невозможно. В театре актер играет перед зрительным залом и чувствует настроение зала, за спектакль “проживает” целую жизнь. А на съемках актер работает перед камерой, играет какой-то небольшой кусок своей роли. И очень многое зависит от работы оператора, режиссера, всей съемочной группы.

Мириам: Часто такое бывает, что репетируешь спектакль пять месяцев, а когда выходишь на сцену, осознаешь, что уже ничего не понимаешь и не помнишь (смеется).

– А бывает такое, что зал разный?

Анастасия: Зал всегда разный! Вот когда мы играли в Корее, зал просто тихо сидел, и непонятно было: как зрители в целом реагируют на происходящее. А после окончания спектакля, они встали, чинно похлопали и ушли. И всё.

– В какой, простите, Корее? Максим: В Южной, в Южной! А там везде они очень дисциплинированные. Мириам: Одна женщина, которая более- менее разговаривала по-русски, объяснила нам, что, если даже тебе спектакль не нравится, ты должен досмотреть его до конца. Такое вот воспитание.

Тихон: Зато ни одного раза мобильный телефон не зазвучал! (общий смех)

– А вам сильно мешают звонки мобильных телефонов во время спектаклей?

Тихон: Конечно, мешают.

Александр: Это мешает и актерам, и самим зрителям.

– Вы сильно устаете после спектакля?

Анастасия: Всегда по-разному, но чаще всего после спектакля хочется подумать. Я думаю, что зрители не должны видеть актеров, как до, так и после спектакля – обязательно должен пройти какой-то определенный промежуток времени.

– Почему?

Анастасия: Ну, зачем же так сразу разрушать созданный на сцене образ? Должна остаться некая тайна.

– Расскажите, как вы проводите свободное время, праздники?

Александр: Однажды девочки на 23-е февраля посадили нас в автобус, но не сказали – а куда, собственно, мы едем… В итоге привезли нас в драматический театр в Рязани, где мы должны были экспромтом играть. Это было очень неожиданно!

Мириам: А после этого на 8-е марта мальчики, так же не сказав нам – куда именно мы едем, заказали автобус. И мы приехали в бассейн и мы купались с большой белухой и дельфинами!

– Сейчас молодежь все чаще предпочитает поход в театр простому стоянию на углу с бутылкой пива…

Мириам (смеется): Это как сказать! Я и сейчас у себя рядом с домом вижу такие кучки ребят. И они все еще пьют пиво. И днем, и вечером.

– Но такая тенденция к возвращению в культуру, интерес к театру все же заметны.

Анастасия: Да, это заметно. Молодежи на спектаклях стало значительно больше. Сейчас появляются молодые люди, которым становится скучно просто так проводить время друг с другом, им хочется больше узнать о жизни.

Александр: Верно. Но в небольших городах очень трудно к этому пробиться. Знаете, как там обстоит дело с театрами?

Максим: Мы иногда бываем на гастролях в других городах. Публика радушная и совсем не избалованная.

– Но в прежние времена театры в провинции были не только не хуже столичных, но порой и лучше. Они заслуженно получали призы на театральных фестивалях. Там играли прекрасные актеры.

Александр: Согласен. В прежние времена они жили лучше. Сейчас им очень сложно, потому что сами города не могут выбиться из трудностей, из нищеты. Им приходится выживать. И, конечно, им надо помогать, потому что жизнь там тяжелее, чем в столице.

Максим: А я думаю, что сейчас времена ничуть не хуже. Надо просто немного менять отношение ко всему.

– А скажите, насколько этому новому, молодому человеку понятно то, что вы делаете? Не кажется ли вам, что это абсолютно новая генерация, для которой старые ритмы и старые культурные критерии попросту чужды, неясны?

Максим: О нет! Вовсе нет. Вот у меня был случай. Я привел на спектакль “Об-ло-мов-щи-на…” своего знакомого. Он вообще никогда в театр не ходил, не знал, что это такое, да и о том, что такое обломовщина, имел смутное представление. После спектакля я спускаюсь, чтобы его проводить. Смотрю на него – а он стоит и небом любуется. Я его спрашиваю: что случилось? А он: “Знаешь, я сейчас говорить не могу, давай потом!” Я понял, что спектакль как-то на него повлиял! Потом опять подхожу к нему. А он все еще в небо смотрит странным взглядом. Я понял: что-то у человека внутри перевернулось. С тех пор он пересмотрел все спектакли нашего театра и даже не по одному разу. Вот, что с человеком театр может сделать! Так что в этом деле я оптимист.

Мириам: Время меняется, но люди-то те же!

– Известны случаи, когда актеры, в том числе и молодые – некоторые прямо в училище – уходят из профессии, потому что их охватывает страх растворения в персонаже. Они как будто утрачивают собственную индивидуальность. Во многом это связано и со школой Михаила Чехова. Я слышала мнение людей, которые пробовали так играть, а потом поняли, что по-другому играть уже стыдно, а так – невозможно.

Максим: Ну, это максимализм! В этом есть что-то клиническое!

Анастасия: Нет-нет, думаю, нет. Это серьезный вопрос. У каждого своя техника – это раз. Свой темперамент – это два. Потом актеры разные и театры разные. Некоторые театры направлены на сложную технику, на необычные решения.

Тихон: Самое главное, чтобы зрителям был интересен персонаж, а техника вторична. Она скорее для театроведов, исследователей.

Александр: А главное – это атмосфера, которую вносит в театр руководитель. Сергей Васильевич очень тонко подходит к индивидуальности каждого, старается дать возможность высказаться, помогает. Когда он нас набирал, он понимал, что все разные, у каждого своя природа. И он поддерживал эту природу, старался не поломать, обращался с нами бережно, аккуратно.

– Что вы могли бы пожелать нашему сайту? Каким вам бы хотелось его видеть?

Тихон: Было бы здорово, если бы это был не просто сайт. Важно, чтобы он вел людей в книжные магазины, в театры.

Мириам: В Европе есть такая штука, как “Алло, стоп!” Через Интернет ты пишешь, что хочешь попасть в какой-то город или страну. И кто-то тебе отвечает, что едет на красной машине и через три дня будет там-то. Договариваемся, что разделим бензин и поедем! И вот у тебя уже есть попутчик. Как было бы приятно таким образом находить себе попутчиков съездить, например, в Питер, в Мариинку или на премьеру к Додину. И не только приехать, но и заказать билеты через сайт, чтобы точно попасть на спектакль. А еще неплохо бы, например, узнавать о новых спектаклях в других городах. Вот тогда бы сайт стал функционален.

Александр: А ещё было бы здорово устроить не просто интервью с труппой, а свести вместе несколько молодых артистов, наших сверстников из московских театров…

Александр: Что-то на манер театральной гостиной.

Тихон: Тогда бы и обмен мнениями состоялся. У разных трупп ведь разное видение, – больше простора для дискуссии.

вся пресса

«Еду в какую-то дыру»: жена военного описала бытовые трудности

Не все становятся генеральшами

Только на моей памяти отношение к военнослужащим советской (российской) армии в обществе менялось трижды. Я помню 80-е, когда «косить» считалось постыдным, и мальчишки уходили служить, чтобы потом в компании друзей с гордостью рассказывать о пережитом. О тех, кто все же каким-то образом избегал «срочки», презрительно говорили: «Да какой он мужик».

Девчонки тоже не особо жаловали таких кавалеров. Курсанты и офицеры – это вообще была особая прослойка общества. И почет тебе, и уважение, и достаток. Так что родные все — от близких, до седьмой воды на киселе — были преисполнены гордостью.

Потом пришли 90-е — развал Союза и вместе с ним доблестной Советской армии. Подмена ценностей и понятий, падение нравственности. Жизнь по талонам и задержка заработной платы. Так, конечно, жила вся страна, не только военные. Но от водителя трамвая не требуется в случае необходимости жизнь отдать за мирное небо над головами других. А военнослужащий обязан. Он присягу дал. Вот и пришли мы постепенно к тому, что желающих служить становилось все меньше и меньше.

В конце первого десятилетия XXI века начался новый этап, который привел к коренному изменению облика Российской армии. Сегодня наши Вооруженные силы стали законным правопреемником доблестной Советской армии, гордостью и опорой страны.

Военнослужащие, прошедшие через все эти тяготы и не изменившие выбранному жизненному пути, вызывают глубочайшее чувство уважения. Равно как и их спутницы, чей каждодневный подвиг почти всегда остается в тени. Ведь жена военного — это не просто супруга. Она и боевая подруга, и надежный тыл. Во многом благодаря их самоотверженности, из лейтенантов получаются генералы. Все же помнят крылатую фразу из кинофильма «Москва слезам не верит»: «Чтоб генеральшей стать, надо за лейтенанта замуж выходить, да помотаться с ним по гарнизонам лет двадцать».

Генеральшами, конечно, становятся далеко не все, а вот возможность прочувствовать на себе прелести гарнизонной жизни достается большинству женщин, решивших связать свою судьбу с защитником Отечества.

Еду в какую-то дыру

— В этом году было ровно 35 лет, как мы вместе, — рассказывает моя собеседница, жена отставного мичмана, Елена. — Даже самой иногда не верится. Я с родителями тогда жила в Подмосковье. У нас были родственники, которые проживали в закрытом военном городке. И я очень любила, когда мы приезжали к ним в гости на майские праздники. Там царила какая-то своя атмосфера, не похожая на жизнь обычных городов.

Вот вы спрашиваете, думала ли я, что стану женой военного. Подобной цели как таковой у меня, конечно, не было. Но выйти замуж за военного было престижно, и так считали, как мне кажется, все девчонки. В военные учебные заведения шли в основном из семей военнослужащих. Это были люди, которые действительно хотели защищать Родину. Их воспринимали, как сильных, мужественных и, понятно, что девушкам они нравились.

— Не пугала перспектива отправиться вслед за мужем в какой-нибудь далекий гарнизон?

— Об этом даже не думали. И я не думала, пока не встретила своего суженого. Это было в 1986 году, мне уже исполнилось 23. К тому времени я окончила институт, была взрослым, самостоятельным человеком. По крайней мере, мне так казалось. Получила в Москве хорошее распределение на работу, прямо в центре, как и хотела всегда. На работу мне надо было выходить 1 августа.

Лето, каникулы, и я в июле поехала навестить бабушку в Кронштадт. В городе, как и полагается, был Дом офицеров. Туда все очень любили ходить. Там и кино показывали, и танцы были. В один из вечеров мы с двоюродной сестрой как раз гуляли недалеко, начался дождь, и мы забежали в Дом офицеров. Я до этого ни разу там не была. Решили пройтись, посмотреть интерьер. Там, к слову, очень красиво: огромные залы, двери старинные, аквариумы большие.

Нагулявшись вдоволь, присели отдохнуть. И тут к нам подходят два молодых человека в курсантской форме и приглашают танцевать. Оказалось, они будущие мичманы. Мы сначала отказывались, а они все подходят и подходят. В общем, все-таки согласились. 

Алексей, мой будущий супруг, во время первого же танца меня и спросил: «А ты веришь в любовь с первого взгляда?» Я ему, видимо, очень понравилась, а он мне как-то не особо тогда. Провожать они нас не пошли, потому что заканчивалась у них увольнительная, но он попросил мой адрес. Я написала улицу и говорю: «А дом сам найдешь, если захочешь». У меня даже мысли не было, что он будет ходить по всем домам и искать меня.

Представляете, с друзьями за неделю обошел все дома и нашел. Еще неделю мы пообщались, а потом я уехала домой, мне же на работу надо. Стали переписываться. У нас до сих пор дома письма эти хранятся, целая стопка. Сейчас люди, наверное, вообще не пишут друг другу письма.

В ноябре у него закончилась учеба. 14 ноября он приехал ко мне, 15 мы поженились, и через пару дней я уехала «по месту службы мужа»… в Киргизию.

Я такая театралка, постоянно на спектакли ходила, стихи читала. Вся возвышенная. И еду в какую-то дыру.

— Там деревня какая-то была?

— Село, называлось Спартак. И в нем был военный городок. В плане удобств на самом деле, оказалось не все так ужасно. Я готовила себя к худшему, если честно. Нам сразу дали квартиру в новом доме, с газом и водой. Во дворе у нас был вишневый сад и детская площадка. Через год у нас родился сын, еще спустя два года дочка.

— Что самое сложное было для вас?

— Муж все время на службе, я его и не видела почти. У него то учения, то курсы, куда ты не можешь поехать вместе с ним, то тревоги ночные, постоянная боевая готовность. В любое время дня и ночи его могут поднять по тревоге, и он уедет. Может, на день, а может — на неделю. А значит, ты все учишься делать сама. И дети на тебе.

— Были моменты, что хотелось забрать детей и уехать к маме?

— Ой, да конечно, были, — смеется Елена. — Мне кажется, если бы мы поближе жили, я, может, так и сделала бы. Так что расстояние порой на пользу.

Суп варили кипятильником

— Как изменилась жизнь после распада Советского Союза?

— Это было очень тяжелое время. Для всех. Но люди всегда находят какой-то выход. Вот и мы — построили гараж, завели кроликов, поросенка. Все знакомые удивлялись, как это городская девчонка за хозяйством ухаживает. А что делать? Хотя сейчас иногда думаю: «Как мы вообще выжили?» Помню, закончился газ, а электрической плитки у нас не было. Тогда же и в магазинах ничего не было. В Москве хоть по талонам, а у нас, вообще — пустые прилавки. 

Мне приходилось суп варить кипятильником. Вы пробовали хоть раз так делать? Потом нам подтвердили перевод в Москву, и мы отправили контейнер с вещами. Но оказалось, что какие-то бумаги где-то подвисли в штабах, и мы полгода жили в пустой квартире. Спали на матрасе, одежды почти нет. Наступает зима, а мы без теплых вещей. Продали гараж за 65 сомов и на эти деньги купили детям куртки. Вспоминаю сейчас, как страшный сон.

— Многие же в то время уволились из армии и пошли в коммерческие структуры, где платили. Вы никогда не говорили мужу: «Да бросай уже свою службу»?

— Нет. Он выбрал эту профессию и хотел служить. Я не могла на него давить, это было бы неправильно. Тогда мы и решили, что надо переводиться в столицу. Но сказать — это одно, а сделать — другое. Со всеми бюрократическими проволочками перевод у нас занял почти три года. Наверное, можно было бы быстрее куда-то в другое место, но я хотела, чтобы у моих детей было хорошее образование, поэтому настаивала, что только в Москву или Подмосковье. Чтобы перевестись в Генштаб мужу пришлось отказаться от служебного жилья по выслуге лет.

— Как это?

— Вот так. Это было таким условием, и муж подписал отказ. В 1998 году нас все-таки перевели в Москву. Я устроилась работать в архив Министерства обороны. Военных тогда опустили ниже плинтуса, зарплаты задерживали и мужу и мне. Через полгода мне пришлось уйти и устроиться в банк, чтобы хоть было чем семью кормить. Супруг подрабатывал в охране, тогда многие военные так делали. В 2008 году муж принял решение уйти из армии.

— Если бы отмотать жизнь назад, вы вышли бы замуж за военного?

— Даже не знаю. Одно могу сказать точно — что трудности можно пережить, только когда по-настоящему любишь человека.

Морфологический разбор местоимения «какую-то» онлайн. План разбора.

Для слова «какую-то» найден 1 вариант морфологического разбора

  1. Часть речи. Общее значение
    Часть речи слова «какую-то» — местоимение
  2. Морфологические признаки.
    1. какой-то (именительный падеж единственного числа)
    2. Непостоянные признаки:
      • винительный падеж
      • единственное число
      • женский род.
  3. Может относится к разным членам предложения.

Поделитесь страницей с друзьями — это

лучшая благодарность

Морфологический разбор другого слова

План разбора местоимения

  1. Часть речи. Общее значение
  2. Морфологические признаки.
    1. Начальная форма (именительный падеж, единственное число)
    2. Постоянные признаки:
      • Разряд
        • личное
        • возвратное
        • вопросительное
        • относительное
        • неопределённое
        • отрицательное
        • притяжательное
        • указательное
        • определительное
      • Лицо (у личных местоимений)
      Непостоянные признаки:
      • Падеж
      • Число (если есть)
      • Род (если есть)
  3. Синтаксическая роль (подчеркнуть как член предложения, является главным или второстепенным членом предложения)

Поделитесь страницей с друзьями — это

лучшая благодарность

Оцени материал

5 голосов, оценка 4. 2 из 5

План разбора составлен на основе общих правил, в зависимости от класса и предпочтений учителя ответ может отличаться. Если ваш план разбора отличается от представленного, просто сопоставьте его с данными нашего ответа.

Если морфологический разбор местоимения «какую-то» имеет несколько вариантов, то выберите наиболее подходящий вариант разбора исходя из контекста предложения.

 Разборы производились исходя из заложенного программного алгоритма, результаты в редких случаях могут быть недостоверны, если вы нашли несоответствие пожалуйста сообщите нам. Представленный результат используется вами на свой страх и риск.

Евгений ПЕНЦАК:« Химия — интересный квест, когда пытаешься разрешить какую-то загадку» » Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт органической химии имени Н. Д. Зелинского РАН

3 ноября 2016 г.

Евгений Пенцак — инженер-исследователь Института органической химии РАН. В своей работе Евгений и его коллеги описали способ обнаружения дефектов на графеновой поверхности. Они разработали метод определения тысяч дефектов в углеродном материале с помощью стандартного микроскопического оборудования.

Кандидат химических наук Евгений Пенцак занимается реакциями кросс-сочетания, гетерогенным катализом, углеродными и металлическими наноструктурами, которые он исследует методом сканирующей электронной микроскопией.


Он признался, что химия для него не только работа, но и определенное увлечение:

— Такой интересный квест, когда пытаешься разрешить какую-то загадку, а разрешение загадки приносит удовлетворение.

По его словам, самые приятные открытия всегда происходят неожиданно. Чаще всего, когда ищешь что-то конкретное, пытаешься решить определенную проблему, и потом вдруг замечаешь совершенно другую вещь, которую не искал, но которая кажется настолько необычной и удивительной, что заставляет поменять исследовательскую задачу и сконцентрировать все свое внимание уже на этом новом предмете.

— Когда начинаешь выяснять, в чем причина необычного явления, то открываешь что-то новое,— считает молодой ученый.

К примеру, в статье «Пространственное отображение углеродных реакционных центров в каталитических системах Pd/C» о дефектах на графеновых поверхностях на явление визуализации дефектов наночастицами палладия молодой ученый натолкнулся случайно при микроскопических исследованиях, когда сам того и не ждал.

Графен — это одиночный плоский лист, состоящий из атомов углерода, связанных между собой и образующих решётку, каждая ячейка которой напоминает пчелиную соту. Расстояние между ближайшими атомами углерода в графене составляет около 0,14 нм.Выдающиеся качества графена во многом зависят от его строения: чем меньше дефектов, тем лучше свойства. Но углеродные дефекты могут иметь различные размеры и формы, а динамическая природа не позволяют оперативно обнаружить их с помощью обычных аналитических методов. Детальное исследование больших пространств графеновых поверхностей для выявления дефектных участков требует серьёзных затрат времени.

В своей работе Евгений и его коллеги описали способ обнаружения дефектов на графеновой поверхности. Они разработали метод определения тысяч дефектов в углеродном материале с помощью стандартного микроскопического оборудования. Для этого палладий стали использовать в качестве маркера дефектов, так как он взаимодействует с дефектными центрами и прикрепляется селективно к ним. Молекулы палладия прикрепляются к поврежденным участкам графена, что приводит к формированию наночастиц. Их можно обнаружить при помощи электронного микроскопа.



— Происходит визуализация дефектов на поверхности. Зачем это нужно? Каждый дефект является химически активным центром, и если происходят какие-то реакции на графеновой поверхности, то они в первую очередь идут на дефектных центрах, на центрах с измененной электронной плотностью. Дефект на поверхности меняет не только геометрию поверхности, но и химические свойства материала вокруг этого места.

В свою очередь выделение дефектных центров с помощью палладиевых маркеров даёт уникальную возможность изучить реакционную способность графеновых слоёв. Как правило, при нанесении на подложку наночастицы палладия распределяются на поверхности носителя равномерно и хаотично. Но исследуя один образец за другим, ученые обнаружили, что в некоторых случаях наночастицы металла образуют определенные упорядоченные структуры, выстраиваясь в линии и формируя необычные геометрические узоры.

— Это было очень необычно. Было непонятно, почему наночастицы образуют такие упорядоченные структуры. Мы определили, что это является результатом прикрепления атомов металла к дефектам, а уже сами дефекты распределены на частицах графита по определенным схемам»,- рассказал молодой ученый.

Как показывают полученные результаты, с помощью этого метода можно исследовать зависимость активности и селективности катализатора от типа дефектов, к которым прикрепляются металлические наночастицы, и схем их распределения.

— Мы планируем использовать этот метод для получения более совершенных катализаторов, с большей селективностью и активностью. Эти катализаторы в дальнейшем смогут применяться в фармацевтике, агрохимии и для получения множества других продуктов тонкого органического синтеза. Кроме того, результаты исследования повлияют на многие другие отрасли химии и физики, связанные с применением углеродных материалов, — поделился
Е. Пенцак.


 [1] Pentsak E.O., Kashin A.S., Polynski M.V., Kvashnina K.O., Glatzel P., Ananikov V.P., »Spatial imaging of carbon reactivity centers in Pd/C catalytic systems»,
Chemical Science,2015, 6 (6), pp. 3302-3313.
DOI: 10.1039/c5sc00802f

суд дает рекомендации по применению анализа «расово поляризованного голосования» к оспариванию закона штата Калифорния об избирательных правах | Best Best & Krieger LLP

Решение апелляционного суда по делу Yumori-Kaku et al. против города Санта-Клара

Используемый городом Санта-Клара метод избрания членов городского совета в целом, при котором каждый член совета избирается всеми избирателями города, нарушил Закон штата Калифорния об избирательных правах, принятый апелляционным судом штата Калифорния в конце прошлого года. Шестой окружной апелляционный суд постановил, что средство правовой защиты, требующее от города перехода к выборам в районный городской совет, не нарушает положения о равной защите. Он определил, что CVRA продолжает применяться к чартерным городам и не ущемляет их полномочия контролировать порядок избрания их должностных лиц. Наконец, суд подтвердил решение суда первой инстанции о присуждении более 3 миллионов долларов в качестве гонораров адвокатов и судебных издержек истцам, а также возместил расходы истцов по апелляции.

В Юмори-Каку и др. против города Санта-Клара , пятеро жителей американцев азиатского происхождения подали в суд на город, утверждая, что городские выборы членов совета на свободе нарушили CVRA и что «расово поляризованное голосование» между выборами избирателей азиатско-американских и неамериканских избирателей Американские избиратели азиатского происхождения не позволяли американцам азиатского происхождения избирать кандидатов по своему выбору в городской совет. Истцы обратились в суд с требованием, чтобы городские власти провели районные выборы, а также гонорары и расходы на адвокатов.
Суд первой инстанции постановил, что CVRA предвосхитил положение устава города, устанавливающее выборы на свободе. Затем суд первой инстанции на основе статистического анализа, представленного в суде, установил, что:

  1. «расово поляризованное голосование» имело место на пяти из 10 выборов в городской совет в 2002 и 2016 годах, и что американцы азиатского происхождения проголосовали сплоченно как блок в шести из этих гонок, и
  2. «расово поляризованное голосование» присутствовало на четырех из девяти школьных выборов в период с 2000 по 2016 год.

В результате суд первой инстанции установил, что городские власти нарушили CVRA, и постановил, в качестве средства правовой защиты, чтобы городские власти провели районные выборы на шесть мест в городской совет и сохранили систему выборов мэра в целом, начиная с с выборами в ноябре 2018 г.

Городские власти также оспорили использование судом первой инстанции статистических доказательств в поддержку своего вывода о «расово поляризованном голосовании». В апелляции городские власти утверждали, что эти статистические данные не свидетельствуют о «расово поляризованном голосовании» — что блок с большинством голосов (европеоидные избиратели) «обычно» голосовал за поражение кандидата, которого предпочитали избиратели азиатско-американского происхождения.Городские власти утверждали, что «обычно» означает «более 50 процентов».

Апелляционный суд постановил, что демонстрации истцами «расово поляризованного голосования» на пяти из десяти последних выборов в городской совет было достаточно. Суд постановил, что в соответствии с CVRA, когда фактические выводы показывают равное количество поляризованных и неполяризованных выборов с течением времени, суд первой инстанции может признать, что имело место «расово поляризованное голосование». Отказываясь от строгого математического теста, суд мотивировал это тем, что этот правовой стандарт требует учета местных обстоятельств и взвешивания факторов. Удовлетворяют ли повторяющиеся случаи «расово поляризованного голосования» требованию «обычно», зависит от местного контекста и фактических обстоятельств.

Кроме того, апелляционный суд отклонил требования городских властей о том, что средства правовой защиты в виде выборов в округах нарушают пункт о равной защите. Суд сослался на дело Sanchez v. City of Modesto (2006 г.), установив, что применимым стандартом является только пересмотр на рациональной основе, и, следовательно, средство правовой защиты не нарушает принцип равной защиты. В соответствии с тестом на «рациональную основу» большинство правительственных постановлений, включая мандат CVRA, выдержат испытание на равную защиту.

Затем городские власти утверждали, что в соответствии с Конституцией Калифорнии чартерный город имеет полномочия решать, каким образом избираются члены его городского совета, включая выборы в целом. Суд отказался отступить от решения 2014 года по делу Jauregui v. City of Palmdale , , в котором было установлено, что CVRA имеет преимущественную силу, противоречащую положениям устава. Суд также отметил, что с тех пор Законодательное собрание кодифицировало владение в Палмдейл , чтобы прямо сделать положения устава подпадающими под действие CVRA.Установив, что суд первой инстанции не допустил ошибки, суд подтвердил присуждение гонораров адвокатов и судебных издержек, а также присудил истцам их судебные издержки по апелляции.

Решение Апелляционного суда по делу Санта-Клара усложнит для городов и государственных учреждений защиту от претензий CVRA к их избирательным системам на свободе, особенно в отношении опровержения третьего фактора Gingles , поскольку суд отклонил строгий количественный порог, чтобы измерить, достаточно ли большинство проголосовало как блок, чтобы позволить ему «обычно» победить кандидата, которого предпочитает меньшинство.

Государственные учреждения в настоящее время ожидают решения Верховного суда Калифорнии по делу Pico Neighborhood Association против города Санта-Моника после решения апелляционного суда в пользу города Санта-Моника в отношении иска истца CVRA.

[Исходный код]

Город Санта-Клара — Руководство пользователя

Добро пожаловать в информационный центр общественных собраний города Санта-Клара. Этот сайт обеспечивает быстрый и простой онлайн-доступ к городскому совету и властям, администрации стадиона, комитетам, советам и комиссиям, повесткам дня заседаний, протоколам и видео/аудиозаписям с марта 2018 года по настоящее время.

Санта-Клара является Чартерным городом и имеет городской совет, состоящий из семи членов, которые в настоящее время избираются в целом по местам для формулирования политики города. Избиратели рассмотрят вопрос о голосовании 5 июня 2018 года, и, если он будет принят, город проведет окружные выборы с использованием рейтингового голосования. Для получения дополнительной информации об этом процессе посетите веб-страницу окружных выборов по адресу www.santaclaraca.gov/districtelections

.

Заседания городского совета обычно проводятся два раза в месяц по вторникам в 19:00, а собрания администрации стадиона проводятся ежемесячно в 19:00 в залах Совета, расположенных в мэрии по адресу 1500 Warburton Ave. Встречи транслируются в прямом эфире через городские каналы Facebook и YouTube, а также на городском веб-сайте, а также транслируются на городском канале доступа местного самоуправления. Участие и вклад общественности приветствуются. Чтобы быть в курсе собраний и повесток дня, подпишитесь на раздел «Электронное уведомление города одновременного заседания Совета и властей» на странице регистрации электронного уведомления по адресу www.santaclaraca.gov/enotify

.

В попытке предоставить предварительный график предстоящих вопросов политики, предварительный календарь повестки дня собрания (TMAC) доступен для просмотра.Однако обратите внимание, что пункты, перечисленные в TMAC, часто меняются и не являются абсолютными датами для рассмотрения. Чтобы просмотреть текущую версию, посетите веб-страницу TMAC по адресу www.santaclaraca.gov/TMAC. TMAC будет публиковаться еженедельно не позднее 17:00 пятницы на этой городской веб-странице. Опять же, мы призываем представителей общественности подписаться на eNotify, чтобы получать оповещения, когда окончательные повестки дня будут опубликованы на веб-сайте.

Чтобы получить доступ к повесткам дня и записям собраний, состоявшихся до марта 2018 года, перейдите на вкладку «Архивы».Это приведет вас к предыдущей системе управления повесткой дня города. Обратите внимание, что поиск в этой устаревшей системе имеет ограничения и будет искать контент только между августом 2008 г. и февралем 2018 г. Для получения записей до августа 2008 г. обращайтесь в офис городского клерка по телефону (408) 615-2212.

Вы можете просматривать Информационный центр открытых собраний с помощью вкладок в верхней части экрана:

ПОИСК

Простой поиск пунктов повестки дня:

Пункты повестки дня можно искать по следующим критериям:

  1. Ключевое слово
  2. Дата
  3. Тело встречи
  4. Действие
  5. Идентификационный номер файла

Расширенный поиск пунктов повестки дня:

В дополнение к простому поиску доступен расширенный поиск пунктов повестки дня, включая выбор нескольких различных параметров. Этот вариант поиска наиболее удобен, когда вы ищете пункт повестки дня с определенными критериями поиска, например между диапазонами дат или с операторами. Чтобы узнать больше о советах по поиску, выберите параметр «Справка» в меню поиска.

По другим вопросам о повестке дня или действиях, предпринятых на собраниях, звоните в офис городского секретаря по телефону (408) 615-2220 или по электронной почте [email protected]

КАЛЕНДАРЬ СОВЕЩАНИЙ

Просмотр повестки дня заседаний, протоколов и записей Совета и властей, администрации стадиона и советов/комиссий.Вкладка «Собрания» имеет два представления: представление списка и представление календаря. Представление списка отображает собрания в указанном диапазоне дат в виде списка. Представление календаря отображает их в виде календаря.

Видео- и аудиозаписи

Совет и власти, Управление стадиона и Комиссия по планированию транслируются в прямом эфире на веб-сайте города и в аккаунтах города на Facebook и Youtube. Стенограммы со скрытыми субтитрами доступны для каждой видеозаписи собрания в виде примечаний к субтитрам на вкладке «Календарь».

С начала лета 2018 года заседания Правления/Комиссии будут записываться на аудио и доступны в Интернете. Обратите внимание, что в настоящее время заседания Правления/Комиссии не записываются на видео.

СОВЕТ И ВЛАСТИ

Просмотрите информацию о заседании городского совета, выбрав вкладку «Совет и органы власти». Используйте раскрывающееся меню «Имя органа», чтобы выбрать «Городской совет».

Дополнительную информацию о городском совете города Санта-Клара можно найти на странице городского совета на городском веб-сайте.

Администрация стадиона
Просмотрите информацию о собрании администрации стадиона, выбрав вкладку «Совет и власти». Используйте раскрывающееся меню «Имя тела», чтобы выбрать и «Администрация стадиона».

Дополнительную информацию об управлении стадиона Санта-Клара можно найти на странице управления стадионом на веб-сайте города по адресу: www. santaclaraca.gov/scsa

.

 

СОВЕТ И КОМИССИИ

Просмотрите информацию о Правлении, Комиссии и Комитете, выбрав вкладку Правление и Комиссия.Используйте раскрывающееся меню «Имя органа», чтобы выбрать законодательный орган для просмотра дат заседаний, подробностей, повестки дня, протоколов и информации о аудиозаписи.

Дополнительную информацию о комитетах, советах и ​​комиссиях можно найти на страницах комитетов городского совета и советов и комиссий на городском веб-сайте.

По вопросам, касающимся законодательства или информации об общественных собраниях города Санта-Клара, звоните в офис городского секретаря по телефону (408) 615-2220 или по электронной почте [email protected]правительство

Органические вещества в северо-восточной части Тихого океана и их влияние на гигроскопичность аэрозолей в режимах недонасыщения и перенасыщения

  13 сентября 2006 г.

13 сентября 2006 г.

К. К. Каку 1 , Д. А. Хегг 1 , Д. С. Коверт 1 , Дж. Л. Сантарпия 2 , Х. Йонссон 3 , Г. Бузориус 3 и Д.Р. Коллинз 4 К. С. Каку и соавт. К. К. Каку 1 , Д. А. Хегг 1 , Д. С. Коверт 1 , Дж. Л. Сантарпия 2 , Х. Йонссон 3 , Г. Бузориус 3 и Д. Р. Коллинз 4
  • 1 Департамент атмосферных наук, Сиэтл, Вашингтон, США
  • 2 Химико-биологический центр Эджвуда, Абердинский испытательный полигон, Мэриленд, США
  • 3 CIRPAS, Департамент исследований, Калифорния, США, Марина
  • 4 Техасский университет A&M, факультет атмосферных наук, Колледж-Стейшн, Техас, США
  • 1 Департамент атмосферных наук, Сиэтл, Вашингтон, США
  • 2 Химико-биологический центр Эджвуда, Абердинский испытательный полигон, Мэриленд, США
  • 3 CIRPAS, Департамент исследований, Калифорния, США, Марина
  • 4 Техасский университет A&M, факультет атмосферных наук, Колледж-Стейшн, Техас, США
Скрыть сведения об авторе Летом 2004 года в северо-восточной части Тихого океана самолетами было собрано

пробы аэрозолей, и они были сопоставлены с результатами измерений гигроскопичности аэрозолей. Химический анализ образцов показал, что значительная часть морских аэрозолей была органической, и в среднем 8% от общей массы аэрозоля составляли нерастворимые органические вещества, предположительно связанные с естественными морскими выбросами. Были исследованы две химические модели в попытке добиться сходства между химическими и физическими свойствами морского аэрозоля путем воспроизведения наблюдаемого роста аэрозоля как в режимах недонасыщения, так и перенасыщения. Результаты показывают, что при недостаточной относительной влажности неидеальное поведение активности воды по отношению к химическому составу аэрозоля оказывает важное влияние на рост аэрозоля.При пересыщении недооценка критических пересыщений всеми моделями предполагает гипотезу о том, что образование полного монослоя нерастворимыми органическими соединениями может ингибировать активацию аэрозолей с образованием облачных капель.

Одномоментная резекция опухоль легкого после сердечно-сосудистой хирургии — Kaku et al 2015a

Резюме

Фон

Опухоль легкого иногда обнаруживается при компьютерной томографии (КТ) органов грудной клетки перед кардиохирургическим вмешательством.

Назначение

В этом исследовании мы изучили клиническое течение пациентов, перенесших одномоментную резекцию опухоли легкого после операции на сердце.

Методы

С 2008 по 2013 г. 18 пациентам (13 мужчин и 5 женщин) со средним возрастом 69,8 лет в нашем стационаре выполнена клиновидная резекция легкого по поводу опухоли легкого через срединную торакотомию после сердечно-сосудистых операций. Сердечно-сосудистые операции включали аортокоронарное шунтирование (АКШ) без искусственного кровообращения у шести пациентов, замену аортального клапана и/или пластику митрального клапана у 10 пациентов, тотальную замену дуги у 10 пациентов и замену нисходящей аорты у 10 пациентов.

Результаты

Осложнений, связанных с резекцией легкого, не наблюдалось. При патологоанатомическом исследовании у 15 больных (83,3%) диагностирован рак легкого, в том числе 13 аденокарцином и 2 плоскоклеточного рака, с клинической стадией 1А у 13 больных, 2А у 1 больного и 2В у 1 больного. Среди них 5 пациентам в последующем выполнена радикальная резекция легкого, тогда как 10 пациентам не удалось выполнить ее из-за ухудшения сердечно-легочной функции.Анализ Каплана-Мейера у пациентов с раком легкого показал, что 5-летняя выживаемость и выживаемость без прогрессирования (ВБП) через 3 года после операции составили 46,2% и 73,8% соответственно.

Заключение

Одномоментная резекция опухоли легкого после сердечно-сосудистой хирургии безопасно выполняется и полезна для патологической диагностики опухоли. Необходимы дальнейшие исследования, однако эта процедура может способствовать сдерживанию прогрессирования рака легких у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями и сопутствующими заболеваниями.

Ключевые слова

сердечно-сосудистая хирургия, рак легкого, симультанная хирургия, торакальная хирургия

1. Введение

Рак легких является ведущей причиной смерти мужчин от рака в Азиатско-Тихоокеанском регионе и во всем мире, 1 ; 2 , и на его долю приходилось 13% (1,6 миллиона) от общего числа случаев рака и 18% (1,4 миллиона) смертей в 2008 г. 1 В Японии общее количество операций на торакальной хирургии в 2012 г. % этих случаев перенесли операцию по поводу рака легкого. 3 Число пациентов с диагнозом «рак легкого» неуклонно растет, что приводит к увеличению числа пациентов, перенесших торакальные операции. Кроме того, количество сердечно-сосудистых операций у взрослых в Японии в 2012 г. составило > 50 000. .

Также увеличивается число случаев рака легкого, сочетающегося с сердечно-сосудистыми заболеваниями.Наибольшую трудность для хирургов представляют случаи случайной опухоли легкого, которая выявляется с помощью компьютерной томографии (КТ) органов грудной клетки до проведения сердечно-сосудистых операций. Джонсон и его коллеги рассмотрели 3364 последовательных пациента, перенесших аортокоронарное шунтирование (АКШ), и сообщили, что у 191 пациента (5,7%) были легочные узлы. 4 В отличие от случаев легочных узелков с кальцификацией, для легочных узлов, подозреваемых на рак легкого, у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями еще предстоит разработать рекомендации по диагностике и лечению легочных узлов.

Для постановки диагноза случайной опухоли легкого, обнаруженной перед сердечно-сосудистой операцией, пациенты проходят стандартные радиологические и серологические исследования, которые отчасти полезны для диагностики. Тем не менее, врачи, по-видимому, неохотно проводят исследования для получения патологического диагноза опухоли перед сердечно-сосудистыми операциями из-за плохой сердечно-сосудистой функции пациентов. Таким образом, некоторые врачи могут рассмотреть возможность проведения бронхоскопии после сердечно-сосудистых операций; однако существует повышенный риск кровотечения после трансбронхиальной биопсии легкого (ТБЛБ) из-за введения антикоагулянтов после сердечно-сосудистых операций. 5

Чтобы решить эту дилемму, мы выполнили одномоментную резекцию опухоли легкого во время сердечно-сосудистой хирургии. В предыдущих работах по этой хирургической процедуре были включены пациенты, перенесшие радикальную операцию, такую ​​как лобэктомия или пневмонэктомия, по поводу рака легкого и сердечно-сосудистой хирургии одновременно. 6; 7; 8 ; 9 Легочное сосудистое русло уменьшается путем лобэктомии или пневмонэктомии, что вызывает серьезную нагрузку на сердечную функцию. Таким образом, хотя сообщалось, что эта хирургическая процедура безопасна, послеоперационные осложнения могут увеличиться из-за радикальной операции на легких.

Учитывая это, при сердечно-сосудистых операциях было принято решение о проведении одномоментной клиновидной резекции случайно выявленной опухоли легкого, выявленной до сердечно-сосудистой операции. Ранее мы сообщали о ранних и среднесрочных результатах этой процедуры, демонстрируя, что не было ни операционной смертности, ни каких-либо серьезных сердечных осложнений, связанных с ней, и что средняя выживаемость без прогрессирования (ВБП) составила 17 месяцев. 10

В настоящем отчете, который включал больше пациентов, чем в предыдущем отчете, безопасность и эффективность этой процедуры оценивались ретроспективно.Здесь мы сообщаем, что эта процедура может быть безопасно выполнена и полезна для получения патологического диагноза случайных опухолей легких. Кроме того, эта процедура может быть полезна для контроля прогрессирования рака легких у пациентов с тяжелыми сердечно-сосудистыми заболеваниями.

2. Пациенты и методы

2.1. Пациенты

С февраля 2008 г. по апрель 2013 г. случайные опухоли легких были обнаружены с помощью предоперационной КТ органов грудной клетки у 18 пациентов, которым в нашем госпитале была назначена сердечно-сосудистая хирургия (табл. 1).Средний возраст составлял 69,8 года, и пациенты состояли из 13 мужчин и пяти женщин, ни у кого из которых не было никаких симптомов, связанных с опухолью легкого. Сердечно-сосудистые операции, которые были запланированы, были следующими: КШ без искусственного кровообращения у шести пациентов, замена аортального клапана и/или пластика митрального клапана у девяти пациентов, замена аортального клапана и полная замена дуги у одного пациента, полная замена дуги у одного пациента и протезирование нисходящей аорты у одного пациента. При предоперационной компьютерной томографии у 11 пациентов были локализованы опухоли в правом легком (7 верхних, 2 средних, 2 нижних) и 7 больных в левом легком (2 верхних, 5 нижних). Во всех случаях по данным предоперационной КТ грудной клетки легочные опухоли были заподозрены как рак легкого, при этом не наблюдалось ни прикорневой лимфаденопатии, ни масс средостения. Были проведены общие предоперационные обследования для сердечно-сосудистой хирургии, такие как КТ головного мозга и тесты функции легких. Для постановки патологоанатомического диагноза опухоли легкого выполняли цитологическое исследование мокроты, а ТБЛБ и пункционную биопсию под контролем КТ предоперационно не планировали.

Таблица 1.Характеристики пациентов.
Возраст (медиана) 50∼86 (69,8)
Пол
Мужской (%) 13 (72)
 Женщины (%) 5 (28)
Сердечно-сосудистая хирургия
OPCAB (%) 6 (33)
 AVR и/или MVP (%) 9 (50)
 AVR и TAR (%) 1 (5. 6)
Смол (%) 1 (5,6)
 ДАР (%) 1 (5,6)
Местоположение опухоли легкого
Правое легкое (%) 11 (61)
Верхний 7
 Средний 2
 Нижний 2
 Левое легкое (%) 7 (39)
Верхний 2
 Нижний 5

ПАК = замена аортального клапана; DAR = замена нисходящей аорты; ПМК = пластика митрального клапана; OPCAB = аортокоронарное шунтирование без искусственного кровообращения; TAR = полная замена дуги.

2.2. Хирургическая процедура

Информированное согласие на выполнение одномоментной резекции опухоли легкого было получено от всех пациентов до операции. Во время операции пациенту была введена двухпросветная эндотрахеальная трубка. Срединная стернотомия выполнена 17 больным, левосторонняя заднебоковая торакотомия — 1 больному. После завершения сердечно-сосудистой операции и введения протамина выполняли клиновидную резекцию опухоли легкого автоматическим шовным инструментом через срединную стернотомию или заднебоковую торакотомию слева; следовательно, для резекции легкого не требовалось дополнительного разреза.Прикорневые и медиастинальные лимфатические узлы не исследовались.

2.3. Статистический анализ

Общую выживаемость (ОВ) и ВБП после одномоментной резекции легкого оценивали по методу Каплана-Мейера. Для сравнения времени выживания в разных группах пациентов использовали логарифмический ранговый критерий.

3. Результаты

3.1. Операционная смертность и хирургические осложнения

Летальных исходов во время операции или госпитальной летальности у пациентов, перенесших одномоментную резекцию опухоли легкого во время сердечно-сосудистых операций, не наблюдалось.Что касается хирургических осложнений, то нас больше всего беспокоили грудные кровотечения вследствие клиновидной резекции опухоли легкого; однако этого не произошло ни у одного пациента, и, следовательно, ни одному пациенту не потребовалась повторная торакотомия. Нас также беспокоил повышенный риск утечки воздуха и пневмонии после одновременной резекции легкого; однако этого не произошло ни у одного пациента. Кроме того, одновременная резекция легкого не увеличивала частоту других сердечно-сосудистых хирургических осложнений, таких как периоперационный или послеоперационный инфаркт миокарда, тампонада сердца и инсульт.

3.2. Патологические диагнозы опухолей легких

Среди 18 пациентов у трех пациентов были диагностированы доброкачественные опухоли, в том числе гранулема (1 пациент), воспалительная опухоль (1 пациент) и тератома (1 пациент) (табл. 2). У остальных 15 пациентов был патологически диагностирован немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ), состоящий из девяти аденокарцином, четырех бронхиолоальвеолярно-клеточных карцином и двух плоскоклеточных карцином. Патологические данные также показали, что злокачественные опухолевые клетки не наблюдались в резецированных краях легкого ни у одного пациента.Клинические стадии НМРЛ были определены как 1А у 13 пациентов, 2А у одного пациента и 2В у 1 пациента.

90 280 сегмент + ND1b 90 280 сегмент + ND1b
Таблица 2. Сводная информация о больных раком легкого.
Чемодан Секс Возраст (г) Сердечно-сосудистая хирургия Расположение опухоли Клиническая стадия Радикальная хирургия Патология Прогноз (время от начала операции)
1 М 73 OPCAB + Y-образный трансплантат р.верхний ИА БАК Жив (60 мес.)
2 М 54 ТАР л нижний ИА Лоб + ND1b Адено Жив (59 мес.)
3 М 77 AVR + MVP + лабиринт р. ниже ИА SqCC Жив (53 мес.)
4 М 70 ОРСАВ р. ниже ИИА Лоб + ND1b SqCC Смерть от острого инфаркта миокарда (45 мес.)
5 М 86 ОРСАВ р. верхний ИА Адено Последующая потеря (30 мес.)
6 Ф 78 АВР л нижний ИА Адено Последующая потеря (2 мес.)
7 М 50 ОРСАВ лт.ниже ИА БАК Умершие от рака толстой кишки (8 мес.)
8 М 78 MVP + Bentall + лабиринт л нижний ИА Адено Умершие от рака легких (9 мес.)
9 М 83 ДАР р. верхний ИА Адено Смерть от неизвестной болезни (33 мес.)
10 М 77 АВР р.верхний ИА Адено Жив (28 мес.)
11 М 67 ОРСАВ л верхний ИИБ Лоб + ND1b Адено Умер из-за IP (12 мес.)
12 Ф 75 АВР + ТАР р. середина ИА Адено Жив (14 мес.)
13 Ф 60 ПАК + АКШ лт.ниже ИА БАК Жив (19 мес.)
14 М 63 OPCAB + PVI р. верхний ИА Адено Жив (19 мес. )
15 Ф 78 Лучший игрок р. верхний ИА БАК Последующая потеря (6 мес.)

AAR = замена восходящей аорты; Адено = аденокарцинома; ПАК = замена аортального клапана; BAC = бронхиолоальвеолярно-клеточная карцинома; АКШ = аортокоронарное шунтирование; DAR = замена нисходящей аорты; Лоб = лобэктомия; IP = интерстициальный пневмонит; ПМК = пластика митрального клапана; ND = узловая резекция; OPCAB = аортокоронарное шунтирование без искусственного кровообращения; PVI = изоляция легочных вен; Сегмент = сегментэктомия; SqCC = плоскоклеточный рак; TAR = полная замена дуги.

3.3. Этапная радикальная операция по поводу НМРЛ

Из 15 пациентов с НМРЛ 5 подверглись поэтапной радикальной операции по поводу НМРЛ через 1–14 месяцев после первоначальной симультанной резекции легкого (табл. 2). Патологические стадии их были определены как 1А у трех пациентов, 2А у одного пациента и 2В у одного пациента. Среди них троим пациентам выполнена лобэктомия, двоим – сегментэктомия. Их легочная функция ухудшилась после сердечно-сосудистых операций; однако мы сочли это приемлемым, учитывая преимущества радикальной резекции легкого.Остальные 10 пациентов были сочтены непригодными для дополнительной легочной хирургии из-за низкой сердечно-легочной функции, плохого функционального состояния или тяжелых сопутствующих заболеваний.

3.4. Послеоперационное течение больных НМРЛ

Медиана периода наблюдения за пациентами с НМРЛ составила 19 месяцев, в диапазоне от 2 до 60 месяцев. Два пациента умерли от НМРЛ, а другие умерли от других медицинских проблем, включая сердечную недостаточность, рак толстой кишки и неизвестные причины. Местные рецидивы наблюдались у трех пациентов через 5–12 мес после первичной симультанной резекции легкого.Анализ Каплана-Мейера у всех пациентов с НМРЛ показал, что медиана общей выживаемости составила 45 месяцев (рис. 1А), а медиана ВБП не была достигнута (рис.  1В). ВБП через 3 года после первоначальной одномоментной резекции легкого составила 73,8%, а 5-летняя выживаемость — 46,2%. У пациентов, перенесших этапную радикальную операцию по поводу НМРЛ, медиана ОВ после начальной симультанной резекции легкого составила 45 мес, что, как правило, короче, чем у пациентов, не подвергшихся радикальной операции (медиана ОВ не достигнута, p  = 0.3678) (рис. 2А). Медиана ВБП также имела тенденцию быть короче у пациентов, перенесших этапную радикальную операцию, чем у тех, кто ее не выполнял (11 месяцев по сравнению с не достигнутым, p = 0,2914) (рис. 2B). ВБП через 3 года и 5-летняя выживаемость после первоначальной одномоментной резекции легкого не улучшились при поэтапной радикальной операции по поводу НМРЛ (30,0% против 58,3%, p = 0,3678; 40,0% против 87,5%, p  = 0,2914 соответственно).

Рис 1.

(A) Анализ Каплана-Мейера общего времени выживания пациентов с раком легкого; (B) Анализ Каплана-Мейера по времени безрецидивной выживаемости пациентов с раком легкого.

Рис 2.

(A) Анализ Каплана-Мейера общего времени выживания пациентов с раком легкого после радикальной легочной хирургии; (B) Анализ Каплана-Мейера по времени безрецидивной выживаемости пациентов с раком легкого после радикальной легочной хирургии.

4. Обсуждение

В этом исследовании мы оценили безопасность и эффективность одномоментной резекции опухоли легкого во время сердечно-сосудистой хирургии, продемонстрировав, что эта процедура безопасна и полезна для патологической диагностики опухоли и может контролировать прогрессирование рака легкого у пациентов с высоким риск тяжелых сердечно-сосудистых заболеваний.

Частота периоперационных повторных кровотечений чаще возникает при сердечно-сосудистых операциях, чем при других видах хирургических вмешательств, из-за введения антикоагулянтов.Таким образом, мы заподозрили, что одновременная резекция опухоли легкого во время сердечно-сосудистых операций может увеличить риск периоперационного торакального кровоизлияния. Однако наше исследование показало, что это не так. В предыдущих работах сообщалось, что это довольно редкое осложнение одномоментной резекции легкого во время сердечно-сосудистой хирургии, 6; 8; 11; 12 ; 13 , демонстрируя, что одномоментная резекция легкого не увеличивает значительно риск периоперационного торакального кровотечения в сердечно-сосудистой хирургии.Во всех случаях настоящего исследования резекцию опухоли легкого выполняли после завершения сердечно-сосудистой операции. Оперативным методом по поводу опухоли легкого во всех случаях была клиновидная резекция, менее сложная хирургическая техника. Таким образом, резекция опухоли легкого могла быть выполнена до сердечно-сосудистой хирургии в настоящем исследовании. Однако резекция легкого перед сердечно-сосудистой операцией может вызвать внутрилегочное кровотечение, приводящее к дыхательной дисфункции во время сердечно-сосудистой хирургии.Таким образом, резекцию опухоли легкого проводили после завершения сердечно-сосудистой операции. В последнее время были усовершенствованы автоматические шовные инструменты для резекции легкого, что способствовало снижению частоты периоперационных торакальных кровотечений, несмотря на введение антикоагулянтов.

У пациентов со случайной опухолью легкого TBLB с помощью гибкой бронхоскопии выполняется для патологической диагностики. В некоторых случаях TBLB полезен для получения патологического диагноза опухолей легких.Однако, как видно из настоящего исследования, врачи могут неохотно выполнять бронхоскопию перед сердечно-сосудистыми операциями из-за нестабильной сердечной функции. Если TBLB выполняется после операции, риск кровотечения может увеличиться из-за введения антикоагулянтов. Кроме того, бронхоскопия, по-видимому, менее подходит для патологической диагностики по сравнению с обнаружением помутнения большого стекла, обнаруженного на КТ грудной клетки. На основании этих результатов мы делаем вывод, что одномоментная резекция опухоли легкого может быть безопасно выполнена при сердечно-сосудистых операциях.

Возможно выполнение одноэтапной полной резекции при раке легкого, такой как пневмонэктомия, лобэктомия или сегментэктомия во время сердечно-сосудистых операций через торакотомию. В нашем исследовании всем пациентам выполнялась клиновидная резекция по поводу опухолей легких во время сердечно-сосудистых операций. Несколько месяцев спустя лечебная полная резекция по поводу рака легкого была выполнена только у 33,3% пациентов, которые были оценены как способные перенести дополнительную операцию на легком. Остальные пациенты, которым не была выполнена последующая полная резекция легкого, имели низкую сердечно-легочную функцию, плохое функциональное состояние и тяжелые сопутствующие заболевания.В предыдущих работах сообщалось, что одновременная полная резекция рака легкого во время сердечно-сосудистой хирургии была связана с высокими показателями периоперационной смертности. 3 Учитывая, что в эти исследования были включены пациенты с высоким риском, одноэтапная полная резекция по поводу рака легкого во время сердечно-сосудистой хирургии могла оказаться неприемлемой.

У пациентов с операбельным НМРЛ рекомендуемой хирургической процедурой по-прежнему должна быть лобэктомия или большая резекция легкого с диссекцией внутригрудных и медиастинальных лимфатических узлов. 14 ; 15 Что касается диссекции лимфатических узлов, Darling и коллеги 16 сообщили, что по сравнению с биопсией медиастинальных лимфатических узлов диссекция медиастинальных лимфатических узлов не повышает шансы на выживание у пациентов на ранних стадиях НМРЛ, предполагая, что диссекция или биопсия медиастинальных лимфатических узлов лимфатические узлы могут иметь важное значение для определения стадии рака легкого. В настоящем исследовании мы оценили, улучшит ли последующая полная резекция легкого после одномоментной клиновидной резекции опухоли легкого во время сердечно-сосудистой хирургии прогноз у пациентов на ранних стадиях НМРЛ.К сожалению, прогноз был относительно хуже, чем у пациентов, которым не выполнялась дополнительная резекция легкого. Хотя в наше исследование была включена ограниченная и небольшая группа пациентов, мы все же можем заключить, что полная резекция легкого, по-видимому, не способствовала улучшению прогноза у пациентов с тяжелыми сердечно-сосудистыми заболеваниями. Мы размышляли о причинах связи между дополнительной резекцией легкого и более неблагоприятным прогнозом. У пациентов, перенесших одномоментную резекцию опухоли легкого во время сердечно-сосудистых операций, остаточная сердечно-легочная функция могла быть меньше, что препятствовало физиологическому восстановлению после дополнительной операции на легком.Кроме того, у этих пациентов были множественные сопутствующие заболевания, такие как диабет, почечная недостаточность и гипергликемия.

Количество пациентов, у которых случайная опухоль легкого выявляется до сердечно-сосудистой хирургии, в будущем будет увеличиваться с развитием КТ грудной клетки; однако стандартная хирургическая стратегия для пациентов с такими опухолями остается неясной. Johnson и коллеги 4 провели обзор 3364 последовательных пациентов, перенесших АКШ, и сообщили, что 191 пациент (5.7%) имели легочные узлы. Среди этих 191 пациента у 40 были некальцифицированные легочные узлы, требующие наблюдения. В этом исследовании 18 пациентам с некальцинированными легочными узлами была выполнена одномоментная резекция легочных узлов во время КШ, и у 11 пациентов (61,1%) был диагностирован рак легкого. Как и в нашем отчете, у 15 из 18 пациентов (83,3%) был диагностирован рак легкого, что свидетельствует о том, что пациенты с раком легкого часто перенесли сопутствующую операцию. Эти результаты показывают, что необходима тщательная интерпретация КТ грудной клетки, чтобы избежать резекции доброкачественных опухолей, которые можно оставить без лечения.

Что касается прогноза пациентов, перенесших одномоментную резекцию рака легкого, Zhang et al. 7 сообщили, что 5-летняя выживаемость для этих пациентов составила 43,6%. В этом отчете 14 пациентов подверглись клиновидной резекции по поводу рака легкого, а четырем из них впоследствии была выполнена лобэктомия на стадии IB или IIA. В нашем отчете, который включал пациентов с относительно ранними стадиями рака легкого, 5-летняя выживаемость составила 46,2%, что согласуется с предыдущим отчетом.Напротив, Dyszkiewicz и коллеги 8 сообщили о 5-летней выживаемости 0% у пациентов, перенесших одновременную резекцию рака легкого II и III стадии, предполагая, что патологическая стадия рака легкого, вероятно, связана с прогнозом. больных, а также в случае одномоментной резекции легкого.

В заключение следует отметить, что одномоментная резекция опухоли легкого после сердечно-сосудистой хирургии может быть безопасно выполнена и полезна для патологической диагностики.У пациентов с тяжелыми сопутствующими заболеваниями эта процедура дает некоторую возможность контролировать прогрессирование рака легкого.

Ссылки

  1. 1 А. Джемаль, Ф. Брей, М.М. Центр, Дж. Ферлей, Э. Уорд, Д. Форман; Глобальная статистика рака; CA Cancer J Clin, 61 (2011), стр. 69–90
  2. 2 Э. Джамрозик, А.В. Мускус; Проблемы респираторного здоровья в Азиатско-Тихоокеанском регионе: обзор; Респирология, 16 (2011), стр. 3–12
  3. 3 М. Масуда, Х. Кувано, М. Окумура, и др. ; Грудная и сердечно-сосудистая хирургия в Японии в 2012 г.: годовой отчет Японской ассоциации торакальной хирургии; Gen Thorac Cardiovasc Surg, 62 (2014), стр. 734–764
  4. 4 Дж.А. Джонсон, Р.Дж. Ландрено, Т.М. Болей, и др. ; Следует ли резецировать легочные поражения во время операции на открытом сердце?; Am Surg, 62 (1996), стр. 300–303
  5. .
  6. 5 А. Эрнст, Р. Эберхардт, М. Вахиди, Х.Д. Беккер, Ф. Дж. Херт; Влияние рутинного использования клопидогреля на геморрагические осложнения после трансбронхиальной биопсии у людей; Грудь, 129 (2006), стр.734–737
  7. 6 М.Х. Дантон, В.А. Аникин, К.Г. Макманус, Дж.А. МакГиган, Г. Кампалани; Симультанная кардиохирургия с резекцией легкого: презентация серии и обзор литературы; Eur J Cardiothorac Surg, 13 (1998), стр. 667–672
  8. 7 Р. Чжан, Б. Вигманн, С. Фишер, и др. ; Одновременная хирургия сердца и легких по поводу случайного одиночного легочного узла: уроки прошлого; J Thorac Cardiovasc Surg, 60 (2012), стр. 150–155
  9. 8 В. Дышкевич, М.Джемиэлити, К. Пивковски, и др. ; Ранние и отдаленные результаты комбинированного аортокоронарного шунтирования без искусственного кровообращения и резекции легкого у больных с сочетанным раком легкого и нестабильной ишемической болезнью сердца; Eur J Cardiothorac Surg, 34 (2008), стр. 531–535
  10. 9 В. Рао, Т.Р. Тодд, Р. Д. Вайсей, и др. ; Результаты комбинированной резекции легкого и операции на сердце; Энн Торак Сург, 62 (1996), стр. 342–347
  11. .
  12. 10 С. Хособа, Дж. Ханаока, Т. Судзуки, и др. ; Ранние и среднесрочные результаты кардиохирургических вмешательств с резекцией легкого; Ann Thorac Cardiovasc Surg, 18 (2012), стр. 8–11
  13. 11 А. Брютель де ла Ривьер, П. Кнапен, Х. Ван Свитен, Р. Вандершурен, Дж. Эрнст, Дж. Ван ден Бош; Сопутствующая операция на открытом сердце и резекция легкого по поводу рака легкого; Eur J Cardiothorac Surg, 9 (1995), стр. 310–314
  14. 12 А. Терци, Г. Фурлан, Г. Магнелли, и др. ; Резекции легких, сопутствующие аортокоронарному шунтированию; Eur J Cardiothorac Surg, 8 (1994), стр.580–584
  15. 13 К.С. Уличный младший, В. Шмельцер, Дж. Б. Флеге младший, и др. ; Сочетанные операции на сердце и легких: роль искусственного кровообращения; Энн Торак Сург, 54 (1992), стр. 289–295
  16. .
  17. 14 Р.Дж. Гинзберг, Л.В. Рубинштейн; Рандомизированное исследование лобэктомии по сравнению с ограниченной резекцией при немелкоклеточном раке легкого T1 N0. Группа по изучению рака легких; Энн Торак Сург, 60 (1995), стр. 615–622
  18. .
  19. 15 Ф. Аль-Шахрабани, Д. Валлбомер, С. Ангенендт, В. Т. Кнофель; Хирургические стратегии в терапии немелкоклеточного рака легкого; World J Clin Oncol, 5 (2014), стр.595–603
  20. 16 Г.Э. Дорогая, М.С. Аллен, П.А. Декер, и др. ; Рандомизированное исследование забора средостенных лимфатических узлов по сравнению с полной лимфаденэктомией во время резекции легкого у пациента с немелкоклеточной карциномой N0 или N1 (менее корневой): результаты исследования группы Z0030 Американского колледжа хирургии и онкологии; J Thorac Cardiovasc Surg, 141 (2011), стр. 662–670

Границы | Молекула Fas, ингибирующая апоптоз, блокирует и растворяет патологические виды бета-амилоида

Введение

Деменция — это прогрессирующее, неизлечимое и неизменно фатальное нейродегенеративное заболевание (Ballard et al. , 2011). Большинство форм деменции связаны как с когнитивными, так и с некогнитивными нарушениями, которые могут серьезно повлиять на качество жизни пациентов (Gale et al., 2018). Распространенность деменции увеличивается с возрастом (Prince et al., 2013; Baumgart et al., 2015). Болезнь Альцгеймера (БА) является основной причиной прогрессирующей деменции, за ней следуют деменция с тельцами Леви (ДТЛ) и лобно-височная деменция (ЛВД) (Sancesario and Bernardini, 2018). Обычным патологическим признаком этих деменций является накопление неправильно свернутых белков в нерастворимые белковые отложения в пораженных тканях и вокруг них (Lovestone and McLoughlin, 2002).В большинстве случаев основным компонентом нерастворимого агрегата является специфический для заболевания белок, такой как амилоид-β (Aβ) при AD, α-синуклеин (α-syn) при LBD или ДНК-связывающий белок 43 TAR (TDP- 43) в ЛТД. Кроме того, имеется достаточно доказательств взаимодействия белков между деменциями, такими как гиперфосфорилированные нейрофибриллярные клубки тау (кодируемые геном MAPT ) как при БА, так и при ЛВД (McAlary et al. , 2019). Хотя изначально считалось, что эти нерастворимые белковые фибриллы играют ключевую роль в этиологии и патофизиологии заболеваний, все большее число исследований предполагает, что растворимые олигомеры или протофибриллы могут быть более нейротоксичными, чем зрелые нерастворимые фибриллы (Usenovic et al., 2015; Верма и др., 2015; Фуско и др., 2017; Клайн и др., 2018 г.; Сиддики и др., 2019). Считается, что изменение белкового гомеостаза с участием белков с неправильной укладкой, связанных с заболеванием, вызвано снижением активности шаперонов или снижением клиренса агрегированных белков в результате аутофагии (Komatsu et al., 2006; Loeffler, 2019). Сопутствующие старению генетические (мутации и полиморфизм) и экологические (клеточный стресс и воздействие металлов) факторы могут вызывать неправильную укладку белков и накопление белковых олигомеров/фибрилл (Kikis et al., 2010; Гидалевиц и др., 2011). Кроме того, как олигомеры, так и фибриллы представляют собой матрицы для дальнейшей олигомеризации/фибрилизации мономеров и могут распространяться от нейрона к нейрону посредством прионоподобного процесса (Danzer et al. , 2009; Lee et al., 2010; Luk V et al., 2012; Luk VM et al., 2012; Mougenot et al., 2012; Stohr et al., 2012; Masuda-Suzukake et al., 2013; Brettschneider et al., 2015; Condello and Stoehr, 2018. ). Поэтому недавние исследования были сосредоточены на понимании клеточного процессинга агрегатов олигомерных и фибриллярных белков, участвующих в нейродегенеративных заболеваниях.Хотя точная роль белков с неправильной укладкой в ​​этих патологиях все еще обсуждается, вредное образование растворимых олигомеров и протофибрилл, а также нерастворимых зрелых фибрилл является идеальной мишенью для будущей терапии болезни Альцгеймера и связанных с ней деменций (ADRD).

Молекула

Fas, ингибирующая апоптоз, представляет собой цитозольный белок массой 20 кДа, состоящий из 179 аминокислот; первоначально он был обнаружен в 1999 году и считался ингибитором FAS-апоптоза на основании его идентификации в Fas-резистентных B-клетках и исследований сверхэкспрессии в B-клеточной линии (Schneider et al., 1999). Последующее исследование выявило форму альтернативного сплайсинга, названную FAIM-Long (L), которая имеет 22 дополнительные аминокислоты на N-конце (Zhong et al., 2001). Таким образом, первоначально идентифицированный FAIM был переименован в FAIM-Short (S). Хотя два других генных продукта были ошибочно названы FAIM2 (также называемым спасателем) и FAIM3 (также называемым TOSO) другими группами (Planells-Ferrer et al., 2016), ни FAIM2, ни FAIM3 не связаны с FAIM-S и FAIM-L в с точки зрения функции или гомологии белков. FAIM-L экспрессируется почти исключительно в головном мозге, тогда как FAIM-S экспрессируется повсеместно (Zhong et al., 2001). В головном мозге FAIM-S экспрессируется в астроцитах, микроглии и нейронах. FAIM-L экспрессируется только в нейронах, но на более высоких уровнях, чем FAIM-S (Segura et al., 2007; Coccia et al., 2017) (далее FAIM обозначает как FAIM-S, так и FAIM-L). Физиологическая роль FAIM была загадочной в течение многих лет из-за отсутствия каких-либо гомологичных белковых последовательностей или каких-либо распознаваемых консенсусных эффекторных/связывающих мотивов; с ограниченной структурной информацией о полном пептиде было трудно предсказать подлинные функции FAIM. Недавняя работа показала, что FAIM противостоит агрегации мутантного белка, связанного с некоторыми наследственными формами БАС, что указывает на его роль в протеостазе (Kaku et al., 2020). Однако неясно, распространяется ли эта активность на другие склонные к агрегации белки и/или другие болезненные состояния; в частности, остается неизученным, может ли и в какой степени FAIM противодействовать патогенным видам Aβ. В этом исследовании мы стремимся понять активность FAIM в отношении Aβ с использованием как клеточной, так и бесклеточной системы in vitro .

Материалы и методы

Реагенты и антитела

β-лактоглобулин B (βLG) из коровьего молока (18,2 кДа) (#L8005) и бычий сывороточный альбумин (BSA) (66,5 кДа) (#A7906) были приобретены у MilliporeSigma и использовались в качестве белков отрицательного контроля. Кроличий антиамилоид-β (#8243), мышиный антиамилоидный белок-предшественник (APP) (#2452), козий антикроличий IgG-HRP-связанный (#7074) и лошадиный антимышиный IgG-HRP-связанный ( #7076) антитела были получены от Cell Signaling Technology. Аффинно очищенное антитело против FAIM получали от кроликов, иммунизированных пептидом CYIKAVSSRKRKEGIIHTLI (расположенным рядом с С-концевой областью FAIM), как описано ранее (Kaku and Rothstein, 2009a,b).

Культура клеток и трансфекция

Клеточная линия Neuro 2A (N2a) была получена из Американской коллекции типовых культур (ATCC, #CCL-131). Клетки N2a культивировали в среде DMEM/F12 (Cytiva), содержащей 10% FCS, 15 мМ HEPES, 2,5 мМ L-глутамина и 0,1 мг/мл пенициллина и стрептомицина. Трансфекцию проводили с использованием Lipofectamine 2000 в соответствии с инструкциями производителя (Invitrogen). Вкратце, клетки N2a высевали в количестве 1 × 10 5 клеток/лунку в 24-луночные планшеты и через 24 часа трансфицировали указанной ДНК-плазмидой (0.5 мкг/лунка) с использованием реагента для трансфекции Lipofectamine 2000 (1 мкл/лунка). pcDNA FRT TO-APP695 и pcDNA FRT TO-APPSwed/Ind были подарены Александрой Раденович (плазмиды Addgene № 114193 и № 114194 соответственно). Плазмида pcDNA3.3 (Themo Fisher Science, #K830001) была получена от Invitrogen и использовалась в качестве отрицательного контроля (пусто).

Создание клеток Neuro 2A с нокаутом молекулы, ингибирующей апоптоз Fas, с помощью CRISPR/Cas9

Последовательности направляющей РНК (гРНК)

для мышиного гена faim были разработаны с использованием инструмента для создания мишеней CRISPR для нацеливания на экзон после стартового кодона, как описано ранее (Kaku and Rothstein, 2020).Вкратце, сконструированные олигонуклеотиды ДНК лигировали в вектор pSpCas9(BB)-2A-GFP (PX458) (плазмида Addgene #48138, подарок Feng Zhang) по сайтам рестрикционных ферментов Bpi1 (Bbs1) с использованием стратегии клонирования «Золотые ворота». . Наличие вставки подтверждали секвенированием. Пустой вектор использовали в качестве отрицательного контроля. После четвертого пассажа трансфекцию проводили с использованием липофектамина 2000, как указано выше, и через неделю после трансфекции клетки eGFP + подвергали однократной сортировке с помощью прибора Melody (Becton Dickinson) и высевали в 96-луночные планшеты. Клоны с нокаутом FAIM подвергали скринингу с помощью лимитирующих разведений и вестерн-блоттинга. Клетки размножали в течение трех пассажей и затем замораживали в 90% FBS и 10% DMSO (Sigma-Aldrich, № 472301) на седьмом пассаже в жидком азоте для будущего использования. После оттаивания клеток для дальнейших экспериментов использовали клетки с общим числом пассажей 10.

Анализ жизнеспособности клеток с помощью проточной цитометрии

клетки Neuro 2A были отсоединены с помощью трипсина-ЭДТА. Прилипшие и плавающие клетки собирали и объединяли, после чего клетки ресуспендировали в 2 мкг/мл 7-аминоактиномицина D (7-AAD) (Anaspec, #AS-83201).Жизнеспособность клеток оценивали с помощью проточного цитометра Attune (Thermo Scientific). Данные анализировали с использованием программного обеспечения v10 (TreeStar).

Производство рекомбинантного белка His-Tag

вектора экспрессии белка His-метки были сконструированы с использованием вектора pTrcHis TA (Themo Fisher Science, #K441001) в соответствии с инструкциями производителя, как описано ранее (Kaku et al. , 2020). Вкратце, амплифицированные с помощью ПЦР гены-мишени клонировали с помощью ТА в вектор pTrcHis TA (Themo Fisher Science), а вставленную ДНК проверяли секвенированием (Genewiz).Олигонуклеотиды, использованные в данной работе для ПЦР-клонирования в вектор pTrcHis TA, были следующими: человеческий FAIM-S вперед, «ATGACAGATCTCGTAGCTGT TTGG»; человеческий FAIM-S , обратный, «TTAACTTGCAATCTCTG GGATTTC»; человек FAIM-L вперед, «ATGGCATCTGG AGATGACAGTC»; человеческий FAIM-L , обратный, «TTAACTTGCAA TCTCTGGGATTTC»; человек HSP27 вперед, «ATGACC GAGCGCCGCGTCCCCTT»; человеческий HSP27 обратный, «TTA CTTGGCGGCAGTCTCATCGGAT».

Праймер последовательности, используемый для вектора pTrcHis-TA, имеет следующий вид: TATGGCTAGCATGACTGGT.Белки экспрессировали в компетентных клетках TOP10 (Themo Fisher Science, #C404010) с IPTG (Invitrogen, #15529019) в концентрации 1 мМ в течение 2,5 ч при 37°C и очищали с использованием колонки Nuvia IMAC, заряженной никелем (Bio-Rad). ) на хроматографической системе NGC Quest (Bio-Rad). Белки подвергали диализу против PBS с использованием диализных кассет Slide-A-Lyzer, 10K MWCO (Themo Fisher Science, #66380). Чистота белка была проверена с использованием гелей TGX Stain-Free (Bio-Rad) в системе визуализации ChemiDoc Touch (Bio-Rad), и было определено, что каждый белок имеет чистоту> 90% (дополнительная фигура 1).Случайный мутагенез выполняли с использованием набора для случайного мутагенеза GeneMorpho II (Agilent, № 200550) в соответствии с рекомендациями производителя. Вкратце, вектор pTrcHis TA, содержащий человеческий ген FAIM-S, использовали в качестве матрицы и амплифицировали в течение 30 циклов с использованием мутазима II. Олигонуклеотиды, использованные в ПЦР-мутагенезе, были следующими: человеческий FAIM-S вперед, «GATGACGATAAGGATCCAACCCTTATG»; человек FAIM-S реверс, «AGCTTCGAATTGAATTCGCCCTTTTA». После повторной вставки ПЦР-амплифицированной ДНК в вектор pTrcHis TA вставку проверяли секвенированием, и белки экспрессировали, как описано выше.

Флуоресцентный анализ тиофлавина Т

Образование фибрилл/агрегатов 5 мкМ Aβ (1–42) (Aβ42) (Anaspec, #AS-72216), собранных в 384-луночном планшете с прозрачным дном (Corning), оценивали с помощью 50 мкМ тиофлавина Т (ThT) ( MilliporeSigma, #T3516) флуоресценция с использованием многорежимного считывателя микропланшетов Synergy Neo2 (Bio-Tek). Температуру считывателя устанавливали на уровне 37°C с непрерывным встряхиванием между считываниями. Интенсивность флуоресценции ThT измеряли с использованием длины волны возбуждения 440 нм и эмиссии 482 нм.Прирост ФЭУ был установлен на 80. Измерения флуоресценции проводились с нижней части планшета, при этом верхняя часть была закрыта клейким герметиком для планшетов для предотвращения испарения.

Генерация предварительно сформированных фибрилл Aβ

Предварительно сформированные фибриллы Aβ42 собирали путем инкубации 5 мкМ мономеров Aβ42 в буфере для анализа β-амилоида (Anaspec) в течение 1 ч при перемешивании при 559 об/мин при 37°C. Фибриллы извлекали центрифугированием при 14 000 × g в течение 10 мин, промывали и ресуспендировали в PBS. Генерацию фибрилл подтверждали флуоресценцией 50 мкМ ThT.Фибриллы разводили до необходимой концентрации для последующих реакций дезагрегации.

Анализ дезагрегации с помощью ThT, анализ с фильтром-ловушкой и анализ седиментации

предварительно сформированных фибрилл Aβ42 (0,5 мкМ) инкубировали с указанными рекомбинантными белками при 37°C в течение 2,5 часов. Затем статус фибрилл определяли либо с помощью флуоресценции ThT, анализа с фильтр-ловушкой (FTA), либо с помощью анализа супернатантов и осадка после седиментации и вестерн-блоттинга (седиментационный анализ). Для FTA образцы подвергались вакуумной фильтрации через предварительно смоченный фильтр 0.Нитроцеллюлозная мембрана с размером пор 2 мкм (GE Healthcare) с использованием 96-луночного аппарата Dot-Blot (Bio-Rad). Мембрану дважды промывали PBS и проводили вестерн-блоттинг с использованием антитела против Aβ для обнаружения фибрилл Aβ.

SDS-PAGE и вестерн-блоттинг

Образцы общего белка подвергали электрофорезу в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) на Any kD Mini-PROTEAN TGX Precast Protein Gel (Bio-Rad) с последующим иммуноблоттингом после влажного переноса в течение 1 часа на мембрану PVDF (Bio-Rad). Рад) и блокирование 1% обезжиренным сухим молоком (Био-Рад) в ТБС-Т.В некоторых экспериментах (рис. 3D, 4A) образцы белка центрифугировали при 14 000 × g в течение 10 мин. Осадки промывали PBS и суспендировали в 1х буфере Лэммли. Фракции супернатанта и осадка подвергали SDS-PAGE. Денситометрический количественный анализ полос был проанализирован с помощью программного обеспечения ImageLab (версия 6.1.0) (Bio-Rad). Для дополнительных рисунков 1, 2 использовалась технология без окрашивания для обнаружения общих белков с использованием системы визуализации ChemiDoc Touch (Gilda and Gomes, 2013).

Статистический анализ

Все количественные данные выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Двусторонний непарный критерий Стьюдента t использовали для статистических определений с помощью программного обеспечения GraphPad Prism 8 и 9. Значения p < 0,05 считаются статистически значимыми (* p < 0,05, ** p < 0,01 или *** p < 0,001.

Результаты

Фибриллы/агрегаты Aβ накапливаются в клетках Neuro 2A с дефицитом молекулы, ингибирующей апоптоз Fas, после сверхэкспрессии белка-предшественника амилоида

Ранее мы показали, что агрегаты убиквитинированного белка, индуцированные клеточным стрессом, и агрегаты мутантного SOD1 накапливаются в клетках с дефицитом FAIM (Kaku et al., 2020; Каку и Ротштейн, 2020 г.). Чтобы оценить роль FAIM в предотвращении агрегации Aβ, мы использовали систему сверхэкспрессии APP с использованием клеток Neuro 2A, нейробластомы мыши. Сообщается, что мутантный АРР, такой как шведский мутант (K670N/M671L) и мутант из Индианы (V717F), продуцирует внеклеточные фибриллы/агрегаты Aβ из-за аномального процессинга эндогенными секретазными путями в клетках Neuro 2A (Ghosh and Osswald, 2014). Мы временно сверхэкспрессировали APPswe/ind и контрольный APP695 в клетках дикого типа и FAIM-дефицитных клетках Neuro 2A (рис. 1A) и обнаружили, что клеточные культуры с мутантным APP содержали агрегированный Aβ через 4 дня после трансфекции (рис. 1B), как сообщалось ранее (Park et al. ., 2015; Кадди и др., 2017). Независимо от эффективности трансфекции APP (рис. 1A), уровни фибрилл/агрегатов Aβ в культуральном супернатанте были значительно выше в клетках Neuro 2A с дефицитом FAIM, чем в клетках Neuro 2A дикого типа (рис. 1B). Контроль загрузки для рисунка 1B показан на дополнительном рисунке 2. Хотя мы неожиданно обнаружили полосы мономера и олигомера Aβ в нерастворимой в осадке фракции в дополнение к зрелым фибриллам, зрелые фибриллы могут быть разбиты на мономеры / олигомеры во время процедуры (т.д., воздействие SDS) (рис. 1B). Чтобы исключить возможность того, что различия, наблюдаемые на фиг. 1В, могут быть связаны с различиями в жизнеспособности клеток после трансфекции АРР, жизнеспособность клеток анализировали с помощью окрашивания 7-AAD. Мы не наблюдали существенной разницы в гибели клеток между группами (дополнительная фигура 3). Эти результаты демонстрируют существенную роль FAIM в изменении судьбы мутантного Aβ, происходящего от APP.

Рисунок 1. Клетки FAIM KO накапливают нерастворимые фибриллы/агрегаты Aβ.Клетки WT и FAIM KO Neuro 2A временно трансфицировали векторами экспрессии для APP695 и мутантного APPswe/ind. Через четыре дня после трансфекции собирали клетки и культуральные супернатанты. (A) Клеточные лизаты готовили с использованием буфера RIPA и анализировали вестерн-блоттингом на APP, FAIM и актин в качестве контроля загрузки. (B) Супернатанты культур разделяли на растворимые и нерастворимые фракции осадка путем центрифугирования при 14 000 × г в течение 10 мин.Осадки дважды промывали PBS. Белки из супернатантов для каждой фракции анализировали вестерн-блоттингом на Aβ. Показаны репрезентативные данные по крайней мере из трех независимых экспериментов.

Рекомбинантные белки Fas человека, ингибирующие апоптоз, предотвращают образование растворимых протофибрилл и олигомеров Aβ42 в бесклеточной системе

Чтобы выяснить, ингибирует ли FAIM напрямую образование фибрилл и олигомеров Aβ42 в бесклеточной системе in vitro , и достаточно ли одного белка FAIM для ингибирования агрегации белка без дополнительных клеточных компонентов, мы смешали мономеры FAIM и Aβ42 и инкубировали смесь при комнатной температуре.Сообщалось, что смесь растворимых протофибрилл и олигомеров Aβ42 образуется, когда мономеры инкубируют при комнатной температуре без перемешивания (Jiang et al., 2019). Мы использовали HSP27 в качестве положительного контроля, поскольку было показано, что HSP27 ингибирует фибрилляцию/агрегацию Aβ42 в бесклеточных системах (Lee et al., 2006; Raman et al., 2005; Fonte et al., 2008). Мы обнаружили, что образование этих растворимых частиц предотвращалось в присутствии рекомбинантного FAIM или HSP27 в этих условиях (рис. 2А, В).Эти данные свидетельствуют о том, что FAIM обладает активностью в предотвращении образования олигомеров и фибрилл Aβ42.

Рисунок 2. Рекомбинантный FAIM подавляет фибрилляцию/агрегацию белка в бесклеточной системе. (A) Спонтанную олигомеризацию Aβ (15 мкМ) in vitro индуцировали при комнатной температуре в течение 18 ч в присутствии 1 мкМ рекомбинантного FAIM-S, FAIM-L, HSP27, βLG или BSA. Все образцы подвергали SDS-PAGE и вестерн-блоттингу на Aβ. Показаны репрезентативные данные по крайней мере из трех независимых экспериментов.Pre: предварительная инкубация, PBS: буферный контроль. (B) Уровни фибрилл в (A) были количественно определены с помощью денситометрии, и данные трех независимых экспериментов показаны в процентах от PBS-контроля. Данные выражены как среднее ± SEM. Двусторонний непарный критерий Стьюдента t был использован для расчета p -значений. *** р < 0,001.

Рекомбинантные белки Fas человека, ингибирующие апоптоз, подавляют фибрилляцию/агрегацию Aβ42 в бесклеточной системе

Чтобы выяснить, ингибирует ли FAIM фибриллизацию белка Aβ, мы использовали тиофлавин Т (ThT), краситель, который флуоресцирует только при включении в амилоидные фибриллы (Biancalana and Koide, 2010; Malmos et al. , 2017; Алиян и др., 2019). Мы смешали рекомбинантный FAIM и склонный к агрегации мономерный пептид Aβ42 и отслеживали состояние агрегации в режиме реального времени по интенсивности флуоресценции ThT. Мы обнаружили, что фибрилляция Aβ42 отменялась в присутствии рекомбинантного FAIM или HSP27, но не PBS, βLG или BSA (рис. 3А). Нормализованная флуоресценция ThT через 2 часа показана на дополнительной фигуре 4. Мы провели случайный мутагенез, чтобы идентифицировать мутантную форму FAIM-S, лишенную активности, и обнаружили, что мутация S155N отменяет активность FAIM-S.Мутантный белок FAIM-S S155N использовали в качестве отрицательного контроля в дополнение к BSA и βLG (дополнительная фигура 4). Чтобы подтвердить эти результаты, состояние фибрилляции оценивали с помощью SDS-PAGE и вестерн-блоттинга (WB). Мы обнаружили агрегированный Aβ42 в диапазоне высоких молекулярных масс отрицательных контролей (контроли PBS, βLG и BSA). Мы обнаружили, что образование агрегатов с высокой молекулярной массой резко снижается в присутствии рекомбинантного FAIM или HSP27 (рис. 3B, C). Далее мы оценили растворимость образцов путем осаждения, чтобы отделить растворимые протофибриллы от зрелых нерастворимых фибрилл.Оба они резко снижались в присутствии рекомбинантного FAIM или HSP27 (рис. 3D, E).

Рисунок 3. Рекомбинантный FAIM подавляет фибрилляцию/агрегацию белка в бесклеточной системе. (A) Спонтанную фибрилляцию Aβ (5 мкМ) in vitro отслеживали с помощью анализа ThT в течение 2 часов в присутствии 2 мкМ рекомбинантного FAIM-S, FAIM-L, HSP27, βLG или BSA. Флуоресценцию ThT регистрировали каждые 5 мин. (B) Все образцы после той же реакции без ThT подвергали SDS-PAGE и вестерн-блоттингу на Aβ. (C) Денситометрия фибрилл в (B) из 3 независимых экспериментов показана в процентах от контроля PBS. Данные выражены как среднее ± SEM. (D) Образцы белка после той же реакции без ThT центрифугировали при 14 000 × g в течение 10 мин. Фракции супернатанта и осадка подвергали SDS-PAGE и вестерн-блоттингу на Aβ. Показаны репрезентативные данные по крайней мере из трех независимых экспериментов. (E) Денситометрия фибрилл в (D) из трех независимых экспериментов показана в процентах от контроля PBS.Данные выражены как среднее ± SEM. (C,E) Для расчета p значений использовали двусторонний непарный критерий Стьюдента t . * р < 0,05, ** р < 0,01 или *** р < 0,001.

Белки рекомбинантной молекулы, ингибирующей апоптоз Fas человека, солюбилизируют предварительно сформированные фибриллы Aβ42

Чтобы проверить, способен ли FAIM реверсировать предварительно сформированные, установленные фибриллы белка Aβ42 в дополнение к предотвращению агрегации белка, мы подготовили предварительно сформированные фибриллы амилоида-β, а затем добавили рекомбинантные белки FAIM.Мы отслеживали состояние фибрилляции с помощью дифференциального осаждения с последующей солюбилизацией в загрузочном буфере и гель-электрофорезом. Большинство предварительно сформированных фибрилл Aβ42 по отдельности появилось во фракции гранул (рис. 4А). Мы обнаружили, что добавление FAIM привело к сдвигу молекулярного размера основной массы предварительно сформированных фибрилл Aβ42, которые теперь появились в виде мономеров во фракциях супернатанта после нативного ПААГ (рис. 4А). Мы расширили эти результаты, изучив белковые агрегаты с помощью дополнительных подходов.Мы подготовили фибриллы Aβ42, а затем, как и ранее, добавили рекомбинантные белки FAIM. Статус фибрилляции контролировали по флуоресценции ThT и FTA. Мы обнаружили, что флуоресценция ThT (рис. 4B) и фибриллы, захваченные фильтром (рис. 4C, D), значительно уменьшились после добавления FAIM по сравнению с отрицательным контролем. Эти результаты показывают, что в бесклеточной системе in vitro установленные фибриллы Aβ42 растворяются FAIM, по крайней мере, частично.

Рисунок 4. Рекомбинантный FAIM солюбилизирует β-амилоидные фибриллы и образует мономеры в бесклеточной системе. Предварительно сформированные фибриллы амилоида-β1-42 (Aβ42) (0,5 мкМ) инкубировали с 5 мкМ рекомбинантного FAIM, HSP27, βLG, BSA или PBS или без них. в течение 2,5 ч с последующим седиментационным анализом (A), окрашиванием тиофлавином Т (ThT) (B) и анализом с фильтрацией-ловушкой (C) для оценки уровней видов Aβ42. Для седиментационного анализа образцы разделяли на фракции надосадочной жидкости и осадка центрифугированием при 14 000 × г в течение 10 мин. Осадки дважды промывали PBS, а затем использовали гели нативного ПААГ, поскольку SDS частично растворяет фибриллы Aβ42 и продуцирует мономеры Aβ42.предварительно; предварительная инкубация с белками. (D) Уровни захваченных фибрилл в (C) количественно определяли с помощью денситометрии, и данные трех независимых экспериментов показаны в процентах от контроля до инкубации. Данные выражены как среднее ± SEM. Двусторонний непарный критерий Стьюдента t был использован для расчета p -значений. Показаны репрезентативные данные по крайней мере из трех независимых экспериментов. ** р < 0,01.

Рекомбинантная молекула, ингибирующая апоптоз Fas, подавляет фибрилляцию/агрегацию Aβ в клетках Neuro 2A

Чтобы проверить, ингибирует ли FAIM непосредственно фибрилляцию/агрегацию Aβ и достаточно ли белка FAIM для ингибирования фибрилляции/агрегации Aβ без каких-либо дополнительных компонентов, мы добавили очищенные рекомбинантные белки FAIM человека в культуру клеток через 1 день после трансфекции экспрессией вектор для мутантного APPswe/ind.Супернатант собирали и разделяли на фракции растворимых и нерастворимых гранул, как показано на рисунке 1. Мы обнаружили, что добавление рекомбинантных белков FAIM резко снижало уровни олигомеризованного/фибриллированного Aβ во фракции нерастворимых гранул (рис. 5A, B). Кроме того, уровни фибрилл/агрегатов Aβ в растворимых в детергенте и нерастворимых фракциях из клеточных лизатов также были выше в клетках Neuro 2A с дефицитом FAIM, чем в клетках Neuro 2A дикого типа, а уровни фибрилл/агрегатов Aβ были снижены за счет добавление белков FAIM (дополнительная фигура 5). Эти данные свидетельствуют о том, что внеклеточные белки FAIM могут предотвращать образование как внеклеточных, так и внутриклеточных олигомеров/фибрилл Aβ, продуцируемых клетками Neuro 2A, сверхэкспрессирующими ассоциированный с заболеванием мутантный APP.

Рисунок 5. Рекомбинантный FAIM предотвращает образование фибрилл Aβ в клетках Neuro 2A. (A) Клетки WT и FAIM KO Neuro 2A временно трансфицировали экспрессионными векторами для APP695 и мутантного APPswe/ind. Через сутки в культуру клеток добавляли 1 мкМ hFAIM-S, hFAIM-L или βLG.На 4-й день после трансфекции культуральные супернатанты фракционировали на фракции растворимых и нерастворимых осадка путем центрифугирования при 14 000 × g в течение 10 мин. Осадки дважды промывали PBS. Белки для каждой фракции анализировали вестерн-блоттингом на Aβ. Показаны репрезентативные данные по крайней мере из трех независимых экспериментов. (B) Уровни нерастворимых в детергенте агрегатов в (A) количественно определяли с помощью денситометрии, и данные трех независимых экспериментов показаны как процент APP Swe/Ind на дорожке, достаточной для FAIM. Данные выражены как среднее ± SEM. Двусторонний непарный критерий Стьюдента t был использован для расчета p -значений. * р < 0,05, ** р < 0,01.

Обсуждение

Патофизиология нейродегенеративного расстройства, AD, включает белковые агрегаты в виде бляшек Aβ и тау-нейрофибриллярных клубков (Polanco et al., 2018). Была предложена связь между AD и FAIM (Carriba et al., 2015). Было обнаружено, что экспрессия FAIM-L нарушена в головном мозге пациентов с БА, особенно на поздних стадиях BRAAK, а это означает, что уровни экспрессии FAIM-L обратно коррелируют с уровнями патогенных форм тау и Aβ (Carriba et al., 2015). Учитывая, что белок FAIM предотвращает и солюбилизирует фибриллы Aβ, мы предлагаем новую гипотезу о том, что низкая экспрессия FAIM может быть патогенетически связана с более быстрой, агрессивной, чрезмерной фибрилляцией Aβ у пациентов с БА, а не просто функционировать в качестве маркера прогрессирования БА. Кроме того, ранее мы показали, что окислительный стресс, примененный in vivo к интактным животным, вызывает увеличение белковых агрегатов у мышей с дефицитом FAIM (Kaku and Rothstein, 2020). Предыдущие сообщения предполагают, что окислительный стресс связан с нейродегенеративными заболеваниями, предположительно из-за накопления агрегатов токсичных белков, вызванных окислением белков (Butterfield and Kanski, 2001; Chong et al., 2005; Чен и др., 2012). Таким образом, сниженная экспрессия FAIM у пациентов с БА в сочетании с нашим предыдущим отчетом об усилении агрегации белков в нескольких органах после того, как окислительный стресс был доставлен мышам с дефицитом FAIM (Kaku and Rothstein, 2020), и нашим текущим открытием, что FAIM предотвращает и разрушает олигомеры Aβ. и фибриллы, демонстрирует, что FAIM является патофизиологически релевантным современным парадигмам возникновения и/или прогрессирования нейродегенеративных заболеваний, которые связаны с нарушением протеостаза.

Остается неизученным, существует ли FAIM во внеклеточном пространстве в виде секретируемого, выделяемого или упакованного в экзосомы материала. Хотя олигомеризация/фибрилляция Aβ в основном происходит во внеклеточном пространстве, также наблюдалась внутриклеточная олигомеризация/фибрилляция Aβ в нейронах пациентов с БА и модельных животных (Gouras et al. , 2000; Takahashi et al., 2002; Ji et al., 2016). Внутринейрональное накопление Aβ наблюдается до того, как в областях мозга, впервые пораженных БА, разовьются бляшки; это, по-видимому, одно из самых ранних изменений при БА (Gouras et al., 2000) и связан с синаптической патологией (Takahashi et al., 2002). Кроме того, накопление внутринейронального Aβ происходит перед бляшками в моделях AD у мышей (Billings et al., 2005; Jawhar et al., 2012). Важно отметить, что эти модели БА предоставляют доказательства того, что внутринейрональные олигомеры/фибриллы Aβ могут играть роль в нейродегенерации, потере нейронов и образовании внеклеточных амилоидных бляшек, предполагая, что уменьшение количества внутринейрональных олигомеров/фибрилл Aβ может быть потенциальной терапевтической целью при БА. Кроме того, внутриклеточные олигомеры/фибриллы Aβ могут распространяться по головному мозгу прионоподобным образом, при этом семена Aβ ускоряют образование бляшек и межклеточное распространение (Olsson et al. , 2018).

Хотя нет единого мнения относительно его роли в патологии БА, межклеточный Aβ был предложен в качестве раннего события в патогенезе БА и также может способствовать прогрессированию заболевания (LaFerla et al., 2007; Li et al., 2007; Moon et al. al., 2012; Esquerda-Canals et al., 2017, 2019; Wilson et al., 2017). Неизвестно, существует ли внеклеточный FAIM или может ли внутриклеточный FAIM предотвращать или замедлять межклеточные процессы посева и распространения Aβ.

До нашего открытия, что FAIM может диссоциировать агрегированные белки, было показано, что HSP104 выполняет эту функцию (Parsell et al., 1994). HSP104 и его гомологи существуют только в геномах растений, бактерий, дрожжей и хоанофлагеллят, но, что интересно, отсутствуют у многоклеточных организмов (Erives and Fassler, 2015). Напротив, FAIM возник в геномах хоанофлагеллят и развился у голозойных видов. АТФ необходим для дезагрегационной активности HSP104 (Wendler et al., 2007; Sweeny and Shorter, 2016), тогда как наша работа демонстрирует, что FAIM дезагрегирует белки в отсутствие АТФ. Фактически в белке FAIM нет сайта связывания АТФ.Можно предположить, что FAIM мог бы заменить функцию HSP104 у многоклеточных видов, чтобы сэкономить АТФ для активного движения, чтобы повысить выживаемость многоклеточных организмов. Недавно было высказано предположение, что трехчастный комплекс HSP70 в сочетании с HSP40 (белок J) и HSP110 способен диссоциировать агрегированные белки АТФ-зависимым образом (Shorter, 2011; Nillegoda et al., 2015). Таким образом, FAIM уникален тем, что является единственным АТФ-независимым белком, который предотвращает агрегацию белков и диссоциирует агрегированные белки, и является единственным таким многоклеточным белком с такими характеристиками, известными в настоящее время.С клинико-трансляционной точки зрения манипулирование одним белком FAIM, вероятно, более осуществимо, чем манипулирование многочленным белковым комплексом, для функционирования которого требуется АТФ. Было высказано предположение, что солюбилизация зрелых фибрилл Aβ является первым необходимым шагом к лечению AD с помощью антител, которые затем могут ускорить удаление (Murphy, 2018). Хотя Hsp104, утраченный метазоа, может дезагрегировать белки и может быть кандидатом на дезагрегационную терапию нейродегенеративных заболеваний, он может вызывать нейровоспаление, поскольку HSP104 является чужеродным антигеном, который может вызывать мощные нежелательные иммунные ответы.Напротив, FAIM в высокой степени эволюционно консервативен и является естественным белковым продуктом человека, что делает его привлекательной возможностью для терапевтического вмешательства. Наша работа дает новый взгляд на взаимосвязь между FAIM и фибрилляцией Aβ, которая, как мы надеемся, однажды поможет в лечении и понимании нейродегенеративных заболеваний, включая AD и другие связанные деменции. Это потенциально может привести к совместимым с видами, рационально разработанным профилактическим и терапевтическим вмешательствам.

Заявление о доступности данных

Оригинальные материалы, представленные в исследовании, включены в статью/дополнительный материал, дальнейшие запросы можно направлять соответствующим авторам.

Вклад авторов

HK разработал и провел исследование, проанализировал и интерпретировал данные и написал рукопись. HK, AL и MG провели исследование. TR проанализировал и интерпретировал данные и отредактировал рукопись. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Эта работа была поддержана грантом AG072148 Службы общественного здравоохранения, предоставленным Гонконгу Национальными институтами здравоохранения.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Примечание издателя

Все претензии, изложенные в этой статье, принадлежат исключительно авторам и не обязательно представляют претензии их дочерних организаций или издателя, редакторов и рецензентов.Любой продукт, который может быть оценен в этой статье, или претензии, которые могут быть сделаны его производителем, не гарантируются и не поддерживаются издателем.

Благодарности

Мы благодарны нашим коллегам за полезные обсуждения и техническую помощь на протяжении всего исследования.

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fnmol.2021.750578/full#supplementary-material

.

Дополнительный рисунок 1 | Анализировали чистоту рекомбинантных белков.100 нг каждого белка наносили на каждую дорожку на геле без окрашивания. После SDS-PAGE белки визуализировали с помощью системы Chemidoc Stain-free.

Дополнительный рисунок 2 | Уровни общего белка были проанализированы с помощью технологии без окрашивания с использованием системы визуализации ChemiDoc Touch. Общий контроль загрузки белка показан на рисунке 1B.

Дополнительный рисунок 3 | Нет существенной разницы в жизнеспособности клеток после трансфекции АРР между группами.Клетки WT и FAIM KO Neuro 2A временно трансфицировали векторами экспрессии для Empty, APP695 и мутантного APPswe/ind. На 4-й день после трансфекции клетки окрашивали 7-AAD и анализировали жизнеспособность клеток с помощью проточной цитометрии. Показаны репрезентативные данные потока (A) и сводка объединенных данных из 3 независимых экспериментов (B) . Данные выражены как среднее ± SEM.

Дополнительный рисунок 4 | Рекомбинантный FAIM подавляет фибрилляцию/агрегацию белка в бесклеточной системе.Спонтанную фибрилляцию Aβ (5 мкМ) in vitro отслеживали с помощью анализа ThT в течение 2 часов в присутствии 2 мкМ рекомбинантного FAIM-S, FAIM-S S155N, FAIM-L, HSP27, βLG или BSA. Нормализованные уровни флуоресценции ThT через 2 часа выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Двусторонний непарный критерий Стьюдента t был использован для расчета p -значений.

Дополнительный рисунок 5 | Рекомбинантный FAIM предотвращает появление внутриклеточных фибрилл Aβ в клетках Neuro 2A. (A) Клетки WT и FAIM KO Neuro 2A временно трансфицировали экспрессионными векторами для APP695 и мутантного APPswe/ind. Через сутки в культуру клеток добавляли 1 мкМ hFAIM-S, hFAIM-L или βLG. На 4-й день после трансфекции клетки собирали. Клеточные лизаты готовили с использованием буфера RIPA и фракционировали на растворимые в детергенте и нерастворимые в детергенте фракции осадка путем центрифугирования при 14 000 × g в течение 10 мин. Осадки дважды промывали PBS. Белки из каждой фракции анализировали вестерн-блоттингом на Aβ и актин в качестве контроля загрузки. Показаны репрезентативные данные по крайней мере из трех независимых экспериментов.

Сноски

Каталожные номера

Баллард, К., Готье, С., Корбетт, А., Брейн, К., Аарсленд, Д., и Джонс, Э. (2011). Болезнь Альцгеймера. Ланцет 377, 1019–1031.

Академия Google

Баумгарт М., Снайдер Х. М., Каррильо М. К., Фацио С., Ким Х. и Джонс Х. (2015). Резюме данных о поддающихся изменению факторах риска снижения когнитивных функций и деменции: популяционная перспектива. Болезнь Альцгеймера. 11, 718–726. doi: 10.1016/j.jalz.2015.05.016

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Биллингс, Л.М., Оддо, С., Грин, К.Н., Макго, Дж.Л., и Лаферла, Ф.М. (2005). Внутринейрональный Abeta вызывает начало когнитивного дефицита, связанного с болезнью Альцгеймера, у трансгенных мышей. Нейрон 45, 675–688. doi: 10.1016/j.neuron.2005.01.040

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бреттшнайдер, Дж., Дель Тредичи, К., Ли, В.М., и Трояновски, Дж. К. (2015). Распространение патологии при нейродегенеративных заболеваниях: в центре внимания исследования человека. Нац. Преподобный Нейроски. 16, 109–120. doi: 10.1038/nrn3887

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Баттерфилд, Д. А., и Кански, Дж. (2001). Окисление белков головного мозга при возрастных нейродегенеративных заболеваниях, связанных с агрегированными белками. Мех. Старение Дев. 122, 945–962. дои: 10.1016/s0047-6374(01)00249-4

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Карриба, П., Хименес, С., Наварро, В., Морено-Гонсалес, И., Барнеда-Захонеро, Б., Мубарак, Р. С., и соавт. (2015). Амилоид-бета снижает экспрессию нейронального FAIM-L, тем самым сдвигая воспалительную реакцию, опосредованную TNF-альфа, с защиты нейронов на гибель. Дис. клеточной смерти. 6:e1639. doi: 10.1038/cddis.2015.6

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чен, X., Го, К., и Конг, Дж. (2012). Окислительный стресс при нейродегенеративных заболеваниях. Нейронная регенерация. Рез. 7, 376–385.

Академия Google

Чонг, З. З., Ли, Ф. К., и Майзе, К. (2005). Окислительный стресс в головном мозге: новые клеточные мишени, определяющие выживаемость при нейродегенеративных заболеваниях. Прог. Нейробиол. 75, 207–246. doi: 10.1016/j.pneurobio.2005.02.004

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Клайн, Э. Н., Бикка, М.А., Виола, К.Л., и Кляйн, В.Л. (2018). Гипотеза бета-амилоидного олигомера: начало третьего десятилетия. J. Alzheimers Dis. 64, С567–С610. дои: 10.3233/JAD-179941

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Coccia, E., Calleja-Yague, I., Planells-Ferrer, L., Sanuy, B., Sanz, B., Lopez-Soriano, J., et al. (2017). Идентификация и характеристика новых изоформ молекулы, ингибирующей апоптоз человека (FAIM). PLoS One 12:e0185327.doi: 10.1371/journal.pone.0185327

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Конделло, К., и Стоер, Дж. (2018). Размножение и штаммы Abeta: последствия для фенотипического разнообразия при болезни Альцгеймера. Нейробиол. Дис. 109, 191–200. doi: 10.1016/j.nbd.2017.03.014

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кадди, Л. К., Сих, К., Пастернак, С. Х., и Райлетт, Р. Дж. (2017). Антитело Amino-Terminal к бета-амилоиду блокирует опосредованное бета-амилоидом ингибирование высокоаффинного переносчика холина CHT. Фронт. Мол. Неврологи. 10:361. doi: 10.3389/fnmol.2017.00361

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Данцер К.М., Кребс С.К., Вольф М., Бирк Г. и Хенгерер Б. (2009). Посев, индуцированный олигомерами альфа-синуклеина, свидетельствует о распространении патологии альфа-синуклеина. Дж. Нейрохим. 111, 192–203. doi: 10.1111/j.1471-4159.2009.06324.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Эривес, А.Дж., и Фасслер, Дж. С. (2015). Потеря метаболических генов и генов шаперонов указывает на происхождение животных: доказательства того, что шапероны Hsp104 и Hsp78 используют митохондриальные ферменты в качестве клиентов. PLoS One 10:e0117192. doi: 10.1371/journal.pone.0117192

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Эскерда-Каналс, Г., Марти-Клуа, Дж., Рода, А.Р., и Вильегас, С. (2017). Внутриклеточный эпитоп амилоид-бета/AbetaPP коррелирует с нейродегенерацией в тех популяциях нейронов, которые на ранних стадиях вовлечены в болезнь Альцгеймера. J. Alzheimers Dis. 59, 1079–1096. дои: 10.3233/JAD-170218

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Эскерда-Каналс Г., Рода А. Р., Марти-Клуа Дж., Монтолиу-Гая Л., Ривера-Эрнандес Г. и Вильегас С. (2019). Лечение scFv-h4D6 предотвратило потерю нейронов и улучшило пространственную память у молодых мышей 3xTg-AD за счет снижения внутриклеточной нагрузки бета-амилоидами. J. Alzheimers Dis. 70, 1069–1091. дои: 10.3233/JAD-1

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Фонте, В., Kipp, D.R., Yerg, J.III., Merin, D., Forrestal, M., Wagner, E., et al. (2008). Подавление токсичности бета-амилоидного пептида in vivo за счет сверхэкспрессии небольшого белка-шаперона HSP-16.2. J. Biol. хим. 283, 784–791. дои: 10.1074/jbc.M703339200

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Fusco, G., Chen, S.W., Williamson, P.T.F., Cascella, R. , Perni, M., Jarvis, J.A., et al. (2017). Структурные основы разрушения мембран и клеточной токсичности олигомерами альфа-синуклеина. Наука 358, 1440–1443. doi: 10.1126/science.aan6160

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Гейл С.А., Акар Д. и Даффнер К.Р. (2018). Деменция. утра. Дж. Мед. 131, 1161–1169.

Академия Google

Гош, А.К., и Освальд, Х.Л. (2014). Ингибиторы BACE1 (бета-секретазы) для лечения болезни Альцгеймера. Хим. соц. Ред. 43, 6765–6813.

Академия Google

Гидалевиц, Т., Прахлад, В., и Моримото, Р.И. (2011). Стресс неправильного фолдинга белков: от одиночных клеток к многоклеточным организмам. Гавань Колд Спринг. Перспектива. биол. 3:а009704. doi: 10.1101/cshperspect.a009704

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Гильда, Дж. Э., и Гомеш, А. В. (2013). Окрашивание общего белка Stain-Free является лучшим контролем загрузки по сравнению с бета-актином для вестерн-блоттинга. Анал. Биохим. 440, 186–188. doi: 10.1016/j.ab.2013.05.027

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Gouras, G.K., Tsai, J., Naslund, J., Vincent, B., Edgar, M., Checler, F., et al. (2000). Внутринейронное накопление Abeta42 в головном мозге человека. утра. Дж. Патол. 156, 15–20. doi: 10.1016/s0002-9440(10)64700-1

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Джаухар, С., Травикка, А., Дженнекенс, К., Байер, Т. А., и Виртс, О. (2012). Дефицит моторики, потеря нейронов и снижение тревожности, совпадающие с дегенерацией аксонов и внутринейрональной агрегацией Abeta в мышиной модели болезни Альцгеймера 5XFAD. Нейробиол. Старение 33, 196.e29–40. doi: 10.1016/j.neurobiolaging.2010.05.027

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Цзи, Л., Чжао, X., Лу, В., Чжан, К., и Хуа, З. (2016). Внутриклеточный абета и его патологическая роль при болезни Альцгеймера: уроки от клеточных до животных моделей. Курс. Альцгеймер Res. 13, 621–630. дои: 10.2174/1567205013666160322142226

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Цзян, Б., Алиян А., Кук Н.П., Августин А., Бхак Г., Мальдонадо Р. и соавт. (2019). Мониторинг образования амилоидных олигомеров с помощью анизотропии фотолюминесценции. Дж. Ам. хим. соц. 141, 15605–15610. doi: 10.1021/jacs.9b06966

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Каку, Х., Ладлоу, А.В., Гуткнехт, М.Ф., и Ротштейн, Т.Л. (2020). FAIM противостоит агрегации мутантного SOD1, который типичен для некоторых форм семейного бокового амиотрофического склероза. Фронт. Неврологи. 14:110. doi: 10.3389/fnins.2020.00110

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Каку, Х., и Ротштейн, Т.Л. (2009a). Молекула, ингибирующая апоптоз Fas, усиливает передачу сигналов CD40 в В-клетках и увеличивает компартмент плазматических клеток. Дж. Иммунол. 183, 1667–1674. doi: 10.4049/jimmunol.06

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Каку, Х., и Ротштейн, Т.Л. (2009b). Экспрессия молекулы, ингибирующей апоптоз Fas, в В-клетках регулируется через IRF4 по механизму прямой связи. Дж. Иммунол. 183, 5575–5581. doi: 10.4049/jimmunol.08

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Каку, Х., и Ротштейн, Т.Л. (2020). FAIM является неизбыточным защитником клеточной жизнеспособности перед лицом тепла и окислительного стресса и препятствует накоплению индуцированных стрессом белковых агрегатов. Фронт. Мол. Бионауч. 7:32. doi: 10.3389/fmolb.2020.00032

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кикис, Э.А., Гидалевиц Т. и Моримото Р.И. (2010). Белковый гомеостаз в моделях старения и возрастных конформационных заболеваний. Доп. Эксп. Мед. биол. 694, 138–159. дои: 10.1007/978-1-4419-7002-2_11

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Комацу М., Вагури С., Тиба Т., Мурата С., Ивата Дж., Танида И. и др. (2006). Потеря аутофагии в центральной нервной системе вызывает нейродегенерацию у мышей. Природа 441, 880–884. doi: 10.1038/nature04723

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

ЛаФерла, Ф.М., Грин, К.Н., и Оддо, С. (2007). Внутриклеточный бета-амилоид при болезни Альцгеймера. Нац. Преподобный Нейроски. 8, 499–509.

Академия Google

Lee, H.-J., Suk, J.-E., Patrick, C., Bae, E.-J., Cho, J.-H., Rho, S., et al. (2010). Прямой перенос альфа-синуклеина из нейрона в астроглию вызывает воспалительные реакции при синуклеинопатиях. J. Biol. хим. 285, 9262–9272. doi: 10.1074/jbc.M109.081125

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ли, С., Карсон К., Райс-Фихт А. и Гуд Т. (2006). Небольшие белки теплового шока по-разному влияют на агрегацию и токсичность Абета. Биохим. Биофиз. Рез. коммун. 347, 527–533. doi: 10.1016/j.bbrc.2006.06.128

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ли, М., Чен, Л., Ли, Д.Х.С., Ю, Л.-К., и Чжан, Ю. (2007). Роль внутриклеточного бета-амилоида при болезни Альцгеймера. Прог. Нейробиол. 83, 131–139. doi: 10.1016/j.pneurobio.2007.08.002

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лук, В., Кем, К. С., Кэрролл, Дж., Чжан, Б., О’Брайен, П., Трояновски, Дж. К., и соавт. (2012). Патологическая передача альфа-синуклеина инициирует паркинсоноподобную нейродегенерацию у нетрансгенных мышей. Наука 338, 949–953. doi: 10.1126/science.1227157

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лук, В. М., Кем, К. С., Чжан, Б., О’Брайен, П., Трояновски, Дж.Q. и Ли, В.М. (2012). Внутримозговая инокуляция патологического альфа-синуклеина инициирует быстро прогрессирующую нейродегенеративную альфа-синуклеинопатию у мышей. Дж. Экспл. Мед. 209, 975–986. doi: 10.1084/jem.20112457

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мальмос, К.Г., Бланкас-Мехиа, Л.М., Вебер, Б., Бюхнер, Дж., Рамирес-Альварадо, М., Наики, Х., и соавт. (2017). ThT 101: учебник по использованию тиофлавина Т для исследования образования амилоида. Амилоид 24, 1–16. дои: 10.1080/13506129.2017.1304905

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Масуда-Сузукаке М., Нонака Т., Хосокава М., Ойкава Т., Араи Т., Акияма Х. и др. (2013). Прионоподобное распространение патологического альфа-синуклеина в головном мозге. Мозг 136, 1128–1138. дои: 10.1093/мозг/awt037

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Макэлари Л., Плоткин С. С. и Кэшман Н.Р. (2019). Новые разработки в области протеотоксичности при нейродегенеративных заболеваниях. Препараты ЦНС 33, 883–904. doi: 10.1007/s40263-019-00657-9

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мун, М. , Хонг, Х.-С., Нам, Д.В., Байк, С.Х., Сонг, Х., Кук, С.-Ю., и др. (2012). Накопление внутриклеточного бета-амилоида в нейронах с дефицитом кальций-связывающего белка приводит к образованию бляшек бета-амилоида в модели болезни Альцгеймера на животных. Дж.Дис. Альцгеймера. 29, 615–628. doi: 10.3233/JAD-2011-111778

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мужено, А.-Л., Никот, С., Бенчик, А., Моринья, Э., Верчер, Дж., Лахдар, Л., и др. (2012). Прионообразное ускорение синуклеинопатии в модели трансгенных мышей. Нейробиол. Старение 33, 2225–2228. doi: 10.1016/j.neurobiolaging.2011.06.022

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ниллегода, Н.Б., Кирштейн Дж., Шлачич А., Беринский М., Станк А., Стенгель Ф. и соавт. (2015). Кошапероновый комплекс Crucial HSP70 разблокирует дезагрегацию белков многоклеточных животных. Природа 524, 247–251. doi: 10.1038/nature14884

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Олссон, Т. Т., Клементьева, О., и Гурас, Г. К. (2018). Прионоподобный посев и зародышеобразование внутриклеточного бета-амилоида. Нейробиол. Дис. 113, 1–10. doi: 10.1016/j.nbd.2018.01.015

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Парк, Дж., Choi, H., Min, J.-S., Kim, B., Lee, S.-R., Yun, J.W., et al. (2015). Потеря митофузина 2 связывает опосредованную бета-амилоидом фрагментацию митохондрий и индуцированный Cdk5 окислительный стресс в нейронных клетках. Дж. Нейрохим. 132, 687–702. doi: 10.1111/jnc.12984

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Planells-Ferrer, L., Urresti, J., Coccia, E., Galenkamp, ​​K.M.O., Calleja-Yague, I., Lopez-Soriano, J., et al. (2016). Молекулы, ингибирующие апоптоз Fas: больше, чем антагонисты рецепторов смерти в нервной системе. Дж. Нейрохим. 139, 11–21. doi: 10.1111/jnc.13729

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Поланко, Дж. К., Ли, К., Бодеа, Л. Г., Мартинес-Мармол, Р., Менье, Ф. А., и Гоц, Дж. (2018). Сложные бета-амилоиды и тау – к улучшению биомаркеров и таргетной терапии. Нац. Преподобный Нейрол. 14, 22–39. doi: 10.1038/nrneurol.2017.162

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Принс, М., Брайс, Р., Albanese, E., Wimo, A., Ribeiro, W., and Ferri, C.P. (2013). Глобальная распространенность деменции: систематический обзор и метаанализ. Болезнь Альцгеймера. 9, 63–75.e2.

Академия Google

Раман Б., Бан Т., Сакаи М., Паста С.Ю., Рамакришна Т., Наики Х. и др. (2005). AlphaB-кристаллин, небольшой белок теплового шока, предотвращает рост амилоидных фибрилл амилоидного бета-пептида и бета2-микроглобулина. Биохим. Дж. 392, 573–581. дои: 10.1042/BJ20050339

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шнайдер, Т.Дж., Фишер Г.М., Донохью Т.Дж., Коларуссо Т.П. и Ротштейн Т.Л. (1999). Новый ген, кодирующий молекулу, ингибирующую апоптоз Fas (FAIM), выделенную из индуцибельно устойчивых к Fas В-лимфоцитов. Дж. Экспл. Мед. 189, 949–956. doi: 10.1084/jem.189.6.949

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сегура, М.Ф., Соле, К., Паскуаль, М., Мубарак, Р.С., Перес-Гарсия, М.Дж., Гоззелино, Р., и соавт. (2007). Длинная форма молекулы, ингибирующей апоптоз Fas, специфически экспрессируется в нейронах и защищает их от апоптоза, запускаемого рецептором смерти. J. Neurosci. 27, 11228–11241. doi: 10.1523/JNEUROSCI.3462-07.2007

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шортер, Дж. (2011). Механизм дезагрегации млекопитающих: Hsp110 взаимодействует с Hsp70 и Hsp40, катализируя дезагрегацию и реактивацию белка в бесклеточной системе. PLoS One 6:e26319. doi: 10.1371/journal.pone.0026319

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сиддики, М. К., Маджид Н., Малик С., Алам П. и Хан Р. Х. (2019). Амилоидные олигомеры, протофибриллы и фибриллы. Субъячейка. Биохим. 93, 471–503. дои: 10.1007/978-3-030-28151-9_16

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Stohr, J., Watts, J.C., Mensinger, Z.L., Oehler, A., Grillo, S.K., Dearmond, S.J., et al. (2012). Очищенные и синтетические бета-амилоидные (Абета) прионы болезни Альцгеймера. Проц. Натл. акад. науч. США 109, 11025–11030. doi: 10.1073/pnas.1206555109

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Суини, Э.А. и Шортер Дж. (2016). Механистическое и структурное понимание активности прион-дезагрегации Hsp104. Дж. Мол. биол. 428, 1870–1885 гг. doi: 10.1016/j.jmb.2015.11.016

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Такахаши Р. Х., Милнер Т. А., Ли Ф., Нам Э. Э., Эдгар М. А., Ямагути Х. и соавт. (2002). Внутринейронная альцгеймеровская бета42 накапливается в мультивезикулярных тельцах и связана с синаптической патологией. утра. Дж. Патол. 161, 1869–1879 гг. doi: 10.1016/s0002-9440(10)64463-x

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Усенович, М., Нирооманд, С., Дролет, Р.Е., Яо, Л., Гаспар, Р.К., Хэтчер, Н.Г., и соавт. (2015). Интернализованные олигомеры тау вызывают нейродегенерацию, индуцируя накопление патогенного тау в нейронах человека, полученных из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток. J. Neurosci. 35, 14234–14250. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1523-15.2015

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Вендлер, П., Шортер Дж., Плиссон С., Кашикар А.Г., Линдквист С. и Сайбил Х.Р. (2007). Атипичная упаковка субъединиц AAA+ создает расширенную полость для дезагрегации фактором ремоделирования белка Hsp104. сотовый 131, 1366–1377. doi: 10.1016/j.cell.2007.10.047

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Wilson, E.N., Abela, A.R., Do Carmo, S., Allard, S. , Marks, A.R., Welikovitch, L.A., et al. (2017). Внутринейрональное накопление бета-амилоида нарушает экспрессию CRTC1-зависимого гена в гиппокампе и когнитивную функцию в крысиной модели болезни Альцгеймера. Церебр. Кора 27, 1501–1511. DOI: 10.1093/cercor/bhv332

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чжун, X., Шнайдер, Т.Дж., Кабрал, Д.С., Донохью, Т.Дж., и Ротштейн, Т.Л. (2001). Альтернативно сплайсированная длинная форма молекулы, ингибирующей апоптоз Fas (FAIM), с тканеспецифической экспрессией в головном мозге. Мол. Иммунол. 38, 65–72. doi: 10.1016/s0161-5890(01)00035-9

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Юмори-Каку с.Город Санта-Клара

Подано 30 декабря 2020 г. УТВЕРЖДЕНО ДЛЯ ПУБЛИКАЦИИ В АПЕЛЛЯЦИОННОМ СУДЕ ШЕСТОГО АПЕЛЛЯЦИОННОГО ОКРУГА ШТАТА КАЛИФОРНИЯ LADONNA YUMORI-KAKU et al., H046105, H046696 (истцы и ответчики округа Санта-Клара, Super. Ct № 17CV319862) против ГОРОДА САНТА-КЛАРА, ответчик и апеллянт. Пять американцев азиатского происхождения подали в суд на город Санта-Клара (город), утверждая, что выборы в городской совет на свободе нарушили Закон Калифорнии об избирательных правах 2001 года.Суд первой инстанции согласился после коллегиального судебного разбирательства, что случаи расово поляризованного голосования подорвали способность избирателей азиатского происхождения в результате разбавления голосов избирать предпочитаемых ими кандидатов в городской совет Санта-Клары, состоящий из семи человек. Он приказал городским властям провести районные выборы в городской совет и присудил истцам гонорары адвокатов и судебные издержки на общую сумму более 3 миллионов долларов. При подаче апелляции городские власти оспаривают решение суда первой инстанции об ответственности и вытекающую из него компенсацию судебных издержек и судебных издержек.Городские власти утверждают, что суд первой инстанции ошибся с точки зрения закона, заключив, что поляризованное по расовому признаку голосование на пяти из 10 выборов в городской совет соответствовало стандарту для признания права голоса, которое требует доказательства того, что блок с большинством голосов в электорате Санта-Клары « обычно» проголосовали за победу над кандидатом, которого предпочитают избиратели американцев азиатского происхождения. Городские власти также оспаривают использование судом первой инстанции статистических доказательств в поддержку своих выводов о расово поляризованном голосовании. Городские власти утверждают, что введение судом первой инстанции «расовых округов» на основании юридически неадекватных выводов о расово поляризованном голосовании нарушило пункт о равной защите Конституции Соединенных Штатов и полномочие города как чартерного города в соответствии с Конституцией Калифорнии контролировать порядок и порядок избрания его должностных лиц.Мы не находим обратимой ошибки в толковании судом первой инстанции руководящих правовых принципов и применении им закона к доказательствам, представленным в суде. I. ИСТОРИЯ ВОПРОСА A. Обзор нормативно-правовой базы, регулирующей голосование на расовой почве Это дело касается обеспечения соблюдения Закона штата Калифорния об избирательных правах от 2001 г. (Кодекс электроэнергетики, §§ 14025-14032, далее «Закон»)1 и толкования федеральных избирательных прав. закон, на основе которого Закон был частично смоделирован. Закон предоставляет членам защищенного класса право на частное оспаривание методов выборов в их политическом подразделении.В разделе 14027 говорится, что «метод избрания на свободе не может навязываться или применяться таким образом, который ограничивает способность защищенного класса избирать кандидатов по своему выбору или его способность влиять на исход выборов, как в результате ослабления или ущемления прав избирателей, являющихся членами защищенного класса, как это определено в соответствии со статьей 14026». Чтобы доказать нарушение раздела 14027, защищенный класс должен доказать, что оспариваемый метод голосования снижает его способность избирать предпочтительных кандидатов или влиять на результаты выборов из-за ослабления или ограничения его права голоса.(§ 14027.) Истец должен продемонстрировать расово поляризованное голосование, чтобы доказать нарушение раздела 14027. …

Оригинал документа
Источник: Все последние иммиграционные решения всех апелляционных судов США

SCI KAKUET a 64200 Arcangues gestion immobilière et SCI (64) Annuaire Français

Презентация SCI KAKUET / gestion immobilière et SCI

 

Chemin de HOTCHAENIA
64200 — Арканг

 

Трудовые отношения ✆ Не коммюнике


Boutique en ligne: (неточно)
Факс:

Интернет-сайт:

 

  • Залоги направляют в меню сайта в Интернете:

 

Гореры увертюры :

Les horaires d’ouverture ne sont pas encore indiqués

Геолокализация GPS:

Координаты GPS (1):
ШИРОТА: 43. 424446
ДОЛГОТА: -1,523285

Инскрит в категориях:

Активность *:

L’établissement SCI KAKUET для деятельности: Location de terrains et d’autres biens immobiliers, Société civile immobilière, 6820B, cree le 19 mars 2012, siege main.

Дополнение к обществу / établissement *:

  • Nom de l’retreprise / ÉtabreteSement: SCI Kakuet
  • Établemment Главный: OUI
  • Дата Création: 19 Марс 2012
  • Дата де-Дебора D’Activité: 19 Марс 2012
  • APE: 6820B
  • Secteur D’Activité : Расположение De Greenains et d’Autres Biens Immobiliers
  • Nature de l’Activité: Non Reneigné
  • SoCiété Civile Immobilière
  • Numéro de Siren: 750347205
  • Numéro de Siret: 75034720500015
  • NIC: 00015
  • Effectif Nombree de Salarié s) Ежегодный 2012 год: 0 окладов
  • Эксплуатация поверхности: неиндикаторная

Cette Fiche est la vôtre? Mettez à jour / corriger / supprimer

Vous aimez cet établissement ? Faites-le savoir !!!

Дополнительные объявления

 

Il n’y aucune publicité sur les payantes inscriptions.

Другие адреса предприятия

 

Сайты Réseaux Sociaux & autres

 

Nos autres site Web :

Сюр-ле-резо-социо

Рекламные акции или сообщения

 

 

Советы по сайтам

 

Quelques sites conseillés par l’entreprise:

Предприятия друзей

 

Parmis les entreprises amies :

Веб-страницы

 

Страницы веб-индексации: (Extrait du moteur de recherche Premsgo)

Cette page à été regénérée en date du mercredi 8 avril 2020  à 00:40:12.
Информация о модификаторе Pour ces, vous devez être l’établissement SCI KAKUET ou agréé par celui-ci.

(1) Проведите геолокализацию в соответствии с точными данными и поиском координат GPS-требований, вы можете получить консультацию у консультанта по сайту. кадастр оу celui де ЛИНГ pour des cartes et services personalisés.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.