Заменить сыр в салате — какие виды сыра подходят для замены в салатах
Сыр – важный продукт. Поэтому он всегда или почти всегда есть в холодильнике. Однако чтобы следовать строго рецепту приготовления салатов, нужно запастись немалым количеством его сортов. Фета, Моцарелла, Дор Блю и многие другие не только дорого стоят, но еще и купить их можно зачастую только в крупных супермаркетах. Правда, стоит отметить, что для домашнего обеда всегда можно подобрать им альтернативную замену. Неискушенные в кулинарии гости даже не заметят подмену.
Сыр Фета
Этот сорт сыра традиционно используется для приготовления Греческого салата. Фета относится к рассольным сырам. Она имеет слегка солоноватый вкус и легко крошится в руках.
Очевидно, что вместо Феты можно взять брынзу или сыр Адыгейский. Они относятся к тому же сорту сыра, только имеют более соленый вкус. Чтобы избавится от него, можно сыр заранее вымочить в молоке или положить его меньше, чем по рецепту.
Еще можно заменить Фету зернистым творогом. Достаточно его откинуть на сито, чтобы удалить сливки. Он будет похож на нее не только по структуре, но вкусу. Останется только хорошо посолить и приправить салат. Даже гурманы с трудом отличат творог от оригинального сыра Фета.
Сыр Моцарелла
Немного труднее подобрать замену этому сыру. Без нее салат Капрезе, конечно, потеряет часть своего очарования. Моцареллу отличает нежный сливочный вкус, бледно-желтый цвет и легкий аромат сыра. Очень близок к нему по консистенции и внешнему виду грузинский Сулугуни. Он не менее вкусен, а поэтому вряд ли кто заметить подмену.
В крайнем случае, можно еще взять на замену болгарскую брынзу или Адыгейский сыр. Только их желательно предварительно вымочить в молоке, чтобы они были не такими солеными. А еще очень близок по вкусу домашний сыр, который готовят многие фермеры. Правда, он тоже стоит недешево. Если есть время, его можно приготовить самостоятельно.
Приготовление пищи становится иску(с/с)твом тогда, когда ты придумываешь что-то свое. Поразительное многообразие продуктов питания которые находят пр..менение в кухнях на всем земном шаре, оставляют огромное поле для фантазии.
Профе(сс/с)ия повара востребована в любой отрасли. Хороший сп..циалист по приготовлению пищи нужен везде: в роддоме, детском саду, на заводе, в современном офисе и шикарном р..сторане. Состоявшийся повар никогда не останется без работы.
(Проверка работы в группах, выставляем баллы).
Закрепление. Тест по русскому языку. (Индивидуальная работа).
Найдите слово с буквой «е».
А. Фантаз..я. Б. Темп..ратура. В. Шп..нат.
2. Найдите слово с одной «н».
А. Серебрян..ый. Б. Фарширован..ый. В. Заморожен..ый.
3. Найдите слово с буквой «и».
А. Цел..устремленный. Б. Фр..тата. В. Чедд..р.
4. Найди слово с одной «с».
А. Профес..ия. Б.Специалис..т. В. Комис..ия.
5. Найди слово с двойными буквами.
А. Ветрен..ый. Б. Замешан..ый. В. Посажен..ый (отец).
6. Найдите профессиональное слово повара с буквой «е»..
А. Веч..р . Б. Штруд..ль. В. Кор..дор.
7. Найдите слово с буквой «с».
А. Бе..печный. Б. Бе..заботный. В. ..дешний.
8. Найдите глухой звук.
А. Ра..делать. Б. ..доровье. В. Р..цепт.
Мини – проект. Составьте маленький текст по 2 человека (Взять по 4 слова из предложенных, без значения, дать им определение с юмором).
ПОВАРСКОЙ СЛОВАРИК с юмором.
АРХИВАРИУС – главный повар .
ВАРВАР – повар, взявший на себя повышенные обязательства .
ВАРЯГИ – нечестные повара.
ДОКЛАДЧИК – щедрый повар .
ЖЕЛЕЗЯКА – кондитер, изготавливающий желе.
ЖЕЛТУХА – кондитер, отделяющий желтки от белков.
НАКЛАДКА – повар на раздаче.
ПАРКЕТЧИК – повар, готовящий кету на пару.
ПОДЖАРЫЙ – невезучий повар.
ПРИМАНКА – повар в детском саду.
ПРОТЕСТАНТ – кондитер, постоянно говорящий про тесто.
ПУДИНГ – пирог весом 16 кг.
САМОВАР – повар-камикадзе.
СБИВЧИВЫЙ – кондитер в запарке.
СВАРА – перебранка между поварами.
СТАЖИРОВКА – шикарный обед на сто человек.
СУПОСТАТ – повар, ведущий статистику первых блюд.
СУФЛЁР – кондитер, приготавливающий суфле.
ТРУСЛИВЫЙ – повар, который трёт сливы на компот.
ТУХЛЯТИНА – плитка, которая постоянно тухнет.
УТВАРЬ – повар, который варит уток.
УТИЛЬ – утка не пригодная к употреблению.
ХАРЧО – суп, в который плюнули.
ХУДОЩАВЫЙ – повар, у которого плохо получаются щию
ЧАСТУШКА – повариха, которая всё тушит один час.
Чтение проектов в группах по 5 человек, 5 групп.
Домашнее задание: составить самый оригинальный рецепт.
Список литературы:
http://www.barflagman.ru/cook/ID-Меню-61.html
http://www.o-urok.ru/pq_userpage.php?id=492.
http://olegindeykin.jimdo.com/весёлый-словарик-поварской/
Фета и Брынза. В чем разница?
Некоторые люди путают белые сыры брынзу и фета. Внешне они, действительно, немного похожи, но по всем остальным параметрам (от вкуса до способа приготовления) существенно отличаются друг от друга.
Разница между сыром фета и брынзой
Прежде всего, стоит отметить, что любой сыр может быть качественным, только если для его приготовления использовалось качественное сырье: фермерское молоко и молочную продукцию с фермы.
Ниже мы подробно изучим, чем отличаются между собой эти сыры, один из которых — фета — имеет греческое происхождение и готовится из овечьего молока с добавлением козьего, а второй — брынза — пришел к нам из Восточной Европы и делают его из разных видов молока.
Вкус и способ изготовления
Фета пикантна на вкус и имеет легкую, нежную кислинку, она достаточно мягкая и благородная.
Вкус брынзы бывает разным и связан со сроком пребывания в рассоле. Этот сыр всегда готовится в рассоле и, чем дольше он там лежит, тем более насыщенный вкус получается в итоге. Чаще всего брынзу отличает высокая соленость и острота.
Состав и питательные вещества
Фета содержит много белка, а также в ней присутствует кальций и витамин А, она снижает уровень холестерина и укрепляет иммунитет. В брынзе тоже есть ряд полезных веществ: натрий, фосфор, калий и сера, употребление этих элементов положительно сказывается на состоянии кожи, зубов, костей и зрения. При этом калорийность значительно (почти в 1,5 раза) выше у сыра фета.
Внешний вид
Несмотря на визуальную схожесть, эти сыры все же отличаются друг от друга. Фета всегда белая, имеет более мягкую и нежную консистенцию. Брынза имеет цвет от белого до кремового ее структура более плотная и ломкая.
Где купить сыры фета и брынза?
Сеть супермаркетов «Лэнд» предлагает полный ассортимент молочной продукции, которую поставляют лучшие заводы России и фермы Ленинградской Области. Это и молоко, и творог, и натуральные сливки, и йогурты, и многое другое.
Кроме того, в наших супермаркетах вы всегда можете купить брынзу и сыр фета в СПб. Если Вы хотите приобрести сыр брынза в СПб или натуральный сыр фета, выбирайте ближайший к вашему дому супермаркет. Наши специалисты помогут вам найти подходящий сыр.
Поделиться:
Все публикации
Характеристика сыра майская брынза из различных регионов Словакии на основе микробиологического, молекулярного исследования и исследования основных летучих одорантов
Характеристика сыра майской брынзы
251
Лондон: Academic Press, 1990, стр. 315–321. ISBN
0-12-372181-4.
26. Quigley, L. – O’Sullivan, O. – Stanton, C. –
Beresford, T.P. – Ross, R.P. – Fitzgerald, G.F. –
Cotter, P.D.: Комплексная микробиота сырого молока.
Микробиологические обзоры FEMS, 37, 2013 г., стр. 664–698.
DOI: 10.1111/1574-6976.12030.
27. Fuentefria, AM – Suh, SO – Lan-
dell, MF – Faganello, J. – Schrank, A. – Vain-
stein, MH – Blackwell, M. – Valente, P.: Trichosporon
инсекторум зр. nov., новые анаморфные базидиомицеты-
киллерные дрожжи. Микологические исследования, 112, 2008,
стр. 93–99. DOI: 10.1016/j.mycres.2007.05.001.
28.Gujjari, P. – Suh, S.O. – Coumes, K. – Zhou, J.J.:
Характеристика масличных дрожжей выявила два
новых вида: Trichosporon cacaoliposimilis sp. ноябрь
и Trichosporon oleaginosus sp. ноябрь Mycologia,
103, 2011, стр. 1110–1118. DOI: 10.3852/10-403.
29. Ким, М. – Моррисон, М. – Ю, З. : Оценка
различных областей частичной последовательности гена 16S рРНК
для филогенетического анализа микробиомов. Журнал
микробиологических методов, 84, 2011, стр.81–87.
DOI: 10.1016/j.mimet.2010.10.020.
30. Чанжек Майхенич, А. – Мохар Лорберг, П. – Рогель, И.:
Характеристика сообщества Lactobacillus в
традиционном карстском овечьем сыре. Международный журнал
молочных технологий, 60, 2007 г., стр. 182–190. DOI:
10.1111/j.1471-0307.2007.00336.x.
31. Погачич, Т. – Самаржия, Д. – Корич, В. –
Д’Андреа, М. – Кагкли, Д. М. – Джакоми-
н.и., А.– Чанжек Майхе нич, А. – Рогель, И.: Микробиота
каракачанского скакутанаца, кустарного свежего
овечьего сыра, изученного с помощью независимой от культуры ПЦР-
ARDRA и ПЦР-DGGE. Молочная наука и технология
, 90, 2010 г., стр. 461–468. DOI: 10.1051/
dst/2010004.
32. Алегрия, А. – Щесны, П. – Майо, Б. – Бардов-
ски, Й. – Ковальчик, М.: Биоразнообразие в Осцыпеке,
традиционный польский сыр, определяемый культурно-
зависимыми и независимыми подходами.
Прикладная и экологическая микробиология, 78, 2012 г.,
, стр. 1890–1898. DOI: 10.1128/АЕМ.06081-11.
33. Голич, Н. – Чадеж, Н. – Терзич-Видоевич, А. –
Шуранска, Х. – Беганович, Й. – Лозо, Й. – Кос,
Б. – Шушкович, Й. – Распор, П. – Тописирович, Л.:
Оценка разнообразия молочнокислых бактерий и дрожжей
в традиционных белых рассольных и свежих мягких сырах
из горных районов Сербии и равнинных
земельных районов Хорватии.Международный журнал
Food Microbiology, 166, 2013 г., стр. 294–300. DOI:
10.1016/j.ijfoodmicro.2013.05.032.
34. Уолтер, Дж. – Таннок, Г.В. – Тилсала-Тимисьяр ви, А. –
Родтонг, С. – Лоуч, Д.М. – Манро, К. – Алато-
Ссава, Т.: Обнаружение и идентификация желудочно-кишечные
виды Lactobacillus с использованием денатурирующего
гель-электрофореза и видоспецифических ПЦР
праймеров. Прикладная и экологическая микробиология,
66, 2000, стр.297–303. DOI: 10.1128/AEM.66.1.297-
303.2000.
Поступила в редакцию 29 января 2015 г.; пересмотрено 12 марта 2015 г.; принято
18 марта 2015 г.; опубликовано онлайн 16 апреля 2015 г.
Органолептические характеристики трех итальянских ЗОП овец
молочных сыров. International Dairy Journal, 13, 2003,
стр. 961–972. DOI: 10.1016/S0958-6946(03)00145-6.
16. Randazzo, C.L. – Pitino, I. – Ribbera, A. –
Caggia, C.: Сыр Pecorino Crotonese: исследование
бактериальной популяции и вкусовых соединений.Еда
Микробиология, 27, 2010, стр. 363–374. DOI: 10.1016/j.
фм.2009.11.010.
17. Dubernet, S. – Desmasures, N. – Guéguen, M.:
Метод ПЦР для идентификации лактобацилл
на уровне рода. FEMS Microbiology Letters, 214,
2002, стр. 271–275. DOI: 10.1111/j.1574-6968.2002.
tb11358.x.
18. Ward, L.J.H. – Timmins, M. J.: Дифференциация
Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei и
Lactobacillus rhamnosus с помощью полимеразной цепной реакции.Letters in Applied Microbiology, 29, 1999,
, стр. 90–92. DOI: 10.1046/j.1365-2672.1999.00586.x.
19. Song, YL – Kato, N. – Liu, CX – Matsu-
miya, Y. – Kato, H. – Watanabe, K.: Быстрая идентификация
катиона 11 кишечных бактерий Lactobacillus
методом мультиплексной ПЦР с использованием группо- и видово-
специфических праймеров, полученных из межгенной спейсерной области 16S–23S рРНК
и фланкирующей ее 23S рРНК.
FEMS Microbiology Letters, 187, 2000, стр.167–173.
DOI: 10.1016/S0378-1097(00)00196-8.
20. Guarneri, T. – Rossetti, L. – Giraffa, G.: Быстрая идентификация Lactobacillus brevis с использованием полимеразной
цепной реакции. Letters in Applied Microbiology, 33,
2001, стр. 377–381. DOI: 10.1046/j.1472-
765X.2001.01014.x.
21. Душкова, М. – Шедо, О. – Кшицова, К. – Здрагал, З. –
Карпишкова, Р.: Идентификация лактобацилл, выделенных из пищевых продуктов
, генотипическими методами и MALDI-TOF-
MS .Международный журнал пищевой микробиологии,
159, 2012 г., стр. 107–114. DOI: 10.1016/j.ijfoodmi-
cro.2012.07.029.
22. Одамаки, Т. – Йонезава, С. – Китахара, М. –
Сугахара, Ю. – Сяо, ДЗ – Яэсима, Т. – Ива-
цуки, К. – Окума, М.: Роман Набор мультиплексных полимерных
праймеров для цепной реакции с меразой для идентификации видов Lactococcus. Letters in Applied
Microbiology, 52, 2011, стр. 491–496. DOI:
10.1111/j.1472-765X.2011.03028.x.
23. Лейн Д. Дж.: секвенирование 16S/23S рРНК. В:
Stackebrandt, E. – Goodfellow, M.: Nucleic acid
методы в бактериальной систематике. Нью-Йорк: John
Wiley and Sons, 1991, стр. 115–148. ISBN 0–471–
–9.
24. Walter, J. – Hertel, C. – Tannock, GW –
Lis, CM – Munro, K. – Hammes, WP: обнаружение
видов Lactobacillus, Pediococcus, Leuconostoc и
видов Weissella у человека фекалии с использованием специфичных для группы
праймеров для ПЦР и денатурирующего градиента
гель-электрофореза.Прикладная и экологическая
Микробиология, 67, 2001, стр. 2578–2585. DOI:
10.1128/AEM.67.6.2578-2585.2001.
25. Уайт, Т.Дж. – Брунс, Т. – Ли, С. – Тейлор, Дж.:
Амплификация и прямое секвенирование грибковых рибо-
генов сомы РНК для филогенетики. В: Innis, MA –
Gelfand, DH – Sninsky, JJ – White, TJ: PCR
протоколы: руководство по методам и приложениям.
Ответ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Ubridge | Генеральный директор, спрятанный на Сыр, который разрезан с 7 буквами | Adelost | | | | сыр с 7 буквами | | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Alfredo | со сливочным сыром соусом с 7 буквы | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
+++ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ALFREDO | Подается со сливочным сыром соусом с 7 буквами | | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
сыр с 7 буквами | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
AngeloT | Нормандия сыр.![]() | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
+++ | +++ | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
сыр Нормандия с 7 буквами | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
богатый норман сыр с 7 буквами | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Annatto | Краситель для сыра с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ATEFETA | Есть сыр? С 7 буквками | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| | | | | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
сыр с 7 буквами | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Balfour | Сыр с 7 буквками | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Baserri | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Beseech умоляют британский сыр, для изменения с 7 буквами | | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
+++ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Beseech | просить немного хлеба и сыра, распространенные с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Beseech | просить хлеб изначально, то сыр спрет с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Bismark | сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
БЛЮБРИ | Сыр с 7 буквами | 902 65|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| | | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Club Idiot, заправляющий в сыр с 7 буквами | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Откуп | аморальная практика заражения сыра с черными линиями с 7 буквками | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
кратко | с сыром Whiz в двух словах (7) с 7 буквами||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
+++ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Кратко | Fly идет за липким сыром почти мгновенно с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
КРАТКОЕ | Бегите за сыром, через мгновение (7) с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
КРАТКОЕ ОБРАЗ в большинстве насекомых | кратко | Быстро гонка после сыра с 7 буквами | Кратко | Короче | Короче говоря, сырный паразит с 7 буквами | BRIOCHE | Междомаснение от Scotsman Tucking В сырной ролл с 7 буквками | +++ | | | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Brioche | после утки, ребенок, заправленный в сырный ролл с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
British | родной Сначала с 7 буквками | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Brownie | Руководство по заправлению в сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
+++ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
БРАУНИ | Сделать для камеры характерный «сыр» снаружи? С 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Brunost | | | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Buffalo | сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Burrata Сыр с 7 буквами | | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Byaslag | | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
сыр с 7 буквами | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Камеры | производителей сыра? С 7 буквками | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAPRANO | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
сыр с 7 буквами | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Capriny | сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Carlina Сыр с 7 буквами | | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Carmody | | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cateins | Сырные основания с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Как сыр с 7 буквами | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Chaumes | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | +++ | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
+++ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | сыр с крекерами с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ЧЕДДЕР | Английский сыр Е с 7 буквками | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | Тип сыра с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | Жесткий сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | Популярный сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | Глава Taco с 7 буквами | | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Сыр, используемый в начос с 7 буквами | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | острый сыр, возможно, с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | Welsh Redbit сыр с 7 буквками | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | острый сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CHEDDAR | Чизбургер сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | Самый популярный сыр Британии 7 букв | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
902 69 ЧЕДДАР | Деревня Сомерсет, известная своим сыром.![]() | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | Сыр из Англии с 7 буквами | | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | Cheddar||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | Сыр по имени на английском языке с 7 буквками | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | Сыр Первоначально от Сомерсет, Англия с 7 буквками | | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | Ущелье с пещерами — сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CHEDDAR | Сыр из Сомерсет с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | вид розового сыра с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cheddar | маленький ребенок имеет необычное страх на страх сыра с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CHEDDAR | IBSEN Charace в кредит получает сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CHEDDAR | Ущелье — сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
сыр с 7 буквами | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Clamdip | Это может включать сливочный сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
КЛЭПТОН | Сливочный сыр? С 7 буквками | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
коттедж | | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
+++ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Коттедж | Тип сыра или промышленности с 7 буквами||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Коттедж | ___ сыр.![]() | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
КОТТЕДЖ | Тип сыра из 7 букв | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
КОТТЕДЖ | Сырный пирог? С 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Кусочек | 70260 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Держатель сыра с 7 буквами | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cremont | сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Criffel | Сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Croghan Croghan | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
игра о получении сыра для менее 7 букв | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
+++ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Croquet | Сыр увернут для начала шахматной игры с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
крокет | маленький вкус сыра чеддер, не для игры с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Crottin | сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CROWDIE | Сыр с 7 л Тетры | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| | | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cuajada | сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Cubetto | сыр С 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| | Источники сыра и сыра 7 букв | | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
+++ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Места молока | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
сыр с 7 буквами | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
9 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Получить отчет после надоедания с сыром наполнение 7 букв | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Doré-Mi | Сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
DO UBLET | Сыр с 7 буквками | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Drommen | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Editive | Питание бесконечного сыра, Лестера, возможно, с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ESSAYED | Пытались, возможно, заполнить середину сырной тарелки 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ОТЦЫ | Родители держат С 7 буквками | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Filetta | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Сырные блюда с 7 буквами | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
+++ | Образец | растопленный сыр Блюда с 7 буквами | Фонты 70270 | сырные блюда нежные, используйте хеш с 7 буквами | | место для воды в сыре с 7 буквами | +++ | | | Fontina | | | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Francis | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Фризла | Сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Французский сыр с 7 буквы | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
+++ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ФРОМАЖ | Сыр: о.![]() | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Gabriel | Ангел делает девушку с едой сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
+++ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Gabriel | мальчик делает девушку с едой сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Galbani | Сыр с 7 буквками | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Gamonéu | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Geitost | Сыр с 7 буквами | Гуаш | Краска сыра без полукругии, половина Сыр с 7 буквами | Grays | | сыр с 7 буквами | Большой | Орел наблюдается после звука инструмента для сыра (7,7) с 7 буквами | Greuilh | Сыр с 7 буквами | GREY OWL | 90 257 Сыр с 7 буквками на гриле | как некоторые бутерброды с сыром 7 букв | +++ | | | на гриле | ___ сыр с 7 буквами | Ухмыльзает | Сказал «Сыр!» С 7 буквами | +++ | +++ | | сказал «Сыр» с 7 буквами | Gruyere | Швейцарский сыр с 7 буквами | +++ | | Gruyere | Сыр фондю с 7 буквами | сыр для французского лукового супа с 7 буквами | Gruyere | французский луковый суп сыр с 7 буквами | Gruyere | HOREY Сыр с 7 буквами | Gruyere | Swiss Surge | | Gruyere | сыр из Швейцарии с 7 буквами | Gruyere | Rue grey развитие желтого сыра с 7 буквами | 902 65 | Gruyere | Тип сыра с 7 буквами | Сыр швейцарского происхождения с 7 буквами | | жесткий швейцарский сыр с 7 буквами | Gruyere | Швейцарский сыр с маленькими отверстиями с 7 буквами | Gruyere | | | | Gruyere | сыр с 7 буквами | Gubbeen | Сыр с 7 буквками | Ealkeel | Eaireel | Просмотр в последнем бит сыра для паразита (4-3) с 7 буквами | Hardes | Fast-Food цепь, которая перекладывается на 1 010-калорий Толстый бургер с сыром и беконом за шесть долларов с 7 буквами | HARVEST 9 0260 | Сыр с 7 буквами | | | | +++ | | | Havarti | Semisoft Датский сыр с 7 буквами | Havarti | Бледно-желтый сыр с 7 буквами | Havarti | Semisoft Сыр с 7 буквами | Havarti | бледно-желтый датский сыр с 7 буквами | Havarti | сыр с укропом , Иногда с 7 буквами | Havarti | | Havarti | сыр часто ароматизирован укропом с 7 буквами | Havarti | Danish Creamy Semi- мягкий сыр из коровьего молока 7 букв | Havilah | сыр с 7 буквами | Hayloft | | | | | сыр с 7 буквами | горизонт | сыр с 7 буквы | |
I ‘Rugoso | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
INATRAP | пойманы с сыром с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Информация о сыре поставлена (2, 5) С 7 буквками | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
+++ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
InBrief | , чтобы подвести итоги, где они делают сыр мягкий и штраф (2,5) с 7 буквками | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Jamband Инцидент с нитчатым сыром, e. | ![]() | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Kabritt | | | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
сыр с 7 буквами | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Kasseri | сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Kernhem | Сыр с 7 буквками | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Kingpin | большой сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
La Peral | сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sandaff | сыр с 7 буквами | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Лангрес Сыр с 7 буквами | | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Le Roule | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
сыр с 7 буквами | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Leches | глисты оставили гниловый сыр с 7 букв | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ЛЕВ NORA | Сыр с 7 буквками | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Lindale | | Сыр с 7 буквами | Lunetta | Сыр с 7 буквами | Maasdam | Сыр с 7 буквами | Madeira Madeira | Вино и сыр расстроен автор Левин (7) с 7 буквами | +++ | | Madeira | Половина спелого сыра, которые будут отправлены с 7 буквами | Madeira | Вино и сыр: подняты с маленьким Гершвином с 7 буквами | Madrona | сыр с 7 буквами | MALVERN | Сыр с 7 буквами | MANOURI | сыр с 7 буквами | | | | сыр с 7 буквами | Melange | сыр с 7 буквами | МИНОРКА | Европейский остров, где производят сыр Махєн с 7 буквами | МУНГЛО | Сыр с 7 буквами | |
Продукты | Бесплатный полнотекстовый | Влияние различных факторов на качество и профиль летучих органических соединений в сыре «Брынза»
1.





Целью данного исследования было получение микробиологических параметров и параллельной информации об основных ЛОС в сыре «брынза», производимом 8 словацкими производителями, с использованием электронного носа и ГХ-МС. Другая цель состояла в том, чтобы доказать существенное влияние молочных заводов и типа молока на содержание летучих органических соединений в сыре «брынза».
4. Обсуждение
На качество сыра «брынза» влияет множество факторов, таких как состав использованного овечьего и коровьего молока, сезонность овечьего молока или микробиота использованной закваски [31,32,33] .Сыр «брындза» должен иметь содержание сухих веществ не менее 44 мас.% и жира в сухом веществе сыра «брындза» овечьего происхождения должно быть не менее 48 мас.%, а в смешанных сырах «брынза» не менее 38 мас.% [30]. ].Причина колебаний содержания жира, жира в сухом веществе и содержания сухого вещества в сыре «брынза» с фермерских молочных заводов заключается в том, что содержание жира в молоке не нормируется в традиционном производстве. Известно, что содержание жира и сухого вещества в молоке овец закономерно меняется в течение сезона [34]. Промышленные молокозаводы также используют коровье молоко для производства брынзы, что объясняет более низкое содержание жира в брынзе этих производителей (В3 и В8).






Анализ генома штаммов молочнокислых бактерий, выбранных в качестве потенциальных заквасок для традиционного словацкого сыра брынза | Письма FEMS по микробиологии
Аннотация
Геномы 21 штамма молочнокислых бактерий, выделенных из словацких традиционных сыров, были секвенированы на платформе Illumina MiSeq. Впоследствии они были проанализированы в отношении таксономической классификации, наличия генов, кодирующих защитные системы, устойчивости к антибиотикам и продукции биогенных аминов. Обнаружено, что 13 штаммов несут гены, кодирующие хотя бы один бактериоцин, 18 несут гены, кодирующие хотя бы одну систему рестрикции-модификации, все штаммы несут от 1 до 6 профагов и 9 штаммов имеют системы CRISPR-Cas. Наиболее распространенным был CRISPR-Cas типа II-A, содержащий 0–24 спейсера. Было обнаружено, что только 10% спейсеров гомологичны известным последовательностям бактериофагов или плазмид в базах данных.Два штамма Enterococcus faecium и штамм Lactococcus lactis несли гены устойчивости к антибиотикам. Гены, кодирующие орнитиндекарбоксилазу, были обнаружены в четырех штаммах, а гены, кодирующие агматиндеиминазу, были обнаружены в четырех штаммах. Lactobacillus paraplantarum 251 L оказался наиболее интересным штаммом, так как содержал гены, кодирующие два бактериоцина, систему рестрикции-модификации, две системы CRISPR-Cas, четыре профага и не содержал генов, связанных с устойчивостью к антибиотикам или продукцией биогенных аминов.
ВВЕДЕНИЕ
Словацкая брынза — это традиционный сыр на основе овечьего молока, который широко производится в Словакии и признан в Европейском Союзе защищенным географическим указанием (PGI; Регламент Комиссии, 2008 г.). Сыр можно производить несколькими альтернативными способами, либо из сырого, либо из пастеризованного овечьего молока, без или с добавлением сыра на основе коровьего молока (Šaková et al. 2015; Sádecká et al. 2016).Для сохранения характерных органолептических свойств, в частности запаха, при производстве словацкой брынзы не рекомендуется использовать обычные коммерческие закваски молочнокислых бактерий. Однако производители, придерживающиеся традиционной технологии на основе сырого овечьего молока, нуждаются в соответствующих заквасках для контроля процесса созревания, а промышленные производители, использующие пастеризованное молоко, приветствуют новые закваски для улучшения органолептических свойств словацкой брынзы и аналогичных сыров.
Хорошим источником потенциальных заквасок может быть, в частности, местный сыр из кусков овец, произведенный из сырого молока, брынзы или ферментированной овечьей сыворотки. В предыдущих исследованиях с использованием культуральных и независимых методов в этих матрицах были идентифицированы различные молочнокислые бактерии и доминирование различных видов Lactobacillus , Lactococcus , Streptococcus , Leuconostoc и Enterococcus. Определено рода.В отношении эукариотической микрофлоры установлено доминирование родов Dipodascus (ранее Geotrichum ) и родов Kluyveromyces . Были выделены и частично охарактеризованы в этом отношении сотни штаммов молочнокислых бактерий (Drahovská et al. 2004; Berta et al. 2009; Chebeňová-Turcovská et al. 2011; Kološta 14 et al. и др. 2014 г.; Лейкова и др. 2015 г.; Чаплова и др. 2018 г.).
Геномы потенциальных заквасок могут предоставить информацию о положительных признаках, полезных для их технологического применения, а также о отрицательных признаках, которые лишают их права на применение в производстве продуктов питания. В этом отношении положительные признаки включают наличие генов, кодирующих бактериоцины, или гены, придающие уровень устойчивости к фаговым инфекциям, тогда как отрицательные признаки включают наличие переносимых генов устойчивости к антибиотикам или генов, кодирующих ферменты, ответственные за продукцию биогенных аминов (Dolci и Cocolin). 2017; Морович и др. 2017).
В этом исследовании мы использовали секвенирование нового поколения для анализа геномов отдельных штаммов молочнокислых бактерий из нашей коллекции, уделяя особое внимание предпосылкам применения в качестве заквасок в производстве сыра Брынза. Используемый подход, основанный на полногеномном секвенировании с последующим анализом данных, хорошо зарекомендовал себя и применялся для характеристики и разработки молочных заквасок (Garrigues et al. 2013; Dolci and Cocolin 2017; Felis et al. 2018). Здесь мы охарактеризовали 21 штамм молочнокислых бактерий, которые ранее были выделены из оригинальных словацких молочных продуктов, отобранных как репрезентативные для кластеров изолятов и предварительно идентифицированных на основе ферментации сахаридов, масс-спектрометрии MALDI-TOF или секвенирования 16S рРНК.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Двенадцать бактериальных штаммов, выделенных из продуктов производителей A–D (таблица 1), были получены из коллекции Научно-исследовательского института пищевых продуктов Национального сельскохозяйственного и продовольственного центра, Братислава, Словакия, и были отобраны на основе видовой идентификации с помощью секвенирования 16S рДНК и кластеризации с помощью FTIR-спектроскопии. (данные не показаны).Еще 9 штаммов, выделенных из продуктов производителей E-K, были предоставлены Молочным научно-исследовательским институтом, Жилина, Словакия (доктор М. Томашка). Последняя группа также включала два штамма Lactobacillus , выделенные из продуктов на основе козьего молока, которые ранее были признаны антимикробно активными и не производили биогенных аминов (Klapáčová et al. 2015). Лактобациллы и лейконостоки культивировали на среде де Мана–Рогозы–Шарпа (Merck, Дармштадт, Германия) при 30°С в течение 18–48 ч; лактококки и энтерококки культивировали на среде М17 (Merck) при 37°С в течение 18–48 ч. ДНК экстрагировали из осажденных жидких бактериальных культур методом хаотропной твердофазной экстракции с использованием набора DNeasy Blood and Tissue Kit (Qiagen, Hilden, Germany) в соответствии с протоколом для бактерий G+. Библиотеки для секвенирования следующего поколения были подготовлены путем мечения, опосредованного транспозонами, с использованием набора для подготовки ДНК-библиотек Nextera XT (Illumina, Сан-Диего, Калифорния, США) и секвенированы на платформе Illumina MiSeq. прочтений de novo были собраны в контиги с использованием ассемблера генома SPAdes 3.10.1 (Центр алгоритмической биотехнологии, Санкт-Петербург).Петербург, Россия). Прочтения короче 500 п.н. и прочтения с покрытием менее 20 были удалены, а аннотация генома была выполнена на отфильтрованных сборках с использованием сервера RAST (Азиз и др. 2008 г.). Идентификацию видов проводили с помощью KmerFinder, онлайн-инструмента, расположенного на сервере Центра геномной эпидемиологии (Датский технический университет, Копенгаген, Дания), с использованием стандартного метода подсчета очков (Hasman et al.
2014). Филогенетическое дерево на основе последовательностей, кодирующих белок, было построено Службой построения филогенетического дерева на веб-ресурсе PATRIC (Чикагский университет, Чикаго, Иллинойс, США; Wattam et al. 2014). Программа оценки дерева максимального правдоподобия (RAxML; Exelixis, Гейдельберг, Германия) использовалась для улучшения качества дерева. Наличие систем CRISPR-Cas было предсказано с помощью онлайн-программы поиска CRISPR (Университет Париж-Юг, Париж, Франция; Grissa et al. 2007 г.), а результаты были скорректированы вручную. Наличие генов cas , близких к локусам CRISPR, было идентифицировано с использованием программного обеспечения Geneious (Biomatters, Окленд, Новая Зеландия; Kearse et al. 2012), а тип отдельных локусов CRISPR-Cas был определен на основе типа ген cas .Области профага были обнаружены с помощью веб-сервера PHAge Search Tool Enhanced Release (PHASTER) (Arndt et al. 2016) и подтверждены ручной проверкой результатов.
Потенциальные опероны бактериоцина были предсказаны с использованием веб-сервера BAGEL4 (Университет Гронингена, Гронинген, Нидерланды; van Heel et al. 2018). Наличие генов устойчивости к антибиотикам оценивали с помощью Комплексной базы данных устойчивости к антибиотикам (CARD; Университет Макмастера, Гамильтон, Онтарио, Канада; McArthur et al. 2013 г.) и базу данных ARG-ANNOT (Экс-Марсельский университет, Марсель, Франция; Гупта и др. 2014 г.). Наличие генов, связанных с вирулентностью, проверяли с помощью сервера RAST.
Штамм . | Классификация . | Происхождение . | Производитель . + | |
---|---|---|---|---|
2F1 | девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят один Lactobacillus BREVIS | непастеризованных овцематки сыр | ||
IVB8 | девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят один Lactobacillus BREVIS + б | непастеризованных овцематки сыра | A | |
TiS2 | 91 981 Lactobacillus fermentum | непастеризованных овцематки сыр | В | |
TIS4 | 91 981 Lactobacillus fermentum | непастеризованных овцематки сыр | В | |
IIA2 | 91 981 Lactobacillus paracasei девяносто один тысяча девятьсот восемьдесят-дв | сыр|||
VIIB10 Lactobacillus paracasei | непастеризованных овцематки | непастеризованных овцематок сыра | ||
XIIB2 Lactobacillus paracasei | Брынзы пта ом пастеризованное молоко | D | ||
21L10 | Lactobacillus paracasei | непастеризованного козьего сыра | Е | |
251L | Lactobacillus paraplantarum | ферментированного сырьевых козьего молока | F | |
IIB8 | Lactobacillus plantarum subsp.![]() | Непастеризованный овечий сыр | A | |
IIB10 | Lactobacillus plantarum subsp. plantarum | Непастеризованный овечий сыр | A | |
TIS6 | Lactobacillus plantarum subsp. plantarum | Непастеризованный овечий сыр | B | |
VIB7 | Lactobacillus plantarum subsp. plantarum | Непастеризованный овечий сыр | G | |
17L1 | Lactobacillus plantarum subsp. argentoratensis | Непастеризованный овечий сыр | H | |
33S7 | Lactococcus lactis subsp. cremoris | Овечий сыр непастеризованный | I | |
5LE6 | Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides | Овечий сыр непастеризованный | J | |
1LE7 | Leuconostoc mesenteroides subsp.![]() | Ферментированная овечья сыворотка | K | |
2LE4 | Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris | ферментированного овцематок сывороточного | л | |
5LE5 | девяносто один тысяча девятьсот восемьдесят одна Leuconostoc pseudomesenteroides | непастеризованных овцематки сыра | J | |
33S3 | девяносто один тысяча девятьсот восемьдесят одна Enterococcus faecium + с | непастеризованных овцематками Сыр | I | |
IIA4 | 7 Enterococcus Faecium D Rapasteurised Сыр EWES | A | |
штамм . | Классификация . | Происхождение . | Производитель . + | |
---|---|---|---|---|
2F1 | девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят один Lactobacillus BREVIS | непастеризованных овцематки сыр | ||
IVB8 | девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят один Lactobacillus BREVIS + б | непастеризованных овцематки сыра | A | |
TiS2 | 91 981 Lactobacillus fermentum | непастеризованных овцематки сыр | В | |
TIS4 | 91 981 Lactobacillus fermentum | непастеризованных овцематки сыр | В | |
IIA2 | 91 981 Lactobacillus paracasei девяносто один тысяча девятьсот восемьдесят-дв | сыр|||
VIIB10 Lactobacillus paracasei | непастеризованных овцематки | непастеризованных овцематок сыра | ||
XIIB2 Lactobacillus paracasei | Брынзы пта ом пастеризованное молоко | D | ||
21L10 | Lactobacillus paracasei | непастеризованного козьего сыра | Е | |
251L | Lactobacillus paraplantarum | ферментированного сырьевых козьего молока | F | |
IIB8 | Lactobacillus plantarum subsp.![]() | Непастеризованный овечий сыр | A | |
IIB10 | Lactobacillus plantarum subsp. plantarum | Непастеризованный овечий сыр | A | |
TIS6 | Lactobacillus plantarum subsp. plantarum | Непастеризованный овечий сыр | B | |
VIB7 | Lactobacillus plantarum subsp. plantarum | Непастеризованный овечий сыр | G | |
17L1 | Lactobacillus plantarum subsp. argentoratensis | Непастеризованный овечий сыр | H | |
33S7 | Lactococcus lactis subsp. cremoris | Овечий сыр непастеризованный | I | |
5LE6 | Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides | Овечий сыр непастеризованный | J | |
1LE7 | Leuconostoc mesenteroides subsp.![]() | Ферментированная овечья сыворотка | K | |
2LE4 | Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris | ферментированного овцематок сывороточного | л | |
5LE5 | девяносто один тысяча девятьсот восемьдесят одна Leuconostoc pseudomesenteroides | непастеризованных овцематки сыра | J | |
33S3 | девяносто один тысяча девятьсот восемьдесят одна Enterococcus faecium + с | непастеризованных овцематками Сыр | I | |
IIA4 | 7 Enterococcus Faecium D Rapasteurised Сыр EWES | A | |
штамм . | Классификация . | Происхождение . | Производитель . + | |
---|---|---|---|---|
2F1 | девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят один Lactobacillus BREVIS | непастеризованных овцематки сыр | ||
IVB8 | девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят один Lactobacillus BREVIS + б | непастеризованных овцематки сыра | A | |
TiS2 | 91 981 Lactobacillus fermentum | непастеризованных овцематки сыр | В | |
TIS4 | 91 981 Lactobacillus fermentum | непастеризованных овцематки сыр | В | |
IIA2 | 91 981 Lactobacillus paracasei девяносто один тысяча девятьсот восемьдесят-дв | сыр|||
VIIB10 Lactobacillus paracasei | непастеризованных овцематки | непастеризованных овцематок сыра | ||
XIIB2 Lactobacillus paracasei | Брынзы пта ом пастеризованное молоко | D | ||
21L10 | Lactobacillus paracasei | непастеризованного козьего сыра | Е | |
251L | Lactobacillus paraplantarum | ферментированного сырьевых козьего молока | F | |
IIB8 | Lactobacillus plantarum subsp.![]() | Непастеризованный овечий сыр | A | |
IIB10 | Lactobacillus plantarum subsp. plantarum | Непастеризованный овечий сыр | A | |
TIS6 | Lactobacillus plantarum subsp. plantarum | Непастеризованный овечий сыр | B | |
VIB7 | Lactobacillus plantarum subsp. plantarum | Непастеризованный овечий сыр | G | |
17L1 | Lactobacillus plantarum subsp. argentoratensis | Непастеризованный овечий сыр | H | |
33S7 | Lactococcus lactis subsp. cremoris | Овечий сыр непастеризованный | I | |
5LE6 | Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides | Овечий сыр непастеризованный | J | |
1LE7 | Leuconostoc mesenteroides subsp.![]() | Ферментированная овечья сыворотка | K | |
2LE4 | Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris | ферментированного овцематок сывороточного | л | |
5LE5 | девяносто один тысяча девятьсот восемьдесят одна Leuconostoc pseudomesenteroides | непастеризованных овцематки сыра | J | |
33S3 | девяносто один тысяча девятьсот восемьдесят одна Enterococcus faecium + с | непастеризованных овцематками Сыр | I | |
IIA4 | 7 Enterococcus Faecium D Rapasteurised Сыр EWES | A | |
штамм . | Классификация . | Происхождение . | Производитель . + | |
---|---|---|---|---|
2F1 | девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят один Lactobacillus BREVIS | непастеризованных овцематки сыр | ||
IVB8 | девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят один Lactobacillus BREVIS + б | непастеризованных овцематки сыра | A | |
TiS2 | 91 981 Lactobacillus fermentum | непастеризованных овцематки сыр | В | |
TIS4 | 91 981 Lactobacillus fermentum | непастеризованных овцематки сыр | В | |
IIA2 | 91 981 Lactobacillus paracasei девяносто один тысяча девятьсот восемьдесят-дв | сыр|||
VIIB10 Lactobacillus paracasei | непастеризованных овцематки | непастеризованных овцематок сыра | ||
XIIB2 Lactobacillus paracasei | Брынзы пта ом пастеризованное молоко | D | ||
21L10 | Lactobacillus paracasei | непастеризованного козьего сыра | Е | |
251L | Lactobacillus paraplantarum | ферментированного сырьевых козьего молока | F | |
IIB8 | Lactobacillus plantarum subsp. | Непастеризованный овечий сыр | A | |
IIB10 | Lactobacillus plantarum subsp. plantarum | Непастеризованный овечий сыр | A | |
TIS6 | Lactobacillus plantarum subsp. plantarum | Непастеризованный овечий сыр | B | |
VIB7 | Lactobacillus plantarum subsp. plantarum | Непастеризованный овечий сыр | G | |
17L1 | Lactobacillus plantarum subsp. argentoratensis | Непастеризованный овечий сыр | H | |
33S7 | Lactococcus lactis subsp. cremoris | Овечий сыр непастеризованный | I | |
5LE6 | Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides | Овечий сыр непастеризованный | J | |
1LE7 | Leuconostoc mesenteroides subsp.![]() | Ферментированная овечья сыворотка | K | |
2LE4 | Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris | ферментированного овцематок сывороточного | л | |
5LE5 | девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят один Leuconostoc pseudomesenteroides | непастеризованных овцематки сыра | J | |
33S3 | девяносто одна тысячи девятьсот восемьдесят один Enterococcus faecium + с | непастеризованных овцематками ‘сыр | я | IIA4 | девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят одна Enterococcus faecium девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два г | непастеризованных овцематки’ сыром | девяносто две тысячи триста шестьдесят два |
в геноме последовательность сообщалась здесь, был депонированы в NCBI под BioProject PRJNA474823 (номер образца о присоединении SAMN0

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Группа из 21 штамма молочнокислых бактерий, первоначально выделенных из непастеризованного овечьего сыра или аналогичных молочных продуктов, была изучена с помощью секвенирования всего генома, что обеспечило точную таксономическую классификацию и характеристику геномов в отношении их основного потенциала для применения в качестве закваски в сыре. производство. В некоторых случаях исходная классификация по видам, основанная на профилях ферментации сахаридов, масс-спектрометрии MALDI-TOF или секвенировании 16S рРНК, была скорректирована (в случае двух штаммов Lactobacillus brevis и двух штаммов Enterococcus faecium ).Штаммы Lactobacillus plantarum , Lactococcus lactis и Leuconostoc mesenteroides могут быть определены до подвидового уровня (таблица 1). Первичная идентификация была сделана с помощью KmerFinder, который отнес штаммы к восьми видам, большинство из них с высокой степенью достоверности (покрытие шаблона> 70%; данные не показаны). На основании полученных результатов было отобрано от одного до пяти эталонных геномов каждого вида для сравнения кодирующих белок последовательностей с использованием сервера PATRIC и построено филогенетическое дерево.Результаты подтвердили классификацию штаммов по видам и продемонстрировали различное родство между штаммами внутри отдельных видов (рис. 1).
Рисунок 1.
Филогенетическое сравнение штаммов с эталонными геномами. Штаммы, секвенированные в этом исследовании, подчеркнуты. Значения в точках ветвления дерева представляют расхождение последовательности.
Рисунок 1.
Филогенетическое сравнение штаммов с эталонными геномами. Штаммы, секвенированные в этом исследовании, подчеркнуты.Значения в точках ветвления дерева представляют расхождение последовательности.
Два фунта. brevis (выделенные из продуктов одного производителя) были близкородственными друг другу и слабородственными эталонному штамму Lb. brevis ATCC 14869 (выделено из фекалий). Четыре фунт. plantarum были близкородственными друг другу и близкородственными эталонному штамму Lb. plantarum молочного происхождения. Самый расходящийся Lb.plantarum представлял собой штамм VIB7, который, как было установлено, тесно связан с штаммом Lb. plantarum подвид. argentoratensis DSM 16365 (первоначально выделенный из ферментированных корней маниоки). Два фунта. fermentum (выделенные из продуктов одного производителя) были близкородственными друг другу и слабородственными эталонному штамму Lb. fermentum IFO 3956 (выделенный из ферментированной растительной матрицы). Четыре штамма, выделенные из продукции различных производителей, были классифицированы как Lb.параказеи . Подвидовая дифференциация этой группы была не очень четкой. Только один штамм ( Lb. paracasei VIIB10) сгруппирован с эталонным штаммом ( Lb. paracasei subsp. paracasei DSM 5622, происхождение неизвестно), а два штамма ( Lb.
paracasei IIA2 и Lb. paracasei ) XIIB2) сформировали свою ветвь между Lb. корпуса и фунтов. paracasei эталонные штаммы. Lactobacillus paracasei 21L10 сгруппированы отдельно за пределами Lb.casei / фунт. филиал paracasei . Кластеризация Lb. casei / фунт. paracasei была весьма неоднозначной, о чем свидетельствуют низкие значения начальной загрузки ветвей. Штамм Lactococcus lactis 33S7 оказался родственным штамму Lc. lactis подвид. lactis LMG 7760, изолят из бобовой пасты. Три штамма были идентифицированы как Leuconostoc mesenteroides и один как Le. псевдомезентероиды. Два штамма ( Le.mesenteroides 1LE7 и Le. mesenteroides 2LE4), выделенные из ферментированной сыворотки, были близкородственными друг другу и эталонному штамму Le. mesenteroides подвид. cremoris ATCC 19254 (коммерческая закваска). Leuconostoc mesenteroides 5LE6 был близкородственным эталонному штамму Le.
mesenteroides подвид. mesenteroides ATCC 8293 (выделен из ферментированных оливок). Leuconostoc pseudomesenteroides 5LE5 был тесно связан с Le.pseudomesenteroides , штамм 4882, изолят из молочной закваски (Meslier et al. 2012). Два штамма Enterococcus были идентифицированы как E. faecium. Enterococcus faecium 33S3 был связан с эталонным штаммом E. faecium 17OM39, изолятом из кала, а E. faecium IIA4 образовали один кластер с несколькими эталонными штаммами, выделенными из клинического материала, а также из молочных продуктов.
Дальнейшая интересная информация может быть получена из полногеномных последовательностей относительно определенных положительных признаков, потенциально полезных для штаммов при технологическом применении, или, наоборот, отрицательных признаков, которые исключают их применение в производстве продуктов питания.В качестве полезного признака было изучено наличие генов, кодирующих бактериоцины. Бактериоцины представляют собой антимикробные пептиды, продуцируемые рибосомами, которые могут подавлять определенные конкурирующие микроорганизмы, включая патогены (van Heel et al. 2018). Потенциальные опероны бактериоцина были обнаружены в 14 из 21 штамма, и в некоторых из них было обнаружено присутствие более одного бактериоцина (таблица 2). Наши результаты были разделены на три группы: группу с полным совпадением (>95% сходства) с определенным бактериоцином в базе данных BAGEL4, группу с 70–95% сходством и группу предполагаемых бактериоцинов с более низким (<70 %) сходства.В первой группе мы идентифицировали девять подтвержденных генов бактериоцинов, все они относятся к классу II — EF плантарицина в Lb. paraplantarum 251 л и фунт. plantarum 17L1, плантарицин JK в Lb. paraplantarum 251 л и фунт. plantarum 17L1, LSEI_2163 в фунтах. paracasei XIIB2, LSEI_2386 в фунтах. paracasei XIIB2 и Lb. paracasei IIA2, мезентерицин Y105 в Le.
mesenteroides 2LE4 и энтероцин А в E.faecium 33S3 и E. faecium IIA4. Вторая группа с >70% сходством с последовательностями в базе данных BAGEL включала гарвицин Q, обнаруженный в Lc. lactis 33S7 и энтероцин P обнаружены в E. faecium 33S3 и E. faecium IIA4. В третью группу вошли шесть предполагаемых генов бактериоцинов, а именно карноцин СР52 (класс II) в Lb. casei 21L10, Х-цепь β энтероцина (класс II) в Lb. casei 21L10, фунт. paracasei IIA2, фунт.paracasei VIIB10, фунт. paracasei XIIB2, фунт. plantarum TIS6 и Le. mesenteroides 5LE6, термофилин А (класс II) в Lb. casei 21L10, энтеролизин А (класс III) в Lb. fermentum TIS4, фунт. paracasei VIIB10, E. faecium 33S3 и E. faecium IIA4, лактококцин A (класс II) в Lc. lactis 33S7 и лактацин F (класс II) в E. faecium 33S3 и E. faecium IIA4.
Последние гены были обнаружены рядом с консервативными генами, связанными с продукцией бактериоцина (гены иммунитета, транспорта, процессинга и регуляции), но из-за их <70% аминокислотного сходства с базой данных BAGEL4 их аннотация ненадежна. В целом наши результаты показали наличие генов, кодирующих различные бактериоцины, в геномах исследованных штаммов. Такое свойство может быть полезным, поскольку некоторые из этих бактериоцинов перспективны для биоконсервации пищевых продуктов против патогенных микроорганизмов (Favaro et al. 2015; Дольчи и Коколин, 2017).
генов, кодирующих бактериоцины, системы рестрикции-модификации и CRISPR-Cas.
Штамм . | Гены бактериоцинов (аминокислотное сходство) . | Количество RMS (количество генов) a . | Тип CRISPR-Cas . | |
---|---|---|---|---|
Lactobacillus BREVIS 2F1 | Отсутствует | Отсутствует | И.![]() | |
Lactobacillus не BREVIS IVB8 | None | Отсутствует | Отсутствует | |
Lactobacillus fermentum TiS2 | None | 4 (7) | II-A | II-A |
Lactobacillus Fermentum TIS4 | Enterolysin A (<70%) | 3 (4) | II-A | |
Lactobacillus Paracasei 21L10 | Карноцин CP52 (<70%), энтероцин Xβ (<70%), термофилин А (<70%) | 1 (2) | II-A | |
Lactobacillus paracasei IIA2 | 8 LS | 0 %), энтероцин Xβ (<70%) | 2 (4) | II-A |
Lactobacillus paracasei VIIB10 | Энтероцин Xβ (<70%), введите олизин А (<70%) | 3 (9) | II-A | |
Lactobacillus paracasei XIIB2 | LSEI_2163 (>95%), энтерокин_938% | 1 (2) | II | II |
Lactobacillus ParaPlantarum 251L | Plantaricin EF (> 95%), Plantaricin JK (> 95%) | 1 (1) | II-A, IE | |
лактобактерии плантарум + IIB8 | Отсутствует | 1 (2) | Отсутствует | |
лактобактерии плантарум + IIB10 | Отсутствует | 1 (1) | Отсутствует | |
лактобактерии плантарум + TIS6 | Enterocin Xβ (<70%) | 3 (5) | 3 (5) | None |
Lactobacillus Plantarum Vib7 | None | 3 (3) | None | |
Lactobacillus Plantar UM 17L1 | Plantaricin EF (> 95%), Plantaricin JK (> 95%) | 1 (1) | 1 (1) | None |
Garvicin Q (> 70%), Лактококцин A (<70%) | 1 (4) | None | ||
Leuconostoc MESenteroides 5LE6 | Enterocion Xβ (<70%) | NORE | NOTE | |
None | 6 (12) | Отсутствует | ||
Leuconostoc mesenteroides 2LE4 | Mesentericin Y105 (> 95%) | 6 (10) | None | |
девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят-одна Leuconostoc pseudomesenteroides 5LE5 | Отсутствует | 1 (1) | II-A | |
Enterococcus faecium 33S3 | Энтероцин А (>95%), энтероцин Р (>70%), энтеролизин А (<70%), лактацин F (<70% ) | 2 (2) | Нет | |
Enterococcus faecium IIA4 | Энтероцин А (>95%), энтероцин Р (>70%), энтеролизин А (<70%), лактацин F (<70%).![]() | 3 (5) | Нет |
Штамм . | Гены бактериоцинов (аминокислотное сходство) . | Количество RMS (количество генов) a . | Тип CRISPR-Cas . | |
---|---|---|---|---|
Lactobacillus BREVIS 2F1 | Отсутствует | Отсутствует | И.Е. | |
Lactobacillus не BREVIS IVB8 | None | Отсутствует | Отсутствует | |
Lactobacillus fermentum TiS2 | None | 4 (7) | II-A | II-A |
Lactobacillus Fermentum TIS4 | Enterolysin A (<70%) | 3 (4) | II-A | |
Lactobacillus Paracasei 21L10 | Карноцин CP52 (<70%), энтероцин Xβ (<70%), термофилин А (<70%) | 1 (2) | II-A | |
Lactobacillus paracasei IIA2 | 8 LS | 0 %), энтероцин Xβ (<70%) | 2 (4) | II-A |
Lactobacillus paracasei VIIB10 | Энтероцин Xβ (<70%), введите олизин А (<70%) | 3 (9) | II-A | |
Lactobacillus paracasei XIIB2 | LSEI_2163 (>95%), энтерокин_938% | 1 (2) | II | II |
Lactobacillus ParaPlantarum 251L | Plantaricin EF (> 95%), Plantaricin JK (> 95%) | 1 (1) | II-A, IE | |
лактобактерии плантарум + IIB8 | Отсутствует | 1 (2) | Отсутствует | |
лактобактерии плантарум + IIB10 | Отсутствует | 1 (1) | Отсутствует | |
лактобактерии плантарум + TIS6 | Enterocin Xβ (<70%) | 3 (5) | 3 (5) | None |
Lactobacillus Plantarum Vib7 | None | 3 (3) | None | |
Lactobacillus Plantar UM 17L1 | Plantaricin EF (> 95%), Plantaricin JK (> 95%) | 1 (1) | 1 (1) | None |
Garvicin Q (> 70%), Лактококцин A (<70%) | 1 (4) | None | ||
Leuconostoc MESenteroides 5LE6 | Enterocion Xβ (<70%) | NORE | NOTE | |
None | 6 (12) | Отсутствует | ||
Leuconostoc mesenteroides 2LE4 | Mesentericin Y105 (> 95%) | 6 (10) | None | |
девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят-одна Leuconostoc pseudomesenteroides 5LE5 | Отсутствует | 1 (1) | II-A | |
Enterococcus faecium 33S3 | Энтероцин А (>95%), энтероцин Р (>70%), энтеролизин А (<70%), лактацин F (<70% ) | 2 (2) | Нет | |
Enterococcus faecium IIA4 | Энтероцин А (>95%), энтероцин Р (>70%), энтеролизин А (<70%), лактацин F (<70%).![]() | 3 (5) | Нет |
Гены, кодирующие бактериоцины, системы рестрикции-модификации и CRISPR-Cas.
Штамм . | Гены бактериоцинов (аминокислотное сходство) . | Количество RMS (количество генов) a . | Тип CRISPR-Cas . | |
---|---|---|---|---|
Lactobacillus BREVIS 2F1 | Отсутствует | Отсутствует | И.Е. | |
Lactobacillus не BREVIS IVB8 | None | Отсутствует | Отсутствует | |
Lactobacillus fermentum TiS2 | None | 4 (7) | II-A | II-A |
Lactobacillus Fermentum TIS4 | Enterolysin A (<70%) | 3 (4) | II-A | |
Lactobacillus Paracasei 21L10 | Карноцин CP52 (<70%), энтероцин Xβ (<70%), термофилин А (<70%) | 1 (2) | II-A | |
Lactobacillus paracasei IIA2 | 8 LS | 0 %), энтероцин Xβ (<70%) | 2 (4) | II-A |
Lactobacillus paracasei VIIB10 | Энтероцин Xβ (<70%), введите олизин А (<70%) | 3 (9) | II-A | |
Lactobacillus paracasei XIIB2 | LSEI_2163 (>95%), энтерокин_938% | 1 (2) | II | II |
Lactobacillus ParaPlantarum 251L | Plantaricin EF (> 95%), Plantaricin JK (> 95%) | 1 (1) | II-A, IE | |
лактобактерии плантарум + IIB8 | Отсутствует | 1 (2) | Отсутствует | |
лактобактерии плантарум + IIB10 | Отсутствует | 1 (1) | Отсутствует | |
лактобактерии плантарум + TIS6 | Enterocin Xβ (<70%) | 3 (5) | 3 (5) | None |
Lactobacillus Plantarum Vib7 | None | 3 (3) | None | |
Lactobacillus Plantar UM 17L1 | Plantaricin EF (> 95%), Plantaricin JK (> 95%) | 1 (1) | 1 (1) | None |
Garvicin Q (> 70%), Лактококцин A (<70%) | 1 (4) | None | ||
Leuconostoc MESenteroides 5LE6 | Enterocion Xβ (<70%) | NORE | NOTE | |
None | 6 (12) | Отсутствует | ||
Leuconostoc mesenteroides 2LE4 | Mesentericin Y105 (> 95%) | 6 (10) | None | |
девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят-одна Leuconostoc pseudomesenteroides 5LE5 | Отсутствует | 1 (1) | II-A | |
Enterococcus faecium 33S3 | Энтероцин А (>95%), энтероцин Р (>70%), энтеролизин А (<70%), лактацин F (<70% ) | 2 (2) | Нет | |
Enterococcus faecium IIA4 | Энтероцин А (>95%), энтероцин Р (>70%), энтеролизин А (<70%), лактацин F (<70%). | 3 (5) | Нет |
Штамм . | Гены бактериоцинов (аминокислотное сходство) . | Количество RMS (количество генов) a . | Тип CRISPR-Cas . | |
---|---|---|---|---|
Lactobacillus BREVIS 2F1 | Отсутствует | Отсутствует | И.Е. | |
Lactobacillus не BREVIS IVB8 | None | Отсутствует | Отсутствует | |
Lactobacillus fermentum TiS2 | None | 4 (7) | II-A | II-A |
Lactobacillus Fermentum TIS4 | Enterolysin A (<70%) | 3 (4) | II-A | |
Lactobacillus Paracasei 21L10 | Карноцин CP52 (<70%), энтероцин Xβ (<70%), термофилин А (<70%) | 1 (2) | II-A | |
Lactobacillus paracasei IIA2 | 8 LS | 0 %), энтероцин Xβ (<70%) | 2 (4) | II-A |
Lactobacillus paracasei VIIB10 | Энтероцин Xβ (<70%), введите олизин А (<70%) | 3 (9) | II-A | |
Lactobacillus paracasei XIIB2 | LSEI_2163 (>95%), энтерокин_938% | 1 (2) | II | II |
Lactobacillus ParaPlantarum 251L | Plantaricin EF (> 95%), Plantaricin JK (> 95%) | 1 (1) | II-A, IE | |
лактобактерии плантарум + IIB8 | Отсутствует | 1 (2) | Отсутствует | |
лактобактерии плантарум + IIB10 | Отсутствует | 1 (1) | Отсутствует | |
лактобактерии плантарум + TIS6 | Enterocin Xβ (<70%) | 3 (5) | 3 (5) | None |
Lactobacillus Plantarum Vib7 | None | 3 (3) | None | |
Lactobacillus Plantar UM 17L1 | Plantaricin EF (> 95%), Plantaricin JK (> 95%) | 1 (1) | 1 (1) | None |
Garvicin Q (> 70%), Лактококцин A (<70%) | 1 (4) | None | ||
Leuconostoc MESenteroides 5LE6 | Enterocion Xβ (<70%) | NORE | NOTE | |
None | 6 (12) | Отсутствует | ||
Leuconostoc mesenteroides 2LE4 | Mesentericin Y105 (> 95%) | 6 (10) | None | |
девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят-одна Leuconostoc pseudomesenteroides 5LE5 | Отсутствует | 1 (1) | II-A | |
Enterococcus faecium 33S3 | Энтероцин А (>95%), энтероцин Р (>70%), энтеролизин А (<70%), лактацин F (<70% ) | 2 (2) | Нет | |
Enterococcus faecium IIA4 | Энтероцин А (>95%), энтероцин Р (>70%), энтеролизин А (<70%), лактацин F (<70%).![]() | 3 (5) | Нет |
Положительным признаком, придающим молочнокислым бактериям уровень устойчивости к фаговым инфекциям, является наличие систем рестрикции-модификации (Forde and Fitzgerald 1999).Используя сервер PATRIC, мы обнаружили от 0 до 6 кластеров генов рестрикции-модификации в отдельных штаммах, каждый из которых содержит от одного до пяти генов, кодирующих эндонуклеазы, метилазы или субъединицы специфичности (таблица 2). Наши результаты о распространенности этих систем согласуются с ранее опубликованными данными (Coffey and Ross 2002; Suárez et al. 2009).
В качестве важного механизма защиты от фагов мы проанализировали геномы наших штаммов на наличие систем CRISPR-Cas.Эти системы обеспечивают адаптивный иммунитет против чужеродной ДНК и считаются совместимыми с системами рестрикции-модификации. Локусы CRISPR состоят из коротких последовательностей спейсеров, хранящихся между повторяющимися элементами. Транскрибированные CRISPR превращаются в зрелые малые РНК, которые направляют эффекторные белки Cas к зависимому от последовательности расщеплению чужеродной ДНК, комплементарной спейсерам (Dupuis et al. 2013). На основании наличия универсального гена cas 1 мы обнаружили системы CRISPR-Cas у девяти штаммов, принадлежащих к виду Lb.Бревис , фунт. ферментум , фунт. paracasei , фунт. paraplantarum и Le. pseudomesenteroides (табл. 2). Сигнатура систем типа II, ген cas9 , была обнаружена в восьми геномах, тогда как cas3 , основной компонент систем типа I, был обнаружен в двух штаммах. Один штамм, фунт. paraplantarum 251 L, обладали одновременно системами I-E и IIA. Наблюдаемая высокая распространенность систем типа II согласуется с предыдущим исследованием комплекса рода Lactobacillus (Sun et al. 2015). Наблюдалась большая вариабельность числа спейсеров (1–24), и в трех Lb. paracasei (табл. 3). Было обнаружено, что Lactobacillus brevis 2F1 содержит систему типа I-E с соседним локусом CRISPR и, кроме того, два других CRISPR в разных положениях на хромосоме.
Незавершенные элементы могут представлять собой нефункциональные остатки систем CRISPR-Cas, повторяющиеся последовательности бактериальной ДНК другого типа или могут быть артефактами незавершенного секвенирования генома (Zhang and Ye 2017).57 спейсеров из всех штаммов были найдены с помощью BLAST в базах данных фагов и плазмид, и только несколько потенциальных протоспейсеров соответствовали опубликованным последовательностям (5% фаговых и 5% плазмидных последовательностей), все совпадения касались только двух штаммов ( Lb. brevis 2F1 и ). Lb. paraplantarum 251 л). Эти результаты могут отражать региональное происхождение штаммов (Hynes et al. , 2017 г.).
Данные об обнаруженных системах CRISPR-Cas.
Штамм . | Тип . | Повторить последовательность . | Кол-во распорок . | Cas1/2/3/9 . | Другие ассоциированные гены
.![]() | |
---|---|---|---|---|---|---|
Lactobacillus BREVIS девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 2F1 | И.Е. | GGATCACCCCCACACACGTGGGGAATAC | 20 | + / + / + / — | CSE девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 1, CSE девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 2, CSE девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 3, CSE 4, 91 981 КАС 5e | |
откл | GTATTCCCCACATGTGTGGGGGTGATCCC | 7 б | — / — / — / — | ни | ||
ни | GTATTCCCCACACATGTGGGGGTGATCCT | 10 C | — / — / — / — | None | ||
Lactobacillus fermentum TIS2 | II-A | ATAATTCTAACTACTACTCTGATCTGACTCATCCACACTACTACTACTCTGATCACTCATCATCACTACTACTACTACTACTACTGATCACTCACTCATCCACTCA | 2 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus fermentum TIS4 | II-A | TCGGAACTACTGATCTGACACTCATCCAAGAC | 1 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus paracasei 21L10 | II-A | GTCTCAGGTAGATGTCGAATCAATCAGTTCAAGAGC | 24 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus paracasei IIA2 | IIA2II-A | не найден | 0 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus Paracasei Viib10 | II-A | не найден | 0 | + / + / — / + | 2||
Lactobacillus Paracasei Xiib2 | II | не найден | 0 | + / + / — / + | NOTE | |
Lactobacillus ParaPlantarum 251L | II-A | GGTCTTGATTTTTTTATTGATTTTGATGTCCTTTTATTAGT | 90 257 + / + / — / +1, 2 | 1, 2 | 2 | |
IE | CTATTCCCCGTGTATACGGGGGGTGATCC | 7 E | + / + / + / — | CSE 1 , CSE 2, 91 981 CSE 3, 91 981 КАС 5e | ||
91 981 Leuconostoc pseudomesenteroides 5LE5 | II-A | AGTATAAAGCCCCATTGATCTGACATACATCTGAAGCAG | 0 | + / + / + / — | 91 981 CSN 2 |
Штамм
.![]() | Тип . | Повторить последовательность . | Кол-во распорок . | Cas1/2/3/9 . | Другие ассоциированные гены . | |
---|---|---|---|---|---|---|
Lactobacillus BREVIS девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 2F1 | И.Е. | GGATCACCCCCACACACGTGGGGAATAC | 20 | + / + / + / — | CSE девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 1, CSE девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 2, CSE девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 3, CSE 4, 91 981 КАС 5e | |
откл | GTATTCCCCACATGTGTGGGGGTGATCCC | 7 б | — / — / — / — | ни | ||
ни | GTATTCCCCACACATGTGGGGGTGATCCT | 10 C | — / — / — / — | None | ||
Lactobacillus fermentum TIS2 | II-A | ATAATTCTAACTACTACTCTGATCTGACTCATCCACACTACTACTACTCTGATCACTCATCATCACTACTACTACTACTACTACTGATCACTCACTCATCCACTCA | 2 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus fermentum TIS4 | II-A | TCGGAACTACTGATCTGACACTCATCCAAGAC | 1 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus paracasei 21L10 | II-A | GTCTCAGGTAGATGTCGAATCAATCAGTTCAAGAGC | 24 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus paracasei IIA2 | IIA2II-A | не найден | 0 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus Paracasei Viib10 | II-A | не найден | 0 | + / + / — / + | 2||
Lactobacillus Paracasei Xiib2 | II | не найден | 0 | + / + / — / + | NOTE | |
Lactobacillus ParaPlantarum 251L | II-A | GGTCTTGATTTTTTTATTGATTTTGATGTCCTTTTATTAGT | 90 257 + / + / — / +1, 2 | 1, 2 | 2 | |
IE | CTATTCCCCGTGTATACGGGGGGTGATCC | 7 E | + / + / + / — | CSE 1 , CSE 2, CSE 3, КАС 5e | ||
Leuconostoc pseudomesenteroides 5LE5 | II-A | AGTATAAAGCCCCATTGATCTGACATACATCTGAAGCAG | 0 | + / + / + / — | CSN 91 982 2 |

Данные об обнаруженных системах CRISPR-Cas.
Штамм . | Тип . | Повторить последовательность . | Кол-во распорок . | Cas1/2/3/9 . | Другие ассоциированные гены . | |
---|---|---|---|---|---|---|
Lactobacillus BREVIS девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 2F1 | И.Е. | GGATCACCCCCACACACGTGGGGAATAC | 20 | + / + / + / — | CSE девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 1, CSE девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 2, CSE девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 3, CSE 4, 91 981 КАС 5e | |
откл | GTATTCCCCACATGTGTGGGGGTGATCCC | 7 б | — / — / — / — | ни | ||
ни | GTATTCCCCACACATGTGGGGGTGATCCT | 10 C | — / — / — / — | None | ||
Lactobacillus fermentum TIS2 | II-A | ATAATTCTAACTACTACTCTGATCTGACTCATCCACACTACTACTACTCTGATCACTCATCATCACTACTACTACTACTACTACTGATCACTCACTCATCCACTCA | 2 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus fermentum TIS4 | II-A | TCGGAACTACTGATCTGACACTCATCCAAGAC | 1 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus paracasei 21L10 | II-A | GTCTCAGGTAGATGTCGAATCAATCAGTTCAAGAGC | 24 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus paracasei IIA2 | IIA2II-A | не найден | 0 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus Paracasei Viib10 | II-A | не найден | 0 | + / + / — / + | 2||
Lactobacillus Paracasei Xiib2 | II | не найден | 0 | + / + / — / + | NOTE | |
Lactobacillus ParaPlantarum 251L | II-A | GGTCTTGATTTTTTTATTGATTTTGATGTCCTTTTATTAGT | 90 257 + / + / — / +1, 2 | 1, 2 | 2 | |
IE | CTATTCCCCGTGTATACGGGGGGTGATCC | 7 E | + / + / + / — | CSE 1 , CSE 2, 91 981 CSE 3, 91 981 КАС 5e | ||
91 981 Leuconostoc pseudomesenteroides 5LE5 | II-A | AGTATAAAGCCCCATTGATCTGACATACATCTGAAGCAG | 0 | + / + / + / — | 91 981 CSN 2 |
Штамм
.![]() | Тип . | Повторить последовательность . | Кол-во распорок . | Cas1/2/3/9 . | Другие ассоциированные гены . | |
---|---|---|---|---|---|---|
Lactobacillus BREVIS девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 2F1 | И.Е. | GGATCACCCCCACACACGTGGGGAATAC | 20 | + / + / + / — | CSE девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 1, CSE девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 2, CSE девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 3, CSE 4, 91 981 КАС 5e | |
откл | GTATTCCCCACATGTGTGGGGGTGATCCC | 7 б | — / — / — / — | ни | ||
ни | GTATTCCCCACACATGTGGGGGTGATCCT | 10 C | — / — / — / — | None | ||
Lactobacillus fermentum TIS2 | II-A | ATAATTCTAACTACTACTCTGATCTGACTCATCCACACTACTACTACTCTGATCACTCATCATCACTACTACTACTACTACTACTGATCACTCACTCATCCACTCA | 2 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus fermentum TIS4 | II-A | TCGGAACTACTGATCTGACACTCATCCAAGAC | 1 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus paracasei 21L10 | II-A | GTCTCAGGTAGATGTCGAATCAATCAGTTCAAGAGC | 24 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus paracasei IIA2 | IIA2II-A | не найден | 0 | + / + / — / + | CSN 2 | |
Lactobacillus Paracasei Viib10 | II-A | не найден | 0 | + / + / — / + | 2||
Lactobacillus Paracasei Xiib2 | II | не найден | 0 | + / + / — / + | NOTE | |
Lactobacillus ParaPlantarum 251L | II-A | GGTCTTGATTTTTTTATTGATTTTGATGTCCTTTTATTAGT | 90 257 + / + / — / +1, 2 | 1, 2 | 2 | |
IE | CTATTCCCCGTGTATACGGGGGGTGATCC | 7 E | + / + / + / — | CSE 1 , CSE 2, CSE 3, КАС 5e | ||
Leuconostoc pseudomesenteroides 5LE5 | II-A | AGTATAAAGCCCCATTGATCTGACATACATCTGAAGCAG | 0 | + / + / + / — | CSN девяносто одна тысяча девятьсот восемьдесят два 2 |
Поскольку профаги (или остатки профагов), интегрированные в бактериальный геном, обеспечивают устойчивость к суперинфекции (Canchaya et al. 2003), мы также провели поиск этих генетических элементов в геномах наших штаммов. В каждом штамме был обнаружен как минимум один профаг (табл. 4). Области профагов были весьма разнообразны и среди родственных штаммов, например. фунт. plantarum содержали от одного до шести профагов.
профагов и генов, связанных с продукцией биогенных аминов.
Штамм . | Количество профагов . | Гены продукции биогенных аминов . |
---|---|---|
+ Lactobacillus BREVIS 2F1 | 2 | Agmatine deiminase |
+ Lactobacillus BREVIS IVB8 | 1 | Agmatine deiminase |
+ Lactobacillus fermentum TiS2 | 2 | |
Lactobacillus fermentum + TIS4 | 2 | Agmatine deiminase + |
Lactobacillus paracasei + 21L10 | 1 | орнитиндекарбоксилазной |
Lactobacillus paracasei + IIA2 | 3 | Орнитин декарбоксилаза |
Lactobacillus paracasei Viib10 | 3 | Орнитин декарбоксилаза |
Lactobacillus Paracasei Xiib2 | 2 | Ornithi пе декарбоксилазы |
Lactobacillus paraplantarum 91 982 251L | 4 | |
лактобактерии плантарум 91 982 IIB8 | 3 | |
лактобактерии плантарум 91 982 IIB10 | 1 | |
Lactobacillus Plantarum 91 982 TIS6 | 6 | |
лактобактерии плантарум 91 982 VIB7 | 4 | |
лактобактерии плантарум 91 982 17L1 | 2 | |
Lactococcus Lactis 91 982 33S7 | 4 | Agmatine deiminase |
Leuconostoc MESenteroides 5LE6 | 4 | |
Leuconostoc Mesenteroides 1Le7 | 2 | |
Leuconos TOC mesenteroides 2LE4 | 2 | |
Leuconostoc pseudomesenteroides 5LE5 | 2 | |
Enterococcus faecium 33S3 | 2 | |
Enterococcus faecium IIA4 | 4 |
Штамм
.![]() | Количество профагов . | Гены продукции биогенных аминов . |
---|---|---|
+ Lactobacillus BREVIS 2F1 | 2 | Agmatine deiminase |
+ Lactobacillus BREVIS IVB8 | 1 | Agmatine deiminase |
+ Lactobacillus fermentum TiS2 | 2 | |
Lactobacillus fermentum + TIS4 | 2 | Agmatine deiminase + |
Lactobacillus paracasei + 21L10 | 1 | орнитиндекарбоксилазной |
Lactobacillus paracasei + IIA2 | 3 | Орнитин декарбоксилаза |
Lactobacillus paracasei Viib10 | 3 | Орнитин декарбоксилаза |
Lactobacillus Paracasei Xiib2 | 2 | Ornithi пе декарбоксилазы |
Lactobacillus paraplantarum 91 982 251L | 4 | |
лактобактерии плантарум 91 982 IIB8 | 3 | |
лактобактерии плантарум 91 982 IIB10 | 1 | |
Lactobacillus Plantarum 91 982 TIS6 | 6 | |
лактобактерии плантарум 91 982 VIB7 | 4 | |
лактобактерии плантарум 91 982 17L1 | 2 | |
Lactococcus Lactis 91 982 33S7 | 4 | Agmatine deiminase |
Leuconostoc MESenteroides 5LE6 | 4 | |
Leuconostoc Mesenteroides 1Le7 | 2 | |
Leuconos TOC mesenteroides + 2LE4 | 2 | |
+ Leuconostoc pseudomesenteroides + 5LE5 | 2 | |
+ Enterococcus faecium + 33S3 | 2 | |
+ Enterococcus faecium + IIA4 | 4 |

Профаги и гены, связанные с продукцией биогенных аминов.
Штамм . | Количество профагов . | Гены продукции биогенных аминов . |
---|---|---|
+ Lactobacillus BREVIS 2F1 | 2 | Agmatine deiminase |
+ Lactobacillus BREVIS IVB8 | 1 | Agmatine deiminase |
+ Lactobacillus fermentum TiS2 | 2 | |
Lactobacillus fermentum + TIS4 | 2 | Agmatine deiminase + |
Lactobacillus paracasei + 21L10 | 1 | орнитиндекарбоксилазной |
Lactobacillus paracasei + IIA2 | 3 | Орнитин декарбоксилаза |
Lactobacillus paracasei Viib10 | 3 | Орнитин декарбоксилаза |
Lactobacillus Paracasei Xiib2 | 2 | Ornithi пе декарбоксилазы |
Lactobacillus paraplantarum 91 982 251L | 4 | |
лактобактерии плантарум 91 982 IIB8 | 3 | |
лактобактерии плантарум 91 982 IIB10 | 1 | |
Lactobacillus Plantarum 91 982 TIS6 | 6 | |
лактобактерии плантарум 91 982 VIB7 | 4 | |
лактобактерии плантарум 91 982 17L1 | 2 | |
Lactococcus Lactis 91 982 33S7 | 4 | Agmatine deiminase |
Leuconostoc MESenteroides 5LE6 | 4 | |
Leuconostoc Mesenteroides 1Le7 | 2 | |
Leuconos TOC mesenteroides 2LE4 | 2 | |
Leuconostoc pseudomesenteroides 5LE5 | 2 | |
Enterococcus faecium 33S3 | 2 | |
Enterococcus faecium IIA4 | 4 |
Штамм
.![]() | Количество профагов . | Гены продукции биогенных аминов . |
---|---|---|
+ Lactobacillus BREVIS 2F1 | 2 | Agmatine deiminase |
+ Lactobacillus BREVIS IVB8 | 1 | Agmatine deiminase |
+ Lactobacillus fermentum TiS2 | 2 | |
Lactobacillus fermentum + TIS4 | 2 | Agmatine deiminase + |
Lactobacillus paracasei + 21L10 | 1 | орнитиндекарбоксилазной |
Lactobacillus paracasei + IIA2 | 3 | Орнитин декарбоксилаза |
Lactobacillus paracasei Viib10 | 3 | Орнитин декарбоксилаза |
Lactobacillus Paracasei Xiib2 | 2 | Ornithi пе декарбоксилазы |
Lactobacillus paraplantarum 91 982 251L | 4 | |
лактобактерии плантарум 91 982 IIB8 | 3 | |
лактобактерии плантарум 91 982 IIB10 | 1 | |
Lactobacillus Plantarum 91 982 TIS6 | 6 | |
лактобактерии плантарум 91 982 VIB7 | 4 | |
лактобактерии плантарум 91 982 17L1 | 2 | |
Lactococcus Lactis 91 982 33S7 | 4 | Agmatine deiminase |
Leuconostoc MESenteroides 5LE6 | 4 | |
Leuconostoc Mesenteroides 1Le7 | 2 | |
Leuconos TOC mesenteroides + 2LE4 | 2 | |
91 981 Leuconostoc pseudomesenteroides + 5LE5 | 2 | |
91 981 Enterococcus faecium + 33S3 | 2 | |
91 981 Enterococcus faecium + IIA4 | 4 |
Приобретенная устойчивость к антибиотикам молочнокислых бактерий, используемых для пищевых целей, считается опасной (EFSA 2012). Однако устойчивость определенных видов или штаммов может быть присущей им, и поэтому необходимо проверить наличие переносимых генов устойчивости к антибиотикам (Klare et al. 2007). Большинство штаммов в этом исследовании были лишены генов устойчивости к антибиотикам, только E. faecium 33S3 содержали AAC(6΄)-li и msrC , E. faecium IIA4 содержали AAC(6΄)-li, msrC и efmA , а Lc. lactis 33S7 содержал lmrCD (данные не показаны) . Известно, что все эти гены устойчивости присутствуют у большинства E. faecium и Lc. lactis соответственно, и наши результаты согласуются со знаниями об устойчивости молочнокислых бактерий к антибиотикам (Mathur and Singh 2005).
Еще одним признаком, считающимся отрицательным в заквасочных культурах для сыра, является наличие генов, кодирующих ферменты, отвечающие за выработку биогенных аминов. В этом отношении распознаются четыре основных гена, а именно hdc , кодирующий гистидиндекарбоксилазу, agdi , кодирующий агматиндезаминазу, odc , кодирующий орнитиндекарбоксилазу, и tyrdc , кодирующий тирозиндекарбоксилазу (Coton 9191). 2018). В то время как hdc и tyrdc не были обнаружены в геноме ни одного из наших штаммов, agdi был обнаружен в четырех штаммах и odc был обнаружен в четырех штаммах (табл. 4).
Анализ геномов также предоставил информацию о генах метаболизма сахаридов, белков и липидов, которая, однако, слишком сложна, чтобы ее можно было синтезировать для каких-либо выводов относительно технологической ценности отдельных штаммов. Штаммы также не будут отбирать по классическим параметрам, таким как быстрое образование молочной кислоты или производство диацетила, поскольку они предназначены для использования в производстве конкретных традиционных сыров.На основании полученных результатов штаммы Lactobacillus и Leuconostoc , у которых было обнаружено, что они лишены генов, участвующих в продукции биогенных аминов, будут переданы в эксперименты с модельным производством сыра, с особым вниманием к Lb. paraplantarum 251 L. В геноме последнего штамма обнаружены гены, кодирующие два бактериоцина, систему рестрикции-модификации, две системы CRISPR-Cas, четыре профага и отсутствуют гены, связанные с антибиотикорезистентностью или продукцией биогенных аминов.
ФИНАНСИРОВАНИЕ
Работа выполнена при поддержке Словацкого агентства исследований и разработок по контракту № APVV-14-0025.
Конфликт интересов . Не объявлено.
ССЫЛКИ
Арндт
D
,Грант
JR
,Марку
A
и др.PHASTER: улучшенная и более быстрая версия инструмента поиска фагов PHAST
.Рез. нуклеиновых кислот
2016
;44
:W16
–21
.
Aziz
RK
,Bartels
D
,Best
AA
и др.Сервер RAST: быстрые аннотации с использованием технологии подсистем
.
BMC Genomics
2008
;9
:75
Berta
G
,Chebeňová
V
,Brežná
B 900al.Идентификация молочнокислых бактерий в словацкой брынзе
.J Food Nutr Res
2009
;48
:65
–71
.
Canchaya
C
,Proux
C
,Fournous
G
и др.Геномика профагов
.Микробиол Мол Биол Р
2003
;67
:238
–76
.
Чаплова
Z
,Пангалло
D
,Кракова
L
и др.Обнаружение генов prtP , pepN , pepX и bcaT , участвующих в образовании ароматически-активных соединений в молочнокислых бактериях из овечьего сыра
.J Food Nutr Res
2018
;57
:195
–200
.
Чебенева-Турковска
В
,Женишова
К
,Кучта
Т
и др.
Независимое от культуры определение микроорганизмов в традиционной словацкой брынзе
.Int J Food Microbiol
2011
;150
:73
–78
.
Коффи
А
,Росс
РП
.Системы устойчивости к бактериофагам в молочных заквасочных штаммах: молекулярный анализ для применения
.Антон Леу
2002
;82
:303
–21
.
Котон
М
,Лебретон
М
,Лейва Салас
М
и др.Профили устойчивости к биогенным аминам и антибиотикам, определенные для молочнокислых бактерий и пропионибактерий перед использованием в качестве противогрибковых биозащитных культур
.Int Dairy J
2018
;85
:21
–26
.
Дольчи
P
,Коколин
LS
.Заквасочные штаммы и вспомогательные незаквасочные молочнокислые бактерии (NSLAB) в молочных продуктах
.
Poltronieri
P
(ред.).Микробиология в молочной промышленности: проблемы и возможности
.Оксфорд
:Wiley and Sons
,2017
,177
–89
.
Драховска
H
,Слободникова
L
,Кочинцова
D
и др.Резистентность к антибиотикам и факторы вирулентности среди клинических и пищевых энтерококков, выделенных в Словакии
.Фолиа микробиол
2004
;49
:763
–8
.
Дюпюи
МЭ
,Виллион
М
,Магадан
АХ
и др.CRISPR-Cas и системы рестрикции-модификации совместимы и повышают устойчивость к фагам
.Нац Коммуна
2013
;4
:2087
.Европейское агентство по безопасности пищевых продуктов (EFSA)
.Руководство по оценке чувствительности бактерий к противомикробным препаратам, имеющим значение для человека и ветеринарии
.
EFSA J
2012
;10
:2740
.
Фаваро
Л
,Пенна
ALB
,Тодоров
SD
.Бактериоциногенные МКБ из сыров – применение в биоконсервации
?Trends Food Sci Technol
2015
;41
:37
–48
.
Felis
GE
,Torriani
S
,Flórez
AB
и др.Геномная характеристика стратерных культур и пробиотических бактерий
. В:Tamine
AY
,Thomas
LV
(ред.).Пробиотические молочные продукты
, 2-е изд.Оксфорд
:Wiley and Sons
,2018
,37
–65
.
Форде
А
,Фицджеральд
ГФ
.Защитные системы бактериофагов молочнокислых бактерий
.Антон Леув
1999
;76
:89
–113
.
Гарриг
C
,Йохансен
E
,Криттенден
R
.
Пангеномика – путь к улучшению промышленных стартовых культур и пробиотиков
.Курр Опин Биотехнолог
2013
;24
:187
–91
.
Грисса
I
,Vergnaud
G
,Pourcel
C
.База данных CRISPRdb и инструменты для отображения CRISPR и создания словарей спейсеров и повторов
.BMC Биоинформатика
2007
;8
:172
.
Гупта
SK
,Падманабхан
BR
,Диен
SM
и др.ARG-ANNOT, новый биоинформационный инструмент для обнаружения генов устойчивости к антибиотикам в бактериальных геномах
.Противомикробные агенты Ch
2014
;58
:212
–20
.
Hasman
H
,Saputra
D
,Sicheritz-Ponten
T
и др.Быстрое полногеномное секвенирование для обнаружения и характеристики микроорганизмов непосредственно из клинических образцов
.
J Clin Microbiol
2014
;52
:139
–46
.
Hynes
AP
,Lemay
ML
,Trudel
L
и др.Обнаружение естественной адаптации систем CRISPR-Cas Streptococcus thermophilus в исследовательских и аудиторных условиях
.Nat Protoc
2017
;12
:547
–65
.
Kearse
M
,Moir
R
,Wilson
A
и др.Geneious Basic: интегрированная и расширяемая настольная программная платформа для организации и анализа данных о последовательности
.Биоинформатика
2012
;28
:1647
–9
.
Клапачова
L
,Грайф
G
,Грейфова
М
и др.Антимикробно активные лактобациллы из козьего молока, не продуцирующие биогенные амины
.J Food Nutr Res
2015
;54
:270
–4
.
Klare
I
,Konstabel
C
,Werner
G
и др..J Антимикроб Chemoth
2007
;59
:900
–12
.
Колошта
М
,Слоттова
А
,Дрончовски
М
и др.Характеристика лактобацилл из овечьего и козьего молока для их дальнейшей обработки и повторного использования
.Потравинарство
2014
;8
:130
–4
.
Лейкова
Й
,Кореньова
Й
,Женишова
К
и др.Выделение аутохтонных молочнокислых бактерий из овечьего кускового сыра, брынзы и овечьего сыра в бочках и их характеристика с помощью инфракрасной спектроскопии с преобразованием Фурье
.J Food Nutr Res
2015
;54
:308
–13
.
McArthur
AG
,Waglechner
N
,Nizam
F
и др.Полная база данных по устойчивости к антибиотикам
.
Противомикробные агенты Ch
2013
;57
:3348
–57
.
Матхур
С
,Сингх
Р
.Резистентность молочнокислых бактерий к антибиотикам – обзор
.Int J Food Microbiol
2005
;105
:281
–95
.
Мелье
В
,Лу
В
,Рено
Р
.Последовательность генома Leuconostoc pseudomesenteroides Штамм 4882, выделенный из молочной закваски
.J Бактериол
2012
;194
:6637
.
Morovic
W
,Roper
JM
,Smith
AB
и др.Оценка безопасности HOWARU Restore ( Lactobacillus acidophilus NCFM, Lactobacillus paracasei Lpc-37, Bifidobacterium animalis subsp. lactis Bl-04) на устойчивость к антибиотикам, геномные факторы риска и острую токсичность
.Food Chem Toxicol
2017
;110
:316
–24
.
Пангалло
D
,Шакова
N
,Кореньова
J
и др.Микробное разнообразие и динамика при производстве сыра майская брынза
.Int J Food Microbiol
2014
;170
:38
–43
.
Садецка
J
,Шакова
N
,Пангалло
D
и др.Микробное разнообразие и летучие запахоактивные соединения бочкового овечьего сыра как промежуточного продукта, определяющего качество озимой брынзы
.LWT – Food Sci Technol
2016
;70
:237
–44
.
Шакова
N
,Садецка
J
,Лейкова
J
и др.Характеристика сыра майская брынза из различных регионов Словакии на основе микробиологического, молекулярного исследования и изучения основных летучих одорантов
.J Food Nutr Res
2015
;54
:239
–51
.
Suárez
V
,Zago
M
,Giraffa
G
и др.
Доказательства наличия систем рестрикции/модификации в Lactobacillus delbrueckii
.J Dairy Res
2009
;76
:433
–40
.
Sun
Z
,Harris
HMB
,McCann
A
и др.Расширение биотехнологического потенциала лактобацилл посредством сравнительной геномики 213 штаммов и связанных с ними родов
.Нац Коммуна
2015
;6
:8322
.
Van Heel
AJ
,de Jong
A
,Song
C
и др.BAGEL4: удобный веб-сервер для тщательного анализа RiPPs и бактериоцинов
.Рез. нуклеиновых кислот
2018
;46
:W278
–81
.
Ваттам
AR
,Абрахам
D
,Далай
O
и др.PATRIC, база данных бактериальной биоинформатики и аналитический ресурс
.Рез. нуклеиновых кислот
2014
;42
:D581
–91
.
Чжан
Q
,Е
Y
.Не все предсказанные системы CRISPR-Cas одинаковы: изолированные гены cas и классы CRISPR-подобных элементов
.BMC Биоинформатика
2017
;18
:92
.© ФЭМС 2018.
%PDF-1.4
%
1 0 объект
> /ExtGState >
/Шрифт >
/ProcSet [ /PDF /Text ] >>
/Содержание 47 0 Р
/MediaBox [ 0 0 595 842 ]
/CropBox [ 0 0 595 842 ]
/Повернуть 0
/StructParents 1
/Аннотс 2 0 Р
>>
эндообъект
2 0 объект
[
3 0 Р 4 0 Р 5 0 Р 6 0 Р 7 0 Р 8 0 Р 9 0 Р 10 0 Р 11 0 Р 12 0 Р 13 0 Р
14 0 Р 15 0 Р 16 0 Р 17 0 Р 18 0 Р 19 0 Р 20 0 Р 21 0 Р 22 0 Р 23 0 Р
24 0 Р 25 0 Р 26 0 Р 27 0 Р 28 0 Р 29 0 Р 30 0 Р 31 0 Р 32 0 Р 33 0 Р
34 0 Р 35 0 Р 36 0 Р 37 0 Р 38 0 Р 39 0 Р 40 0 Р 41 0 Р 42 0 Р 43 0 Р
44 0 Р 45 0 Р 46 0 Р
]
эндообъект
3 0 объект
>
эндообъект
4 0 объект
>
эндообъект
5 0 объект
>
эндообъект
6 0 объект
>
эндообъект
7 0 объект
>
эндообъект
8 0 объект
>
эндообъект
9 0 объект
>
эндообъект
10 0 объект
>
эндообъект
11 0 объект
>
эндообъект
12 0 объект
>
эндообъект
13 0 объект
>
эндообъект
14 0 объект
>
эндообъект
15 0 объект
>
эндообъект
16 0 объект
>
эндообъект
17 0 объект
>
эндообъект
18 0 объект
>
эндообъект
19 0 объект
>
эндообъект
20 0 объект
>
эндообъект
21 0 объект
>
эндообъект
22 0 объект
>
эндообъект
23 0 объект
>
эндообъект
24 0 объект
>
эндообъект
25 0 объект
>
эндообъект
26 0 объект
>
эндообъект
27 0 объект
>
эндообъект
28 0 объект
>
эндообъект
29 0 объект
>
эндообъект
30 0 объект
>
эндообъект
31 0 объект
>
эндообъект
32 0 объект
>
эндообъект
33 0 объект
>
эндообъект
34 0 объект
>
эндообъект
35 0 объект
>
эндообъект
36 0 объект
>
эндообъект
37 0 объект
>
эндообъект
38 0 объект
>
эндообъект
39 0 объект
>
эндообъект
40 0 объект
>
эндообъект
41 0 объект
>
эндообъект
42 0 объект
>
эндообъект
43 0 объект
>
эндообъект
44 0 объект
>
эндообъект
45 0 объект
>
эндообъект
46 0 объект
>
эндообъект
47 0 объект
>
поток
ХМ8!
TMM$ƖKgg*C7%LA}`{3ja&nFAwi֠~/69™:mrIUDr>;f)#Q#M_5XqNѧ ^zќFIu GCY_*2T{8p_^ ]8
K0;—7p7F0—A5+x}p’x[O NDED»HqE»eMGCoBm@bvHk. `X3o&{~ɐH
Границы | Влияние аутохтонных предполагаемых пробиотических культур на микробиоту, липидные компоненты и метаболом сыра Caciotta
Введение
«Функциональная пища» может быть определена как любая пища, оказывающая положительное влияние на здоровье, физическую работоспособность или душевное состояние потребителя в дополнение к ее питательной ценности (Karimi et al., 2012). Концепция биофункциональных пищевых продуктов обычно используется, когда благотворное физиологическое воздействие обеспечивается микроорганизмами (Gobbetti et al., 2010). Эти эффекты могут возникать в результате взаимодействия проглоченных живых микроорганизмов с хозяином (пробиотический эффект) и/или проглатывания микробных метаболитов, образующихся во время ферментации (биоактивный эффект) (Linares et al., 2017). Молочнокислые бактерии (МКБ) играют многофункциональную роль в ферментированных пищевых продуктах, которая не ограничивается преобразованием субстрата и консервированием продукта, но также связана с улучшением пищевой ценности и органолептических характеристик, а также функциональных свойств за счет образования биоактивных молекул. .МКБ обычно считаются полезными микроорганизмами, а некоторые штаммы считаются «пробиотиками».
Пробиотики в составе функциональных пищевых продуктов вызывают все больший научный интерес в связи с их ролью в поддержании здоровой кишечной экосистемы. Это бактерии, как правило, лактобактерии и бифидобактерии, а также энтерококки и дрожжи, обладающие множеством полезных для здоровья эффектов (Franz et al., 2011; Albenzio et al., 2013; Saad et al., 2013; Perotti et al., 2014; Мерчан и др., 2020). Пробиотическая пища представляет собой обработанный продукт, который содержит в подходящей матрице и в достаточной концентрации жизнеспособные пробиотические микроорганизмы, которые должны быть способны выживать в желудочно-кишечном тракте (Saxelin et al., 2003). Популяции не менее 10 7 КОЕ/г в конечном продукте были предложены в качестве терапевтических количеств пробиотических культур в различных обработанных пищевых продуктах (Talwalkar and Kailasapathy, 2004; Karimi et al. , 2012).
В последнее десятилетие возрос интерес к молочным продуктам, содержащим определенные микробные штаммы с потенциальными полезными для здоровья свойствами.Сыр является одним из наиболее распространенных носителей, используемых для эффективной доставки живых пробиотических микроорганизмов, поскольку он демонстрирует хорошую буферную способность, создавая более благоприятную среду для выживания пробиотиков на протяжении всего желудочного транзита (Castro et al., 2015; Homayouni et al., 2020). Несколько исследований касались разработки пробиотических сыров, включая чеддер (Zhang et al., 2013), аргентинский овечий сыр (Perotti et al., 2014), Scamorza (Albenzio et al., 2013) и Ricotta (Sameer et al., 2020). .
Среди основных проблем, связанных с использованием пробиотических культур для производства функциональных сыров, являются их способность преодолевать технологические препятствия во время обработки и созревания, а также их безопасность для человека (Karimi et al. , 2012; Castro et al., 2015). . Кроме того, их введение не должно отрицательно сказываться на ожидаемых органолептических характеристиках (вкус, консистенция и внешний вид) и биохимическом составе сыров (Карими и др., 2012; Сабихи и др., 2014). В целом, включение пробиотических бактерий не должно означать потери общего качества продукта.
Штаммы Lactobacillus , используемые в качестве пробиотиков, обычно имеют человеческое или животное происхождение. Однако несколько исследований показали, что штаммы с потенциальными пробиотическими свойствами также обнаруживаются в молочных продуктах и других немолочных ферментированных продуктах (Zielińska and Kolożyn-Krajewska, 2018). На сегодняшний день многие лактобациллы, выделенные из высококачественных сыров из сырого молока кустарного производства, были отобраны на основе их функциональных свойств и использованы вместе со стандартными или аутохтонными заквасочными культурами в процессе производства различных типов сыров для улучшения и повышения их органолептических свойств (Randazzo et al. др., 2008; Гуаррасиа и др., 2017).
В настоящее время использование пробиотических дрожжей по-прежнему ограничено, несмотря на их обычное присутствие в некоторых ферментированных пищевых продуктах, где они активно участвуют в производстве ароматических компонентов и ингибировании порчи бактерий (Fleet, 2007; Tofalo et al., 2019). Исходя из этого, несколько видов дрожжей широко используются в качестве дополнительных культур для улучшения формирования вкуса в определенных сортах сыра (Centeno et al., 2017). Наиболее важная роль дрожжей в созревании сыра связана с повышением рН за счет метаболизма лактата и образования щелочных метаболитов.
Технологический, пробиотический и биоактивный потенциал этих предполагаемых пробиотических штаммов должен быть оценен in situ путем анализа их взаимодействия с точки зрения состава сыра, физико-химических характеристик, доступности питательных веществ, жизнеспособности и производства биомолекул.
Качотта представляет собой полумягкий сыр с коротким или средним сроком созревания, произведенный из пастеризованного цельного коровьего, овечьего или козьего молока, и представляет собой один из наиболее распространенных традиционных сортов итальянского сыра. «Caciotta sarda» производится с декабря по июль на всей территории Сардинии с использованием сардинского овечьего молока. Форма цилиндрическая, вес варьируется от 1 до 2,2 кг. Молоко пастеризуют, охлаждают до 36°С и коагулируют с добавлением телячьего сычужного фермента и коммерческой микробной закваски.
Органолептические характеристики этого типа сыра могут варьироваться в зависимости от места производства, времени созревания и используемого молока (Gobbetti et al., 2018). Поскольку время созревания обычно варьируется от 15–20 дней до 2–6 месяцев, пастеризация молока необходима для уничтожения любых патогенных бактерий, которые могут присутствовать в сыром молоке (Aquilanti et al., 2011). С другой стороны, пастеризация приводит к потере местных видов молочнокислых бактерий, важных для процесса ферментации и созревания. Таким образом, для стандартизации производства при одновременном сохранении уникальных характеристик этого типичного сорта сыра добавление выбранных автохтонных дополнительных культур представляется наиболее эффективным инструментом, как сообщалось в других исследованиях (Fusco et al. , 2019; Bancalari et al., 2020; Calasso et al., 2020). Уже доказано, что использование автохтонных заквасок является эффективным средством стандартизации производства сыров из сырого молока, в то же время положительно влияя на их качество (Silvetti et al., 2017; Де Паскуале и др., 2019 г.; Дольчи и др., 2020). При применении пастеризации для уменьшения дефектов сыра добавление выбранных штаммов молочнокислых бактерий имеет особое значение для восстановления исходной микрофлоры, ответственной за типичность традиционных продуктов, как показано другими авторами для сыра Caciotta (Turchi et al., 2011; Bancalari et al. ., 2020).
В данной работе мы использовали мультидисциплинарный подход для исследования влияния дополнительных культур, содержащих аутохтонный предполагаемый пробиотик Lactobacillus и штаммы дрожжей, на химический и микробиологический состав и органолептические свойства промышленно производимого сыра Caciotta из овечьего молока в течение всего периода созревания 60 дней. Для сравнения все анализы были проведены также на Caciotta, приготовленном с коммерческими заквасочными культурами, используемыми в качестве контроля.
Материалы и методы
Микробные штаммы и производство сыра
Как указано в Таблице 1, три типа экспериментальных сыров Caciotta (C1, C2, C3) были изготовлены с использованием трех различных комбинаций автохтонных дополнительных культур, содержащих предполагаемый пробиотик Lactobacillus и штаммы дрожжей в сочетании с заквасочными культурами, представленными автохтонным L.lactis подвид. lactis или Enterococcus faecalis , отобранных на основе их технологических характеристик и свойств безопасности, необходимых для применения в качестве функциональных заквасок (Cosentino et al., 2002, 2004; Pisano et al., 2015). Штаммы Lactobacillus и дрожжей, использованные в этом исследовании, ранее были проверены на некоторые функциональные свойства in vitro , связанные с пробиотическими свойствами, с учетом их использования в производстве сыра в качестве дополнительных культур (Pisano et al. , 2008, 2014; Фадда и др., 2004, 2017). Основные характеристики автохтонных штаммов, использованных в этом исследовании, указаны в дополнительной таблице 1 в дополнительных материалах. Контрольный сыр (CC) был получен с использованием коммерческой закваски ( L. lactis Lyoto MO540 и MO536, Сакко, Италия). Все сыры были произведены молочным заводом (Argiolas Formaggi, Dolianova, Cagliari, Италия) в соответствии с производственным протоколом Caciotta.
Таблица 1. Закваски и предполагаемые пробиотические культуры, используемые при производстве овечьих сыров Качотта.
Аутохтонные штаммы молочнокислых бактерий содержали при температуре -20°C в бульоне MRS или M17 (Microbiol, Кальяри, Италия) со стерильным 15% (об./об.) глицерином (Microbiol) в качестве криопротектора в микробной коллекции Департамента медицинских наук и Здравоохранение. Свежие культуры готовили на автоклавированном стерильном обезжиренном молоке после двух последовательных пересевов в бульон MRS или М17 (1% инокулята) и инкубировали при 30°С в аэробных условиях в течение 18 ч. Штаммы дрожжей поддерживали в YEPD (дрожжевой экстракт пептон-декстроза, Microbiol) с 20% (вес/объем) глицерина.Штаммы, использованные в комбинации, не продуцировали антибактериального вещества друг против друга (данные не представлены).
Всего было проведено четыре испытания сыроварения Caciotta в четыре разных дня. В каждом испытании одновременно производили две партии сыра из двух емкостей с одним и тем же пастеризованным овечьим молоком с использованием двух разных комбинаций заквасок (коммерческая закваска или автохтонная закваска, содержащая предполагаемые пробиотические штаммы в качестве добавки) для восьми партий сыра, поэтому было проведено два независимых эксперимента. сделано в разные дни для каждой комбинации штаммов (дополнительный рисунок 1 в дополнительном материале).Для приготовления инокулята для сыроварения штаммы инокулировали в пастеризованное овечье молоко, инкубировали при 30°С в течение 18–24 ч и добавляли в баковое молоко в количестве 10 7 , 10 5 и 10 4 КОЕ. /мл для молочнокислых бактерий, видов Kluyveromyces и видов Debaryomyces соответственно.
Химический состав сырого овечьего молока, используемого для производства сыра, составлял 6,43% жира, 5,58% белка, 4% лактозы, а рН был измерен на уровне 6,7. После пастеризации (72°С в течение 20 с) молоко в каждой емкости (150 л) охлаждали до 37°С и инокулировали заквасочными и вспомогательными культурами.После 30-минутной выдержки в молоко добавляли сычужный фермент (1:50000) и проводили коагуляцию при 37°С в течение 20 мин. Творог нарезают и оставляют на 10 мин. Затем творожные кусочки вручную прессовали в формы для стекания сыворотки (30°С, влажность 85–90%). После рассола в течение 12–16 ч (23% °Ве) сыры переносили в камеру дозревания и хранили 2 месяца при температуре 12–15°С и относительной влажности 85%. Вес сырков около 1,5 кг, диаметр 20 см, высота 15 см.Образцы для всех анализов отбирали через 1, 15, 30 и 60 дней после производства. Сыры отправлялись в лабораторию в холодильнике (около 4°C) и либо немедленно анализировались, либо замораживались, в зависимости от анализов.
Композиционный анализ
Химический состав (жир (влажный вес), жир (сухой вес), белок, соль и влага) определяли с помощью лабораторного анализатора молочных продуктов FoodScan TM типа 78810 (Foss, Hillerød, Дания) в лаборатории молочного завода. pH молока и образцов гомогенизированного сыра (10 г в 10 мл дистиллированной воды) измеряли pH-метром HI8520 (Pool Bioanalysis Italiana, Милан, Италия).Активность воды (a w ) определяли с использованием измерителя активности воды PAWKIT (Decagon Devices, Pullman, WA, США) в соответствии с инструкциями производителя. Все определения были сделаны в двух повторностях.
Микробиологические анализы
В каждой точке отбора проб брали кусочек цельного куска сыра (около 200 г), затем аликвоты по 10 г в трех повторах добавляли к 90 мл 2% (масса/объем) стерильного раствора цитрата натрия и гомогенизировали в Лабораторный блендер для желудка (Pool Bioanalysis Italiana, Милан, Италия) в течение 2 мин при нормальной скорости. Десятичные разведения готовили в стерильном 0,1% (масса/объем) растворе пептона и наносили на поверхность различных агаровых сред. Общую мезофильную аэробную микробиоту подсчитывали, используя метод выливания на агар для подсчета чашек (PCA, Microbiol, Кальяри, Италия), инкубированный при 30°C в течение 48–72 часов. Enterobacteriaceae и E. coli определяли на агаре с фиолетово-красной желчью и глюкозой (VRBGA, Microbiol) и агаре с триптоном и желчью и X-глюком (TBX, Microbiol) соответственно с использованием метода заливки чашек.Планшеты VRBG и TBX покрывали слоем той же питательной среды перед инкубацией при 37°C и 44°C в течение 24 ч соответственно. Лактококки и энтерококки подсчитывали на агаре М17 и КФ (Микробиол) с добавлением 1% ТТС, инкубировали при 30 и 37°С в течение 48 ч соответственно. Для подсчета лактобактерий использовали агар MRS, подкисленный до pH 5,4 ледяной уксусной кислотой, инкубированный при 30°C в микроаэрофильных условиях в течение 48 ч. Коагулазоположительные стафилококки подсчитывали на яично-желтково-теллуритовом агаре Бэрда-Паркера (Microbiol) с инкубацией при 37°С в течение 48 ч.
Черные колонии с типичным просветлением яичного желтка или без него тестировали на наличие каталазы, ферментацию маннита и продукцию коагулазы с помощью коагулазного теста в пробирке. Дрожжи и плесени подсчитывали в чашках с картофельно-декстрозным агаром (PDA, Microbiol), содержащих 0,1 г/л клорамфеникола, инкубировали при 25°C в течение 5-20 дней.
Экстракция ДНК из образцов сыра
Суммарная ДНК была извлечена непосредственно из образцов, собранных во время производства и созревания сыра. В каждой точке отбора проб ломтик цельного куска сыра (ок.200 г) и аликвоту 25 г гомогенизировали в 225 мл цитрата натрия (рН 7,5) с помощью Stomacher в течение 3 мин, затем 1 мл гомогената инкубировали в течение 30 мин при 45°С в сухом терморегуляторе. автономный обогреватель (Asal, Милан, Италия). После добавления равного объема абсолютного этанола образцы центрифугировали при 10000 х г в течение 10 мин. Осадки ресуспендировали в 200 мкл буфера для лизиса (200 мМ Трис-HCl, pH 8,0, 250 мМ NaCl, 25 мМ ЭДТА, SDS 0,5% мас. /об.) и 18 мкл раствора протеиназы К (2 мг/мл, Sigma). добавлен.Образец энергично встряхивали и инкубировали в течение 60 мин при 65°C перед добавлением 20 мкл 2,5 М ацетата калия (Sigma). Полученную смесь помещали на лед на 2 ч перед центрифугированием при 12000 g в течение 30 мин. Двести микролитров супернатанта переносили в новую пробирку и добавляли равный объем 2-пропанола (Sigma) для осаждения нуклеиновых кислот. Нуклеиновые кислоты экстрагировали в водную фазу центрифугированием при 12000 × г (5′, 4°C) с добавлением 750 мкл SEVAG (хлороформ: изоамиловый спирт 24:1).Полученный раствор ДНК осаждали 70%-ным этанолом центрифугированием при 12000 (4°С, 30 мин), сушили на воздухе и ресуспендировали в 100 мкл ТЭ (10 мМТрис-Cl, рН 8.0, 1 мМ ЭДТА). Концентрацию и чистоту ДНК проверяли по оптической плотности при 260 нм и соотношению O.D. Определения 260 нм/280 нм соответственно.
ПЦР-амплификация последовательностей 16S и 26S рДНК и анализ DGGE
Для анализа DGGE использовали универсальные праймеры F357 (5′-TACGGGAGGCAGCAG -3′) с скоплением GC и R 518 (5′-ATTACCGCGGCTGCTGG-3′) (Muyzer et al. , 1993) использовали для амплификации области V3 16S рРНК. Амплификацию ДНК дрожжей проводили с использованием праймеров NL1 (5′-GCA TAT CAA TAA GCG GAG GAA AAG-3′), зажима GC и LS2 (5′-ATT CCC AAA CAA CTC GAC TC-3′) (Cocolin et al. др., 2000). Реакции амплификации проводили в градиенте Mastercycler 5331 (Eppendorf) в конечном объеме реакционной смеси 50 мкл, каждый из которых содержал 1 × ПЦР-буфер, 2,5 мМ MgCl 2, , 200 мкМ dNTP, 0,2 мМ праймер, 2,5 ЕД ДНК-полимеразы Taq . (Sigma) и 10 мкл матричной ДНК.Продукты ПЦР обычно проверяли на положительную амплификацию на 1,8% масс./об. агарозных гелях перед дальнейшим анализом DGGE.
продукта ПЦР анализировали с помощью DGGE с использованием аппарата Bio-Rad D-code TM (Bio-Rad Laboratories) на геле 20 см × 20 см × 1 мм. Параллельный электрофорез проводили в 1 × ТАЭ при 60 °С с использованием 8% полиакриламидных гелей с диапазоном денатурации 40–60%. Гели запускали в течение 16 ч при 75 В. Полосы визуализировали в УФ-свете после окрашивания бромистым этидием (0. 5 мг/мл –1 ) и сфотографирован под УФ-освещением. Лестница, состоящая из смеси ампликонов различных видов, используемых в качестве закваски и дополнительных пробиотических культур при производстве сыров качотта, была создана для того, чтобы отслеживать их присутствие в процессе созревания.
Сенсорный анализ
Органолептический профиль сыров со сроком созревания 60 дней был составлен группой из шести экспертов, обученных органолептическому анализу сыров Caciotta, произведенных на Сардинии.Опытные и контрольные сыры оценивали по общему виду, интенсивности запаха, вкусу (кислый, сладкий, горький, соленый), интенсивности аромата, консистенции (интенсивность эластичности, твердости, растворимости, зернистости) и общей приемлемости по 7-балльной шкале. , от 1 (низкий или плохой) до 7 (высокий или отличный). У участника дискуссии не было информации об экспериментальном проекте. Все сыры выдерживались при 20°С в течение 1 ч до начала испытаний, кодировались трехзначным кодовым номером и предъявлялись в случайном порядке.
Экстракция и омыление липидов сыра Качотта
Общие липиды (TL) экстрагировали из порций образцов тертого сыра (100 мг, в трех экземплярах) по методике Фолча (Folch et al., 1957) с использованием смеси хлороформ:метанол:вода 2:1:1 (об/мин). v/v), как сообщалось ранее (Rosa et al., 2015). Хлороформную фракцию (липидный экстракт) из каждого образца отделяли от смеси метанол/вода и сушили под вакуумом. Высушенные липидные фракции, растворенные в этаноле, подвергали мягкому омылению, как сообщалось ранее (Rosa et al., 2015, 2017) для разделения липидных компонентов. Неомыляемую (общий холестерин и α-токоферол) и омыляемую (ФА) фракции собирали, растворитель выпаривали и часть высушенных остатков вводили в высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) (Rosa et al., 2015, 2017). Смесь внешних стандартов (содержащая 1 мг триолеина, трилинолеина и холестерина) обрабатывали в качестве образцов для расчета извлечения жирных кислот и холестерина при омылении.
Анализы жирных кислот, холестерина и α-токоферола в сырах Качотта
Аналитические стандарты ЖК, холестерина, трилинолеина, триолеина, α-токоферола, конъюгированной (9Z,11E)-линолевой кислоты (CLA) и всех используемых растворителей высокой чистоты были приобретены у Sigma-Aldrich (Милан, Италия). Все химические вещества, использованные в этом исследовании, были аналитической чистоты.
Анализы липидных компонентов проводили на жидкостном хроматографе 1100 (Agilent Technologies, Пало-Альто, Калифорния, США), оснащенном детектором с диодной матрицей (DAD) и испарительным детектором светорассеяния Infinity 1260 (ELSD).Общий холестерин (определяемый при длине волны 203 нм) и α-токоферол (при 292 нм) измеряли с помощью колонки Inertsil ODS-2 и метанола в качестве подвижной фазы (при скорости потока 0,7 мл/мин), как сообщалось ранее (Rosa et al. и др., 2015, 2017). Анализы ЖК (ненасыщенные обнаружены при 200 нм и с помощью ELSD, насыщенные с помощью ELSD) проводили на XDB-C 18 Eclipse, с подвижной фазой ацетонитрил/вода/уксусная кислота (75/25/0,12, v /v/v) при скорости потока 2,3 мл/мин, как сообщалось ранее (Rosa et al., 2015, 2017). Температуру колонки поддерживали на уровне 37°С. Настройки детектора ELSD были следующими: температура испарителя 40°C, температура распыления 40°C, азот в качестве распыляющего газа при скорости потока 1 л/мин. Идентификацию и количественную оценку ЖК проводили с использованием стандартных соединений и системы данных хроматографии Agilent OpenLAB, как описано ранее (Rosa et al., 2015, 2017). Калибровочные кривые липидных соединений оказались линейными (DAD) и квадратичными (ELSD) с коэффициентами корреляции > 0.995.
ЯМР-анализ
Всего было подготовлено 96 образцов для метаболомного анализа (2 испытания × 4 добавленных смеси культур × 4 временных точки × 3 повторения). В каждый момент созревания отбирали ломтик сыра (около 300 мг). Сыр удаляли с 1 см корки, лиофилизировали, а затем измельчали в керамической ступке пестиком. Экстракцию метанол-хлороформ-вода проводили для каждого образца сыра в трех экземплярах, как сообщалось ранее (Piras et al., 2013). Фракцию метанол/вода собирали отдельно, сушили в вакууме при комнатной температуре с использованием концентратора Eppendorf 5301 (Eppendorf AG, Гамбург, Германия) и затем хранили при -80 °C.Перед анализом ЯМР 1 H гидрофильные метаболиты растворяли в 700 мкл раствора D 2 O, содержащего 0,80 мМ 3-триметилсилил-(2,2,3,3-d4)-1-пропионат натрия (TSP). ) используется в качестве внутреннего стандарта. pH конечного образца доводили до 4,00 ± 0,05 добавлением небольших количеств NaOD или DCl. Затем аликвоту объемом 650 мкл переносили в 5-мм ЯМР-пробирку.
1 H ЯМР-спектры записывали на спектрометре Varian UNITY INOVA 500, работающем при 499°С.839 МГц. Эксперименты проводились с использованием стандартной импульсной последовательности Varian PRESAT. Для каждого эксперимента было собрано 256 сканирований в 32 тыс. точек данных при 300 К по ширине спектра 6000,6 Гц с импульсом 90°, временем сбора данных 2,5 с и задержкой релаксации 4 с. Для подавления остаточного сигнала воды применяли метод предварительного насыщения маломощным радиочастотным облучением в течение 2 с. FID умножались на экспоненциальную весовую функцию, эквивалентную уширению линии, равному 0.3 Гц до преобразования Фурье. Химические сдвиги 1 H ЯМР относились к TSP (δ 0,0 м.д.). Отнесение пиков ЯМР выполняли в соответствии с литературными данными (Piras et al. , 2013), базой данных продуктов питания и программным обеспечением Chenomx NMR suite 8.1 (оценочная версия, Chenomx, Edmonton, AB, Canada).
Все спектры были скорректированы по фазам и скорректированы по базовой линии с помощью MestReNova (версия 14.0, Mestrelab Research SL, Сантьяго-де-Компостела, Испания). Перед удалением областей, содержащих сигналы остаточной воды и внутреннего стандарта TSP, и сегментацией спектров ЯМР на интервалы (бины) с равной шириной, равной 0, была сделана поправка на минимальные смещения в химическом сдвиге, в основном из-за рН-зависимых сигналов.0025 частей на миллион в диапазоне химического сдвига 0,5–9,5 частей на миллион. Затем бины нормализовали к сумме общей площади спектра, чтобы компенсировать общие различия в концентрации.
Статистический анализ
Данные композиционного, микробиологического и органолептического анализов анализировали с использованием программного пакета GraphPad Prism Statistics версии 5.00 (GraphPad Prism Software Inc. , Сан-Диего, Калифорния, США). Средние значения сравнивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа (One-way ANOVA) с использованием теста множественных сравнений Бонферрони.Данные органолептических анализов были проанализированы с помощью теста Крускала-Уоллиса, чтобы выявить какие-либо существенные различия между органолептическими профилями сыров. Разница P < 0,05 считалась значимой.
Многофакторный статистический анализ (MVA) набора данных ЯМР был проведен с использованием SIMCA версии 16.0 (Umetrics, Умеа, Швеция). До MVA данные масштабировались по Парето. Исследовательский анализ основных компонентов (PCA) был впервые проведен для обзора изменчивости данных и возможных тенденций групп (Bro and Smilde, 2014).Производительность модели PCA оценивалась с использованием коэффициентов R 2 и Q 2 , определяемых как доля дисперсии данных, объясненных и предсказуемых моделью, соответственно. Для исследования взаимосвязи между спектральным профилем ядерно-магнитного резонанса (ЯМР) сыров и временем созревания был применен метод ортогональных частичных наименьших квадратов (OPLS) (Trygg and Wold, 2002). OPLS — это расширение PLS, которое разбивает систематическое изменение в блоке X на две части: одна моделирует корреляцию между X и Y (прогнозная), а другая показывает систематическое изменение X, не связанное (ортогональное) с Y.Сложность модели снижается за счет ортогонализации, поскольку систематические изменения в матрице X, не коррелирующие с Y, удаляются. Ортогональные проекции на дискриминантный анализ латентной структуры (OPLS-DA) применялись для попарного сравнения дискриминантных групп (классов) сыров на 60-й день созревания (Bylesjo et al., 2006). Качество моделей OPLS и OPLS-DA оценивалось по R 2 Y и Q 2 Y, т.е. доля вариации Y-переменной и прогнозируемая доля вариации Y-переменной, соответственно.Тест перестановки использовался для оценки надежности моделей, а тест CV-ANOVA (перекрестный валидационный анализ дисперсии) — для оценки их значимости. Потенциальные переменные, которые являются статистически значимыми, были выбраны путем анализа графика коэффициента корреляции S-линии, специально построенного для данных ЯМР-спектроскопии: пики с положительной (отрицательной) интенсивностью принадлежат наиболее распространенным метаболитам в группе справа (слева).
графика очков; Пик в теплых тонах принадлежит метаболитам, которые вносят более значительный вклад в разделение классов, чем метаболиты, связанные с сигналами в холодных тонах.Переменные были выбраны в соответствии с p (корр.) ≥|0,5| и p (cov) ≥|0,05| Значение коэффициента корреляции p (corr) относится к достоверности вклада переменной в математическую модель, а p (cov) представляет смоделированное ковариирование.
Результаты и обсуждение
Физико-химический состав сыра качотта при созревании
Физико-химический состав (pH, a w , влага, жир, сухой жир, соль, белок) опытных и контрольных сыров Caciotta на 1, 15, 30 и 60 сутки созревания приведены в таблице 2.Динамика рН в течение 60 дней созревания варьировала в зависимости от типа сыра: средние значения вначале снижались до 15 (в С1 и С3) или 30 (в СС и С2) дня созревания, а затем увеличивались на 60 день для всех сыров. Хотя существенных различий между типами сыра не наблюдалось, более быстрое увеличение рН (от 30 до 60 дней созревания) было зарегистрировано в сырах, произведенных с дополнительными пробиотическими штаммами, по сравнению с контролем (ΔpH CC: 0,1; ΔpH C1, C2, C3: 0,41, 0,69, 0,91 соответственно). Наибольшее значение рН, наблюдаемое в С3 в конце созревания, может быть связано как с протеолизом во время созревания, так и с утилизацией молочной кислоты штаммом дрожжей К.lactis , используемый в качестве добавки при производстве сыра (Fadda et al., 2004). Средняя активность воды (a w ) всех сыров снижалась во время созревания, достигая значений около 0,94–0,96 через 60 дней без существенных различий ( P > 0,05) между партиями. w является ключевым фактором в поддержании жизнеспособности пробиотиков в конечных продуктах, и значения, наблюдаемые в нашем исследовании, вряд ли повлияют на жизнеспособность и рост потенциальных пробиотических штаммов, поскольку Lactobacillus , Debaryomyces hansenii и Kluyveromyces lactis Было показано, что вида обладают стабильностью при низкой активности воды и сохраняют свою жизнеспособность в различных кормах с низким содержанием влаги (Tapia et al., 2007; Марсьяль-Коба и др., 2019).
Таблица 2. Физико-химические характеристики овечьих сыров Качотта в процессе созревания.
Что касается параметров состава, то между контрольным и опытным сырами не было обнаружено существенных различий ( P > 0,05). Средние значения содержания жира, белка и соли увеличивались во время созревания в сочетании со снижением среднего содержания влаги во всех типах сыра, что согласуется с предыдущими результатами (Pisano et al., 2007; Буччони и др., 2012). На 60-й день состав сыров оказался на уровне других итальянских сыров из овечьего молока (Coda et al., 2006). Ранее было замечено, что добавление пробиотических микроорганизмов не влияло на основные параметры состава (влажность, содержание соли, жира и белка) различных видов сыра (Zhang et al., 2013; Perotti et al., 2014; Terpou et al. ., 2018) и не оказывали негативного влияния на процесс созревания сыра Эдам (Сабихи и др., 2014).
Анализ микробиоты
Во всех проанализированных образцах сыра общее гигиеническое качество оценивали путем определения показателей микробной гигиены Enterobacteriaceae и коагулазоположительных стафилококков, которые всегда находились ниже предела обнаружения (< 10 КОЕ/г и < 100 КОЕ/г соответственно ) (данные не показаны). Было продемонстрировано, что эффективная закваска и/или усиление вспомогательными веществами необходимы для достижения быстрого снижения pH, что способствует контролю этих нежелательных микроорганизмов (Terpou et al., 2018).
Количество жизнеспособных молочнокислых бактерий и дрожжей показано в таблице 3. Количество предполагаемых лактококков было высоким в течение всего периода созревания и существенно не различалось ( P > 0,05) среди всех образцов, предположительно из-за использования одного и того же типа и количество заквасок. Присутствие лактококков в сырах С3 (где штамм лактококков не был включен в закваску) может быть связано с вторичным загрязнением, учитывая, что они широко используются в качестве закваски в производстве сыра и принимая во внимание их способность колонизировать и адаптироваться к различным субстратам в сырах. молочный завод (Calasso et al., 2016). Как и ожидалось, в экспериментальных сырах использование штаммов Lactobacillus в качестве дополнительных культур значительно увеличивало популяцию лактобацилл по сравнению с контролем. При этом лактобациллы увеличивали свою численность до 60 дней созревания. Аналогичные результаты были получены в исследованиях по использованию автохтонных молочнокислых бактерий в сыроделии (Piras et al., 2013; De Pasquale et al., 2019; Fusco et al., 2019). Количество предполагаемых энтерококков было выше в сыре С3, где E.faecalis присутствовал в закваске со средними значениями от 10 5 до 10 7 КОЕ/г, в то время как в других типах сыра они показали средние концентрации от 10 2 КОЕ/г в твороге до примерно 10 5 КОЕ/г в конце созревания, что согласуется с другими исследованиями (Giraffa, 2003; Piras et al., 2013; Fuka et al., 2017; Hanchi et al., 2018). Что касается количества жизнеспособных дрожжей, между сырами не наблюдалось заметных различий, за исключением С3, произведенного с добавлением автохтонного пробиотика К.lactis , который во время производства и созревания показал более высокие показатели, чем у сыра СС и С2 (полученного без пробиотических дрожжей) и сыра С1, даже несмотря на то, что последний был произведен с добавлением дрожжей D. hansenii . Количество дрожжей, обнаруженное в сыре C3 во время созревания, соответствует или ниже, чем в других исследованиях, в которых штаммы дрожжей использовались в качестве состартера или добавки при производстве сыров (Lanciotti et al., 2005; De Freitas et al. , 2008; Перейра Андраде и др., 2019). Сходное количество дрожжей, наблюдаемое в контрольном сыре, сырах С1 и С2, может быть связано с добавлением видов Geotrichum candidum , которые обычно используются вместе с Penicillium candidum на молочном заводе в качестве защитных культур при производстве сыра, чтобы предотвратить или ограничить рост грибков порчи в корке сыра. Насколько нам известно, это первое исследование, в котором сообщается об использовании автохтонных штаммов дрожжей с потенциальными пробиотическими свойствами в качестве добавки для производства сыра.
Таблица 3. Количество жизнеспособных (Log ufc/г) предполагаемых лактококков, лактобацилл, энтерококков и дрожжей при производстве и созревании контрольного и экспериментального сыров Качотта.
Колонии, считавшиеся предполагаемыми лактококками, лактобациллами, энтерококками и дрожжами, были случайным образом отобраны и идентифицированы биохимическими и молекулярными методами, что подтвердило их принадлежность к инокулированным видам, за исключением D. hansenii , который не был обнаружен ни в одном из образцов C1 и наличие Е.faecalis в CC и E. faecium в других типах сыра (данные не показаны). В целом изоляция разнообразной микробиоты в сыре не является неожиданностью, поскольку сыры и связанная с ними молочная среда (например, оборудование, резервуары, камеры созревания) характеризуются сложной микробиотой, которая неизбежно взаимодействует с бактериями из молока и закваски во время производства сыра. (Монтель и др., 2014).
В дополнение к анализу культур, независимый от культуры подход с использованием ПЦР-ДГГЭ использовался для мониторинга присутствия пробиотических дополнительных штаммов с использованием идентификационной лестницы, указанной в MM (рис. 1).Хотя этот молекулярный подход не может дать полную картину разнообразия и состава сообщества микробных экосистем, как это дает высокопроизводительные методы секвенирования, его все же можно считать полезным методом для мониторинга доминирующих изменений сообщества LAB в окружающей среде и кишечной экосистеме. Юнита и Додд, 2018).
Рис. 1. Профили PCR-DGGE участков 16S и 26S рДНК V3 в контрольных (CC) и экспериментальных (C1, C2, C3) образцах сыра в разные сроки созревания.дорожка 1, творожная; полоса 2, 1d-сыр; дорожка 3, 15d-сыр; полоса 4, 30d-сыр; дорожка 5, 60d-сыр; L, идентификационная лестница. а = L. plantarum ATCC 20174; б = Debaryomyces hansenii ATCC36239; c = Kluyveromyces lactis ATCC 56498; d = E. faecalis ATCC 29212; e = L. lactis ATCC 19435; f = Geotrichum candidum ; g = Penicillium candidum ; ч = S. thermophilus ; я = E. faecium .
В целом, наблюдалась хорошая согласованность между ПЦР-ДГГЭ и выделением культуры на чашках, хотя наблюдалось несколько несоответствий, о чем сообщалось в других исследованиях, сочетающих культурально-зависимый и -независимый анализы (Pangallo et al., 2014; Сильветти и др., 2017). Профили DGGE образцов сыра состояли всего из нескольких полос, в основном соответствующих видам, используемым в качестве закваски и вспомогательных культур, и выявили доминирование полосы, соответствующей видам L. lactis , во всех сырах на протяжении всего созревания. Более слабая полоса, соответствующая видам L. plantarum , наблюдалась во всех экспериментальных пробиотических сырах. Поскольку присутствие пробиотических штаммов L. plantarum во время сыроделия и созревания пробиотических сыров было подтверждено культуральным анализом и генотипической характеристикой с помощью rep-PCR, обнаружение слабых полос в анализе DGGE могло быть связано с различной аффинностью праймеров к ДНК-матрицы для разных видов, по наблюдениям других авторов (Bae et al., 2006; Майрхофер и др., 2014). Помимо L. lactis и L. plantarum , во всех сырах были обнаружены другие полосы (обозначенные буквой h и i на рис. 2), которые не удалось идентифицировать с помощью нашей шкалы. Эти полосы были вырезаны и секвенированы, и было обнаружено, что они гомологичны St. thermophilus и E. faecium ( h и i соответственно), типичным случайным LAB в сыре (Carafa et al., 2019).
Рисунок 2. Значения общих ненасыщенных жирных кислот, выраженные в г/100 г сыра (A) и г/100 г общих липидов (B) , измеренные в контроле (CC) и пробиотических сырах (С1, С2, С3) в разные сроки созревания; ( н = 6). a,b,c Образцы с разными надстрочными индексами в течение одного и того же времени созревания значительно различаются при P < 0,05 (однофакторный дисперсионный анализ).
АнализDGGE 26S рДНК использовали для исследования присутствия дополнительных пробиотических штаммов дрожжей D.hansenii и Kl. лактис . В то время как кл. lactis можно было четко обнаружить в сырах С3 на каждой стадии созревания, полоса, соответствующая D. hansenii , не была видна в геле ДГГЭ сыров С1, что подтверждает результат культурального анализа. Поскольку сообщалось о пределе обнаружения 10 3 КОЕ/мл для анализа DGGE (Cocolin et al., 2000), а наш культуральный метод имеет предел обнаружения 10 2 КОЕ/мл, на основе результатов метаболома (см. раздел «Метаболический профиль сыров Качотта во время созревания») мы предположили, что D.hansenii может присутствовать в сыре в жизнеспособном, но не поддающемся обнаружению состоянии. DGGE-анализ 26S рДНК также показал постоянное присутствие видов Geotrichum candidum и Penicillium candidum во всех сырах на протяжении всего созревания.
Сенсорный анализ
Органолептическая оценка пробиотических и контрольных сыров качотта на 60-й день созревания была проведена шестью экспертами. Средние оценки описательных атрибутов, таких как запах, аромат, основные вкусы, текстура и общая приемлемость, задокументированы в таблице 4 и на дополнительном рисунке 2 в дополнительном материале.Значительно более высокие баллы по интенсивности аромата были зафиксированы у сыров С3 по отношению к сортам С1 и С2, а С2 воспринимался как наиболее горький и кислый по отношению к остальным группам. Кроме того, текстурные параметры эластичности и растворимости были значительно выше у сыров СС и С1. В целом, сенсорный профиль сыра C1, который оказался наиболее похожим на сыр CC, и самые высокие оценки аромата, полученные от сыра C3, могут объяснить их несколько более высокие значения общей приемлемости.Наши результаты согласуются с другими исследованиями сенсорных свойств сыра Качотта, произведенного с добавлением автохтонных МКБ (Fusco et al., 2019; Bancalari et al., 2020).
Таблица 4. Оценки сенсорных дескрипторов, полученные для контрольного и пробиотического сыров Caciotta. Атрибуты оценивались по 7-балльной шкале.
Профиль жирных кислот сыра качотта во время созревания
Качественно-количественная информация об основных насыщенных (НЖК) и ненасыщенных (НЖК) ЖК, составляющих классы липидов сыров Caciotta, была получена с помощью анализа ВЭЖХ с детектированием ELSD.ВЭЖХ-ELSD является альтернативной технологией УФ-анализа и часто используется, когда соединения не обладают достаточной абсорбционной способностью (например, насыщенные жирные кислоты). Детектор ELSD количественно определяет любое менее летучее вещество, чем растворители, и функциональные группы, длина цепи ЖК или насыщенность практически не влияют на отклик детектора (Aradottir and Olsson, 2005). Однако сообщалось о нелинейном ответе ELSD на FA и низкой повторяемости факторов ответа ELSD (Cebolla et al., 1997; Aradottir and Olsson, 2005).Таким образом, для сравнительной оценки общих профилей ЖК образцов сыра Caciotta количественное определение ЖК было основано на методе внутренней нормализации (Amaral et al., 2004; Rosa et al., 2017), предполагая, что отклик детектора был одинаковым для все ФА. За основу брали полученную площадь пика, результаты нормализовали без поправочного коэффициента, а содержание ЖК выражали в процентах площади (% площади). Этот анализ ВЭЖХ-ELSD был настроен для анализа до 16 FA (насыщенных + ненасыщенных FA) в одном отдельном анализе без какой-либо дериватизации.ELSD подходит для анализа только ЖК C 12 –C 22 , поскольку те, у которых более короткая длина цепи, не обнаруживаются как слишком летучие (Bravi et al., 2006). Составы ЖК (выраженные в % от общего количества жирных кислот) в контрольном (CC) и пробиотическом сырах Caciotta (C1, C2, C3) на 1 день производства, измеренные с помощью ВЭЖХ-ELSD, приведены в таблице 5. Контрольный сыр Caciotta показал концентрацию примерно 53,3% НЖК (в основном пальмитиновая кислота 16:0 и стеариновая кислота 18:0, 30 и 13% соответственно), 41.6% мононенасыщенных ЖК (МНЖК, в основном олеиновая кислота 18:1 n-9 и 18:1 транс-изомеров , 35,6 и 5,9% соответственно) и 4,6% полиненасыщенных ЖК (ПНЖК), в основном состоящих из конъюгированной линолевой кислоты (CLA) изомеры и линолевая кислота 18:2 n-6, 2,5 и 1,3% соответственно. Пробиотические сыры C1-C3 показали профиль НЖК и НЖК, аналогичный профилю контрольного сыра, со значениями НЖК, МНЖК и ПНЖК в диапазоне 53–55%, 40–41% и 4,6–5% соответственно. Как указано в Таблице 5, абсолютное содержание основных НЖК, обнаруженное в контрольном и пробиотическом сырах Качотта на 1 день производства с помощью ВЭЖХ с определением ДАД, и значения, выраженные в г/100 г сыра Качотта в пересчете на сырую массу, показали количества НЖК. опытных сыров соответствовали измеренным в контроле.Средние значения основных МЖК как контрольных, так и пробиотических сыров находились в пределах: 3,5–4,2 г/100 г сыра для 18:1 n-9, 1,3–1,5 г/100 г для 18:1 транс изомеров. , 0,4-0,5 г/100 г для 18:2 n-6 и 0,3-0,4 г/100 г для изомеров CLA.
Таблица 5. Профиль жирных кислот контрольного (CC) и пробиотического сыра Caciotta (C1, C2, C3) в 1 день производства, измеренный с помощью анализа ВЭЖХ с обнаружением ELSD и DAD.
Аналогичная тенденция и отсутствие существенных различий в уровнях SFA, MUFA и PUFA % среди различных партий сыров Caciotta на всех стадиях созревания (дополнительная фигура 3 в дополнительном материале).
Наблюдались некоторые различия в абсолютных количествах НЖК при созревании. На рис. 2А показано общее количество НЖК (выраженное в г/100 г сыра в пересчете на сырую массу), измеренное в контрольном и пробиотическом сырах в разное время созревания. Абсолютные значения UFA увеличивались при созревании во всех типах сыров в основном за счет соответствующего снижения содержания влаги, о чем свидетельствуют высокие отрицательные коэффициенты корреляции, измеренные между абсолютными значениями UFA и уровнем влажности при созревании для CC (r = -0.9736), C1 (r = -0,9661), C2 (r = -0,8365) и C3 (r = -0,8480). Значительные различия были обнаружены в абсолютных значениях НЖК между типами сыров после 15 дней созревания, при этом образцы С2 и С3 показали самое высокое и самое низкое содержание НЖК соответственно. Эти различия были приписаны различному уровню влажности в сырах Caciotta. Фактически, не наблюдалось существенных различий между экспериментальной и контрольной группой в разное время созревания, когда общие уровни НЖК измерялись в г на 100 г липидов (рис. 2В), что свидетельствует о том, что добавление пробиотических бактерий не влияло на состав ЖК. входящие в состав триглицеридов сырного жира.Аналогичные результаты были получены Perotti et al. (2014), которые не наблюдали изменений в составе ЖК (в %, г ЖК/100 г общего ЖК) аргентинского полутвердого овечьего сыра, изготовленного из смеси пробиотических микроорганизмов.
Изомеры конъюгированной линолевой кислоты (или CLA) представляют особый интерес с точки зрения питания, наиболее представительными из которых являются цис -9, транс -11 CLA (руменовая кислота). Экспериментальные данные свидетельствуют о том, что CLA может оказывать антиатеросклеротическое, антиканцерогенное, противодиабетическое и иммуномодулирующее действие (Mele et al., 2011; Прандини и др., 2011). Поскольку CLA естественным образом присутствует в молоке жвачных животных, сыр представляет собой хороший источник этой ЖК, причем ее содержание в сыре обычно связано с уровнем CLA в необработанном молоке (Perotti et al., 2014). В овечьих сырах сообщалось о более высоком уровне CLA по сравнению с коровьим и козьим сыром (Prandini et al., 2011). Дополнительные количества CLA могут быть получены во время производства и созревания сыра, поскольку некоторые связанные с сыром микроорганизмы, включая пробиотические бактерии, продемонстрировали способность производить CLA (Laskaridis et al., 2013; Перотти и др., 2014). На рис. 3 показаны общие значения изомеров CLA, выраженные в г/100 г сыра (рис. 3А) и г/100 г липидов (рис. 3В), измеренные в контрольном и пробиотическом сырах С1-С3 при разном времени созревания. В нашем исследовании абсолютные значения изомеров CLA, как и всех остальных ЖК, увеличивались на 100 г/г сыра в контрольных и пробиотических сырах с увеличением срока созревания, а самые высокие значения были измерены при сроке созревания 60 дней в образцах сыра, характеризующихся пониженный показатель влажности (СС и С2).Аналогичное содержание CLA было измерено на 100 г липидов среди партий сыра Caciotta на всех стадиях созревания, что свидетельствует о том, что пробиотические культуры не влияли на содержание CLA в сырах по сравнению с контролем. Аналогичные результаты были получены другими авторами для овечьего, козьего и бычьего сыров (Gursoy et al., 2012; Perotti et al., 2014).
Рисунок 3. Суммарные значения изомеров CLA, выраженные в г/100 г сыра (A) и г/100 г общих липидов (B) , измеренные в контроле (CC) и пробиотических сырах ( С1, С2, С3) разных сроков созревания; ( н = 6). a,b,c Образцы с разными надстрочными индексами в течение одного и того же времени созревания значительно различаются при P < 0,05 (однофакторный дисперсионный анализ).
Уровни общего холестерина и α-токоферола в сыре Качотта во время созревания
Молочные продукты играют важную роль в обеспечении диетического холестерина, поскольку холестерин является преобладающим стеролом молока (> 95 г/100 г общего стерола) (Collins et al., 2003). Связь между холестерином плазмы и атеросклерозом подчеркивает важность оценки холестерина в молочных продуктах (Marrone et al., 2014). Было показано, что несколько пробиотических штаммов обладают in vitro способностью снижать уровень холестерина (Ooi and Liong, 2010). На рис. 4 показаны значения общего холестерина, выраженные в мг/100 г сыра и мг/100 г липидов (рис. 4А, В соответственно), измеренные в контрольном и пробиотическом сырах в разное время созревания. Как и ожидалось, содержание холестерина (мг/100 г сыра) увеличивалось во всех видах сыра при созревании из-за потери воды. Через 60 дней созревания содержание общего холестерина находилось в пределах 84–117 мг/100 г сыра, при этом в пробиотических сырах С1 и С3 наблюдались более низкие значения по сравнению с контрольным образцом СС и С2.Не было обнаружено существенных различий в содержании холестерина, выраженном в мг/100 г жира, между контрольным и пробиотическим сырами, даже несмотря на то, что в сырах C1 и C3 использовались штаммы Lactobacillus , снижающие уровень холестерина in vitro. С другой стороны, были отмечены возможные различия между проявлением функциональных свойств in vitro и in vivo , поскольку различные факторы, связанные с условиями окружающей среды и/или взаимодействием с микробными сообществами, преобладающими in situ , могли влиять на эффективность штаммов.В исследовании Albano et al. (2018) семь штаммов молочнокислых бактерий показали более низкую способность снижать уровень холестерина в сыре, чем в бульоне. Наши результаты подчеркивают важность проведения исследований in situ для подтверждения функциональных характеристик пробиотических штаммов in vitro с целью оценки их полезных для здоровья свойств и эффективности в качестве нового пробиотика.
Рисунок 4. Значения общего холестерина, выраженные в мг/100 г сыра (A) и мг/100 г общих липидов (B) , измеренные в контроле (CC) и пробиотических сырах (C1 , С2, С3) разных сроков созревания; ( н = 6). a,b,c,d Образцы с разными надстрочными индексами в течение одного и того же времени созревания значительно различаются при P < 0,05 (однофакторный дисперсионный анализ).
Во всех сырах в процессе созревания также определяли уровень антиоксиданта α-токоферола. В целом сыр считается продуктом, устойчивым к окислению (Mele et al., 2011), характеризующимся наличием антиоксидантов, таких как витамин Е, витамин А и β-каротин (Revilla et al., 2014). Известно, что витамин Е действует главным образом как жирорастворимый антиоксидант, защищая ПНЖК и родственные вещества от перекисного окисления, а α-токоферол является основным компонентом с активностью витамина Е в овечьем молоке и сыре (Revilla et al., 2014). Влияние различных пробиотических организмов и времени созревания на содержание α-токоферола в контрольном и пробиотическом сырах представлено на рисунке 5. Небольшое увеличение концентрации, выраженное в мкг/100 г сыра, наблюдалось во всех партиях сыра через 15 дней. созревания с последующим аналогичным или меньшим количеством на 30-й и 60-й день созревания (рис. 5А). Существенных различий между контрольными и опытными сырами не наблюдалось, а средние значения α-токоферола как в контрольных, так и в пробиотических сырах находились в диапазоне 312–389 мкг/100 г сыра и 1–1.2 мкг/100 г липидов через 60 дней созревания (рис. 5В).
Рисунок 5. Суммарные значения α-токоферола, выраженные в мкг/100 г сыра (A) и мкг/100 г общих липидов (B) , измеренные в контроле (CC) и пробиотических сырах (С1, С2, С3) в разные сроки созревания; ( н = 6).
Метаболический профиль сыров Качотта во время созревания
Было показано, что метаболический анализ сыра является ценным инструментом для изучения связи между биохимическими событиями, происходящими в этом продукте, и процессом созревания (Piras et al., 2013), методы, зависящие от микробной культуры (Pisano et al., 2016), органолептические свойства (Ochi et al., 2012a) или качество сыра (Mazzei and Piccolo, 2012). В настоящем исследовании мы провели метаболомический анализ водного экстракта сыра Качотта на основе ЯМР, чтобы оценить и сравнить изменения метаболического профиля в зависимости от времени созревания и добавления культур.
Репрезентативный 1 Спектры ЯМР H водных экстрактов контрольной Caciotta в разные дни созревания представлены на рисунке 6, а спектры сыров C1, C2 и C3 изображены в дополнительном материале (дополнительные рисунки 4–7).Были обнаружены разнообразные аминокислоты, углеводы, осмолиты и органические кислоты. В хорошем соответствии с литературными данными (Consonni and Cagliani, 2008; Rodrigues et al., 2011; Piras et al., 2013), можно визуально наблюдать, что время созревания влияет на профиль ЯМР всех сыров, как указано. , в частности, увеличением временной интенсивности пиков многих аминокислот и уменьшением сигналов лактозы. Среди различных пиков ЯМР пики молочной кислоты (La) преобладали во всех водных экстрактах Caciotta во все времена созревания (дополнительная фигура 4 в дополнительном материале).Высокое содержание La характерно для начальной стадии сыроделия, когда закваски вызывают легкое и быстрое закисление молока. Наличие высоких уровней La во время созревания Caciotta указывает на устойчивую микробную активность в течение периода созревания. По сравнению с контролем уровни La в экспериментальных сырах, произведенных из автохтонных штаммов, более заметно увеличивались после 15 дней созревания, особенно в С1 и С3 (дополнительный рисунок 8 в дополнительном материале), затем снижались до 60 дней созревания, достигая самые низкие значения в C3, предположительно, как следствие лактатного метаболизма K.lactis , включенный в культуру (Fadda et al., 2004). Поскольку молочная кислота является наиболее распространенной органической кислотой в Caciotta, изменения ее содержания являются основным источником наблюдаемых изменений рН (таблица 2).
Рисунок 6. Представитель 1 Спектры ЯМР H водных экстрактов контрольного сыра Caciotta в разные дни созревания. Сокращения: аа, аминокислоты; ала, аланин; цит, лимонная кислота; чо, холин; кр, креатин; crn, креатинин; форма, муравьиная кислота; ГАМК, γ-аминомасляная кислота; гал, галактоза; GPC, глицеро-фосфохолин; Иль; изолейцин; lac, лактоза; лей, лейцин; lys, лизин; метионин; фен, фенилаланин; пир, пировиноградная кислота; suc, янтарная кислота; тир, тирозин; UDP-сахара, родственные уридиндифосфату сахара; ур, урацил; вал, валин.
Предварительный многофакторный статистический анализ всего набора данных ЯМР был выполнен PCA для изучения внутренней изменчивости. Из-за высокой интенсивности пиков молочной кислоты соответствующие ячейки были удалены перед анализом, чтобы отслеживать возможные изменения метаболических профилей из-за менее распространенных метаболитов. На рисунке 7 показан график оценок PCA, построенный с первыми двумя основными компонентами (PC), PC1 и PC2, объясняющими 54,5 и 16,2% общей дисперсии соответственно.Все образцы на графиках находились в пределах эллипса Т-квадрата Хотеллинга 95%, за исключением образцов С1 на 1 день созревания, характеризующихся более высоким уровнем лактозы по сравнению с другими образцами. Как видно из распределения баллов для каждой временной точки, мы получили хорошую воспроизводимость данных ЯМР с точки зрения повторов и испытаний. Кроме того, движение оценки справа налево указывает на непрерывные метаболические изменения во время созревания сыра. Различия в распределении баллов были видны и по добавленным культурам, особенно в начале приготовления.В целом, эти результаты свидетельствуют о различиях в метаболизме сыров в зависимости как от времени созревания, так и от добавленной культуры.
Рис. 7. График PC1 по сравнению с PC2 для модели PCA, построенной с использованием спектров ЯМР 1 H водных экстрактов Caciotta ( R 2 X = 0,707; Q 1 = 0,707 ): CC (•), C1 (▲), C2 (◆), C3 (■). Цвет баллов обозначает дни созревания. Читатель возвращается к цветному варианту рисунка .
Чтобы сосредоточиться на метаболических изменениях, в основном связанных со временем созревания, для каждого типа сыра Caciotta была построена модель OPLS (дополнительный рисунок 9 в дополнительном материале). Все модели характеризовались высокими статистическими значениями, что давало Q 2 ≥ 0,95. Каждая модель была дополнительно подтверждена перестановочными тестами ( n = 400), в результате чего значения Q 2 и R 2 перестановочных моделей оказались ниже исходных (данные не показаны), а также с помощью CV. -ANOVA ( p < 0.0001), чтобы гарантировать отсутствие переобучения. Анализ графиков коэффициента корреляции S-линии показал для всех сыров общее увеличение содержания свободных аминокислот (АК) и органических кислот в процессе созревания и сопутствующее снижение уровня углеводов. Среди этих метаболитов только несколько показали статистически значимую корреляцию со старением сыра ( p (cov) ≥|0,05|; p (cor) ≥|0,5|). В частности, аминокислоты с разветвленной цепью (BCAA: валин, лейцин, изолейцин) положительно коррелировали со временем во всех сырах.Кроме того, положительная корреляция наблюдалась для метионина, лейцина и 4-аминомасляной кислоты (ГАМК) только в КЦ и С3, для янтарной кислоты только в С1 и С2, для аланина только в С3 и для уксусной кислоты только в С2. Наконец, для всех сыров наиболее значимая отрицательная корреляция со временем наблюдалась для лактозы.
Чтобы изучить различия между профилями ЯМР сыров в зависимости от типа добавленной культуры, были построены модели OPLS-DA для парных сравнений между образцами на 60-й день созревания.Все модели оказались надежными после теста перестановки ( n = 400) и CV-ANOVA ( p <0,0001). Графики оценок моделей показаны в дополнительном материале (дополнительный рисунок 10). В поисках метаболитов-кандидатов, оказывающих важное влияние на разделение на группы (рис. 8), мы могли отметить, что сыр C3 имел самое высокое содержание BCAA, за которым следовали в порядке убывания CC, C1 и C2. C3 также демонстрировал самые высокие уровни метионина и ГАМК, причем последняя присутствовала только в спектрах C3 и CC.Что касается органических кислот, то наиболее высоким содержанием лимонной кислоты характеризовался ЦК, тогда как высокие уровни муравьиной, уксусной и янтарной кислот были в значительной степени связаны с использованием автохтонных культур. Уксусной кислоты было больше в С2, а янтарной кислоты в С1. В С1 интересно присутствие эритрита. Сообщалось, что этот полиол встречается в различных типах сыров осмотолерантными дрожжами в ответ на солевой стресс (Breuer and Harms, 2006; Tomaszewska et al., 2014), и его присутствие может свидетельствовать о метаболической активности D.hansenii , добавленный к C1, хотя он не был обнаружен ни в культуре, ни в анализе DGGE. С2 характеризуется значительно более высоким уровнем жирных кислот с разветвленной цепью по сравнению с другими сырами.
Рис. 8. Графики коэффициента корреляции S-линии OPLS-DA для попарных сравнений между группами сыров при сроке созревания 60 дней. Для всех моделей Q 2 Y > 0,95 и CV-ANOVA p -значение < 0,0001. Помечены только сигналы от основных метаболитов, способствующих разделению классов (пороговые значения: p (cov) ≥|0.05| и p (кор) ≥|0,5|). Сокращения: ас, уксусная кислота; ала, аланин; BCAA, аминокислоты с разветвленной цепью; BCFA, жирные кислоты с разветвленной цепью; хо-Р, фосфохолин; цит, лимонная кислота; эри, эритрит; форма, муравьиная кислота; ГАМК, γ-аминомасляная кислота; гли, глицин; глу, глутамат; GPC, глицеро-фосфохолин; lac, лактоза; лей, лейцин; метионин; suc, янтарная кислота.
В целом, вышеупомянутые композиционные изменения, наблюдаемые в метаболическом профиле Caciotta в зависимости от времени созревания, соответствуют процессу ферментации сыра (Mcsween, 2004).Лактоза является наиболее распространенным углеводом в молоке. Он в основном потребляется в начале брожения в качестве основного источника энергии для роста микроорганизмов. По мере развития ферментации бактерии также расщепляли молочные белки и высвобождали пептиды и свободную аминокислоту, что способствовало общему вкусу и сенсорным качествам сыра. В частности, BCAA и метионин являются одними из основных предшественников ароматических соединений сыра. Этих метаболитов было особенно много в C3 и CC, которые, согласно нашему сенсорному анализу, также были сырами с наиболее интенсивным ароматом.ГАМК является продуктом декарбоксилирования L-глутамата, который естественным образом присутствует в казеинах. Он обладает несколькими физиологическими свойствами, такими как нейротрансмиссия, успокаивающее действие, улучшает работу мозга и долговременную память (Wu and Sun, 2015). Было показано, что во время ферментации некоторые LAB и NSLAB продуцируют ГАМК в ответ на стресс, вызванный кислотными условиями (Dhakal et al., 2012; Valenzuela et al., 2019). Эта активность сильно различается среди штаммов молочнокислых бактерий и зависит от параметров ферментации, таких как рН и температура.ГАМК также ассоциируется с кислым привкусом (Ochi et al., 2012b). Высокий уровень C3 может способствовать отличительному вкусовому профилю этого сыра, помимо того, что он также дает дополнительную ценность по сравнению с другими качиоттами из-за его потенциально полезных эффектов, укрепляющих здоровье. Кроме того, органические кислоты играют важную роль в органолептических свойствах сыра (Singh et al., 2003), помимо того, что они действуют как естественные консерванты. Они могут возникать в результате гидролиза жирных кислот, роста бактерий или добавления подкислителей во время производства сыра.В частности, известно, что янтарная кислота продуцируется ферментирующими цитрат штаммами молочнокислых бактерий (Kaneuchi et al., 1988), тогда как уксусная и муравьиная кислоты образуются в основном из лактозы в результате гетероферментативного метаболизма NSLAB (McSweeney and Fox, 2004). Относительно более низкие уровни янтарной и уксусной кислот и более высокое содержание лимонной кислоты в коммерческом сыре Caciotta по сравнению с C1, C2 и C3 предполагают наличие более высокой доли штаммов, не ферментирующих цитрат, в контрольном сыре.
Заключение
Было продемонстрировано, что сыр является оптимальным продуктом-носителем для доставки живых пробиотических бактерий, а аутохтонные потенциальные пробиотические штаммы были бы лучшим выбором для использования в качестве дополнительных культур, поскольку они должны быть хорошо адаптированы к этой пищевой среде (Castro et al., 2015; Фуско и др., 2019; Банкалари и др., 2020). Данные, полученные в этом исследовании, указывают на прикладной потенциал аутохтонных культур молочнокислых бактерий, содержащих предполагаемые пробиотические штаммы Lactobacillus и Kluyveromyces , для производства овечьего сыра Caciotta. Использование комбинированных инокулятов с аутохтонными культурами и пробиотическими штаммами не оказало статистически значимого влияния на общий состав и липидный профиль опытной качиотты по сравнению с контролем, но улучшило органолептические характеристики в случае сыров С1 и С3.Подход к метаболомике на основе ЯМР, использованный в нашем исследовании, выявил различия в метаболизме сыра как в зависимости от времени созревания, так и от добавления автохтонных культур. Пробиотические штаммы Kluyveromyces и Lactobacillus выдержали производственный процесс и сохранили свою жизнеспособность до конца созревания, последний с концентрацией намного выше, чем 10 6 КОЕ/г, количество пробиотических бактерий, предполагаемое во время потребления с целью оказания положительного влияния на здоровье человека.Дальнейшие исследования будут направлены на оценку выживаемости пробиотических штаммов в желудочно-кишечном тракте добровольцев, которых кормили пробиотическим сыром Качотта, и на изучение влияния потребления пробиотического сыра на профиль метаболизма человека.
Заявление о доступности данных
Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без неоправданных оговорок.
Заявление об этике
Участники панельного тестирования дали письменное информированное согласие на участие в этом исследовании.Комитет по этике региона Сардинии не требовал, чтобы исследование было рассмотрено или одобрено комитетом по этике.
Вклад авторов
AR и MP внесли свой вклад в экспериментальный план исследования, интерпретацию результатов и написали рукопись. Д.П., В.М. и С.В. проводили эксперименты. FC выполнил измерения ЯМР и проанализировал данные. М.Ф. проводил эксперименты по ДГГЭ и руководил исследованием. SC внес свой вклад в интерпретацию результатов и критический пересмотр рукописи.Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.
Финансирование
Эта работа была поддержана Regione Autonoma della Sardegna (RAS, LR 7/2007, CRP 17617, CRP 26076) и частично поддержана грантами Университета Кальяри (Fondo Integrativo per la Ricerca, FIR, 2016).
Конфликт интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Благодарности
Авторы выражают благодарность Аргиоласу Формаджи за проведение испытаний сыроварения.
Дополнительный материал
Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2020.583745/full#supplementary-material
.Сноски
Каталожные номера
Альбано К., Моранди С., Сильветти Т., Казираги М. К., Манини Ф. и Браска М.(2018). Молочнокислые бактерии со свойствами снижения уровня холестерина для молочных продуктов: активность in vitro и in situ . J. Dairy Sci. 101, 10807–10818. doi: 10.3168/jds.2018-15096
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Альбензио, М., Сантильо, А., Каропрезе, М., Руджери, Д., Наполитано, Ф., и Севи (2013). Физико-химические свойства сыра из овечьего молока Scamorza, изготовленного с использованием различных пробиотических культур. Дж.Молочная науч. 96, 2781–2791. doi: 10.3168/jds.2012-6218
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Амарал, Дж. С., Кунья, С. К., Сибра, Р. М., Алвес, М. Р., Оливейра, Б. П. П., и Перейра, Дж. А. (2004). Триацилглицериновый состав сортов грецкого ореха ( Juglans regia L.): характеристика с помощью ВЭЖХ-ELSD и хемометрии. Дж. Агрик. Пищевая хим. 52, 7964–7969. дои: 10.1021/jf048918n
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Акиланти, Л., Бабини В., Сантарелли С., Осимани А., Петруцелли А. и Клементи Ф. (2011). Бактериальная динамика сыра Качотта из сырого коровьего молока, изготовленного с использованием водного экстракта сухих цветков Cynara cardunculus . Письмо. заявл. микробиол. 52, 651–659. doi: 10.1111/j.1472-765X.2011.03053.x
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Арадоттир, С., и Олссон, Б.Л. (2005). Методические модификации по количественному определению фосфатидилэтанола в крови людей, злоупотребляющих алкоголем, с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии и детекции по испарительному светорассеянию. БМС Биохим. 6:18. дои: 10.1186/1471-2091-6-18
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Бэ, С., Флит, Г. Х., и Херд, Г. М. (2006). Молочнокислые бактерии, связанные с винным виноградом с нескольких австралийских виноградников. J. Appl. микробиол. 100, 712–727. doi: 10.1111/j.1365-2672.2006.02890.x
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Банкалари Э., Монтанари К., Леванте А., Алинови М., Невиани Э., Гардини Ф. и соавт. (2020). Lactobacillus paracasei 4341 в качестве дополнительной культуры для усиления вкуса сыра типа Качотта с коротким сроком созревания. Еда Рез. Междунар. 135:109284. doi: 10.1016/j.foodres.2020.109284
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Брави Э., Перретти Г. и Монтанари Л. (2006). Жирные кислоты с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии и испарительного детектора светорассеяния. Ж. Хроматогр. А 1134, 210–214.doi: 10.1016/j.chroma.2006.09.007
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Buccioni, A., Minieri, S., Conte, G., Benvenuti, D., Pezzati, A., Antongiovanni, M., et al. (2012). Изменения профиля конъюгированной линолевой кислоты и изомеров С18:1 при созревании сыра Pecorino Toscano , произведенного из сырого молока. Итал. Дж. Аним. науч. 11:e75. doi: 10.4081/ijas.2012.e75
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Bylesjo, М., Rantalainen, M., Cloarec, O., Nicholson, J.K., Holmes, E., and Trygg, J. (2006). Дискриминантный анализ OPLS: сочетание сильных сторон классификации PLS-DA и SIMCA. J. Chemometrics 20, 341–351. doi: 10.1002/cem.1006
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Калассо М., Эрколини Д., Манчини Л., Стеллато Г., Минервини Ф., Ди Каньо Р. и др. (2016). Взаимосвязь домашней, корковой и сердцевинной микробиот при производстве традиционных итальянских сыров на одном и том же молочном заводе. Пищевая микробиол. 54, 115–126. doi: 10.1016/j.fm.2015.10.008
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Калассо, М., Минервини, Ф., Де Филиппи, Ф., Эрколини, Д., Де Анджелис, М., и Гоббетти, М. (2020). Аттенуированный Lactococcus lactis и поверхностные бактерии в качестве инструментов для кондиционирования микробиоты и стимулирования созревания полумягкого сыра Качотта. Заяв. Окружающая среда. микробиол. 86:e02165-19. doi: 10.1128/AEM.02165-19
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Карафа, И., Stocco, G., Franceschi, P., Summer, A., Tuohy, K.M., Bittante, G., et al. (2019). Оценка аутохтонных молочнокислых бактерий в качестве закваски и не закваски для производства традиционного горного сыра. Еда Рез. Междунар. 115, 209–218. doi: 10.1016/j.foodres.2018.08.069
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Себолла, В.Л., Мембрадо, Л., Вела, Дж., и Феррандо, А.С. (1997). Испарительная детекция по светорассеянию при количественном анализе полулетучих полициклических ароматических соединений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Ж. Хроматогр. науч. 35, 141–150. doi: 10.1093/chromsci/35.4.141
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Сентено, Дж. А., Гарабальд, Дж. И., Докампо, Ф., Лоренцо, Дж. М., и Карбальо, Дж. (2017). Восстановление вкуса и органолептических свойств традиционного сырого молока Tetilla с использованием дополнительных культур Kocuria varians и Yarrowia lipolytica . Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 251, 33–40. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2017.03.014
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Коколин, Л., Биссон, Л.Ф., и Миллс, Д.А. (2000). Прямое профилирование динамики дрожжей при брожении вина. FEMS Microbiol. лат. 189, 81–87. doi: 10.1111/j.1574-6968.2000.tb09210.x
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Кода Р., Бречани Э., Де Анджелис М., Де Кандиа С., Ди Каньо Р. и Гоббетти М. (2006). Сравнение композиционных, микробиологических, биохимических и летучих характеристик девяти итальянских сыров из овечьего молока. J. Dairy Sci. 89, 4126–4143. doi: 10.3168/jds.S0022-0302(06)72458-4
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Коллинз, Ю. Ф., Максуини, П. Л. Х., и Уилкинсон, М. Г. (2003). Липолиз и катаболизм свободных жирных кислот в сыре: обзор современных знаний. Междунар. Dairy J. 13, 841–866. doi: 10.1016/s0958-6946(03)00109-2
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Консонни, Р., и Кальяни, Л.Р. (2008). Созревание и географическая характеристика сыра Пармиджано Реджано с помощью спектроскопии ЯМР 1Н. Таланта 76, 200–205. doi: 10.1016/j.talanta.2008.02.022
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Косентино С., Пизано Б., Пирас К., Деплано М. и Пальмас Ф. (2002). «Характеристика молочнокислых бактерий, выделенных из традиционного сыра Fiore Sardo», в Proceedings International Conference SFAM (Нидерланды: Wageningen), 104–107.
Академия Google
Косентино С., Пизано М. Б., Корда А., Фадда М.Э. и Пирас, К. (2004). Генотипическая и технологическая характеристика энтерококков, выделенных из кустарного сыра Fiore Sardo. Дж. Молочная Рез. 71, 445–450. doi: 10.1017/s0022029041x
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Де Фрейтас И., Пинон Н., Бердоге Ж.Л., Турнейр П., Лорталь С. и Тьерри А. (2008). Kluyveromyces lactis , но не Pichia fermentans , используемый в качестве дополнительной культуры, изменяет обонятельные характеристики сыра Cantalet. J. Dairy Sci. 91, 531–543. doi: 10.3168/jds.2007-0136
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Де Паскуале И., Ди Каньо Р., Бучин С., Де Анджелис М. и Гоббетти М. (2019). Использование аутохтонных мезофильных молочнокислых бактерий в качестве закваски для производства сыра пекорино кротонезе: влияние на композиционные, микробиологические и биохимические показатели. Еда Рез. Междунар. 116, 1344–1356. doi: 10.1016/j.foodres.2018.10.024
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Дхакал, р., Баджпай, В.К., и Бэк, К.Х. (2012). Продукция ГАМК (γ-аминомасляной кислоты) микроорганизмами: обзор. Браз. Дж. Микробиол. 43, 1230–1241. дои: 10.1590/S1517-83822012000400001
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Dolci, P., Ferrocino, I., Giordano, M., Pramotton, R., Vernetti-Prot, L., Zenato, S., et al. (2020). Влияние Lactococcus lactis в качестве закваски на профиль микробиоты и метаболизма итальянского сыра из сырого молока. Междунар. Молочный J. 110:104804. doi: 10.1016/j.idairyj.2020.104804
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Фадда, М.Е., Мосса, В., Пизано, М.Б., Деплано, М., и Косентино, С. (2004). Встречаемость и характеристика дрожжей, выделенных из кустарного сыра Fiore Sardo. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 95, 51–59. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2004.02.001
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Фадда, М.Э., Мосса, В., Пизано, М.Б., Деплано, М., и Косентино, С. (2017). Скрининг in vitro штаммов Kluyveromyces , выделенных из сыра Fiore Sardo, на предмет потенциального использования в качестве пробиотиков. LWT Food Sci. Технол. 75, 100–106. doi: 10.1016/j.lwt.2016.08.020
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Фолч, Дж., Лиз, М., и Слоан-Стэнли, Г. Х. (1957). Простой метод выделения и очистки общих липидов из тканей животных. J. Biol. хим. 226, 497–509.
Академия Google
Franz, C.M.A.P., Huch, M., Abriouel, H., Holzapfel, W., and Galvez, A. (2011). Энтерококки как пробиотики и их влияние на продукты питания и здоровье. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 151, 125–140. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2011.08.014
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Фука М.М., Максимович А.З., Танувиджайя И., Хулак Н. и Шлотер М. (2017). Характеристика энтерококкового сообщества, выделенного из ремесленного истрийского сыра из сырого молока: биотехнологические аспекты и аспекты безопасности. Пищевая техника. Биотехнолог. 55, 368–380. дои: 10.17113/ftb.55.03.17.5118
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Фуско В., Керо Г. М., Полтроньери П., Мореа М. и Баруцци Ф. (2019). Автохтонные и пробиотические молочнокислые бактерии, используемые для производства «усовершенствованных традиционных сыров». Еда 8:412. doi: 10.3390/foods80
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Жирафа, Г.(2003). Функциональность энтерококков в молочных продуктах. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 88, 215–222. doi: 10.1016/s0168-1605(03)00183-1
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Гоббетти М., Ди Каньо Р., Калассо М., Невиани Э., Фоксд П. Ф. и Де Анджелис М. (2018). Драйверы, которые создают и собирают биоту молочнокислых бактерий в сырах. Trends Food Sci. Технол. 78, 244–254. doi: 10.1016/j.tifs.2018.06.010
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Гоббетти, М., Ди Каньо, Р., и Де Анджелис, М. (2010). Функциональные микроорганизмы для качества функциональных продуктов питания. Крит. Преподобный Food Sci. Нутр. 50, 716–727. дои: 10.1080/10408398.2010.499770
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Гуаррасиа, В., Саннино, К., Москетти, М., Бонанно, А., Ди Григоли, А., и Лука Сеттанни, Л. (2017). Индивидуальный вклад заквасочных и не заквасочных молочнокислых бактерий в состав летучих органических соединений сыра Caciocavallo Palermitano. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 259, 35–42. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2017.07.022
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Гурсой, О., Секин, А.К., Киник, О., и Караман, А.Д. (2012). Влияние использования различных пробиотических культур на концентрацию конъюгированной линолевой кислоты (CLA) и состав жирных кислот в белом рассольном сыре. Междунар. Дж. Пищевая наука. Нутр. 63, 610–615. дои: 10.3109/0
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Ханчи, Х., Моттавеа, В., Себеи, К., и Хаммами, Р. (2018). Род Enterococcus : между пробиотическим потенциалом и проблемами безопасности: обновление. Фронт. микробиол. 9:1791. doi: 10.3389/fmicb.2018.01791
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Хомаюни А., Ансари Ф., Азизи А., Пурджафар Х. и Мадади М. (2020). Сыр как потенциальный пищевой носитель для доставки пробиотических микроорганизмов в кишечник человека: обзор. Курс. Нутр. Пищевая наука. 16, 15–28. дои: 10.2174/1573401314666180817101526
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Канеучи, К., Секи, М., и Комагата, К. (1988). Производство янтарной кислоты из лимонной кислоты и родственных кислот штаммами Lactobacillus. Заяв. Окружающая среда. микробиол. 54, 3053–3056. doi: 10.1128/AEM.54.12.3053-3056.1988
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Карими Р., Сохрабванди С. и Мортазавиан А. М. (2012). Органолептические характеристики пробиотического сыра. Компр. Преподобный Food Sci. Пищевая безопасность 11, 437–452. doi: 10.1111/j.1541-4337.2012.00194.x
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Lanciotti, R., Vannini, L., Chaves Lopez, C., Gobbetti, M., and Guerzoni, M.E. (2005). Оценка способности Yarrowia lipolytica придавать сыру характеристики, зависящие от штамма, при использовании в качестве добавки для созревания. Междунар. Дж. Молочная технология. 58, 89–99. doi: 10.1111/j.1471-0307.2005.00197.x
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Ласкаридис, К., Серафеймиду А., Златанос С., Джилу Э., Конторепаниду Э. и Сагредос А. (2013). Изменения профиля жирных кислот сыра фета, включая конъюгированную линолевую кислоту. J. Sci. Фуд Агрик. 93, 21:30–21:36. doi: 10.1002/jsfa.6018
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Линарес, Д.М., Гомес, К., Ренес, Э., Фресно, Дж.М., Торнадихо, М.Е., Росс, Р.П., и соавт. (2017). Молочнокислые бактерии и бифидобактерии с потенциалом для разработки натуральных биофункциональных молочных продуктов, способствующих укреплению здоровья. Фронт. микробиол. 8:846. doi: 10.3389/fmicb.2017.0084
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Марсьяль-Коба, М.С., Кнёхель, С., и Нильсен, Д.С. (2019). Пищевые матрицы с низким содержанием влаги как носители пробиотиков. FEMS Microbiol. лат. 366:fnz006. doi: 10.1093/femsle/fnz006
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Марроне Р., Балестриери А., Пепе Т., Воллано Л., Мурру Н., Д’Оккио М. Дж. и др. (2014). Физико-химический состав, профиль жирных кислот и содержание холестерина в сыре «Пекорино Кармашано», традиционном итальянском молочном продукте. J. Food Compos. Анальный. 36, 85–89. doi: 10.1016/j.jfca.2014.05.006
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Майрхофер, С., Филипп, Р., Ленер, Д., Райтерих, К., Кнайфель, В., и Домиг, К. Дж. (2014). Пригодность различных наборов праймеров PCR-DGGE для мониторинга молочнокислых бактерий в вине. Южная Африка Дж. Энол. Витик. 35, 185–195. дои: 10.21548/35-2-1001
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Маццеи П. и Пикколо А.(2012). Метаболический анализ 1H HRMAS-ЯМР для оценки качества и прослеживаемости сыра моцарелла из буйволиного молока Кампании. Пищевая хим. 132, 1620–1627. doi: 10.1016/j.foodchem.2011.11.142
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Максуин, PLH (2004). Биохимия созревания сыра. Междунар. Дж. Молочная технология. 57, 127–144. doi: 10.1111/j.1471-0307.2004.00147.x
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Максуини, П.Л. Х. и Фокс, П. Ф. (2004). «Метаболизм остаточной лактозы, лактата и цитрата», в Cheese: Chemistry, Physics and Microbiology , eds PF Fox, PLH McSweeney, MC Timothy и PG Timothy (London: Elsevier), 361–371. doi: 10.1016/s1874-558x(04)80074-5
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Меле М., Контарини Г., Черкачи Л., Серра А., Буччони А., Поволо М. и др. (2011). Обогащение сыра пекорино конъюгированной линолевой кислотой путем кормления молочных овец экструдированным льняным семенем: влияние на состав жирных кислот и триглицеридов и на устойчивость к окислению. Междунар. Dairy J. 21, 365–372. doi: 10.1016/j.idairyj.2010.12.015
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Мерчан, А.В., Бенито, М.Дж., Гальван, А.И., и де Эррера, С.Р.М.С. (2020). Идентификация и выбор дрожжей с функциональными свойствами для будущего применения в мягких сырных пастах. LWT Food Sci. Технол. 124:109173. doi: 10.1016/j.lwt.2020.109173
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Монтель, М. К., Бучин, С., Маллет, А., Дельбес-Паус, К., Виттон, Д., Десмас, Н., и др. (2014). Традиционные сыры: богатая и разнообразная микробиота с сопутствующими преимуществами. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 177, 136–154. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2014.02.019
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Muyzer, G., de Waal, E.C., and Uitterlinden, A.G. (1993). Профилирование сложных микробных популяций с помощью денатурирующего градиентного гель-электрофореза анализа генов, амплифицированных полимеразной цепной реакцией, кодирующих 16S рРНК. Заяв. Окружающая среда. микробиол. 59, 695–700. doi: 10.1128/AEM.59.3.695-700.1993
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Очи Х., Бамба Т., Наито Х., Ивацуки К. и Фукусаки Э. (2012a). Метаболическая дактилоскопия твердых и полутвердых натуральных сыров с использованием газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектором для практического сенсорного моделирования прогнозирования. J. Biosci. биоинж. 114, 506–511. doi: 10.1016/j.jbiosc.2012.06.002
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Очи, Х., Наито Х., Ивацуки К., Бамба Т. и Фукусаки Э. (2012b). Профилирование компонентов твердых и полутвердых натуральных сыров на основе метаболомики с помощью газовой хроматографии / времяпролетной масс-спектрометрии и его применение для сенсорного прогнозирующего моделирования. J. Biosci. биоинж. 113, 751–758. doi: 10.1016/j.jbiosc.2012.02.006
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Оои, Л. Г., и Лионг, М. Т. (2010). Эффекты пробиотиков и пребиотиков на снижение уровня холестерина: обзор результатов in vivo и in vitro . Междунар. Дж. Мол. науч. 11, 2499–2522. дои: 10.3390/ijms11062499
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Пангалло Д., Сакова Н., Коренова Дж., Пускарова А., Кракова Л., Валик Л. и соавт. (2014). Микробное разнообразие и динамика при производстве сыра майская брынза . Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 170, 38–43. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2013.10.015
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Перейра Андраде, Р., Оливейра, Д.Р., Лопес, А.К.А., де Абреу, Л.Р., и Феррейра Дуарте, В. (2019). Выживание Kluyveromyces lactis и Torulaspora delbrueckii в моделировании желудочно-кишечных заболеваний и их использование в качестве одиночного и смешанного инокулята для производства сыра. Еда Рез. Междунар. 125:108620. doi: 10.1016/j.foodres.2019.108620
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Перотти, М. К., Вольф, И. В., Аддис, М., Комунян, Р., Паба, А.и Мейнарди, Калифорния (2014). Включение пробиотических бактерий ( Lactobacillus acidophilus и Bifidobacterium ssp.) в аргентинский овечий сыр. Молочные науки. Технол. 94, 255–267. doi: 10.1007/s13594-013-0158-x
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Пирас, К., Чезаре Маринкола, Ф., Саворани, Ф., Энгельсен, С.Б., Косентино, С., Виале, С., и соавт. (2013). ЯМР-метаболомическое исследование процесса созревания сыра Fiore Sardo, произведенного с использованием автохтонных дополнительных культур. Пищевая хим. 141, 2137–2147. doi: 10.1016/j.foodchem.2013.04.108
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Пизано, М.Б., Касула, М., Корда, А., Фадда, М.Е., Деплано, М., и соавт. (2008). In vitro пробиотические характеристики штаммов Lactobacillus , выделенных из сыра Fiore Sardo. Итал. Дж. Пищевая наука. 4, 505–516.
Академия Google
Пизано, М. Б., Фадда, М. Э., Деплано, М., Корда, А., Касула, М., и Косентино, С. (2007). Характеристика сыра Fiore Sardo, изготовленного с добавлением автохтонных культур. Дж. Молочная Рез. 74, 255–261. дои: 10.1017/S00220292464
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Пизано, М.Б., Фадда, М.Е., Мелис, Р., Чуза, М.Л., Виале, С., Деплано, М., и соавт. (2015). Молекулярная идентификация бактериоцинов молочных штаммов Lactococcus lactis и их технологическая и генотипическая характеристика. Контроль пищевых продуктов 51, 1–8. doi: 10.1016/j.foodcont.2014.11.005
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Пизано М.Б., Скано П., Мургия А., Косентино С. и Кабони П. (2016). Метаболомный и микробиологический профиль итальянского сыра моцарелла, произведенного из буйволиного и коровьего молока. Пищевая хим. 192, 618–624. doi: 10.1016/j.foodchem.2015.07.061
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Пизано, М. Б., Виале, С., Conti, S., Fadda, M.E., Deplano, M., Melis, M.P., et al. (2014). Предварительная оценка пробиотических свойств штаммов Lactobacillus s , выделенных из сардинских молочных продуктов. Биомед Рез. Междунар. 2014:286390. дои: 10.1155/2014/286390
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Прандини, А., Сиголо, С., и Пива, Г. (2011). Сравнительное исследование жирнокислотного состава и концентрации CLA в товарных сырах. J. Food Compos.Анальный. 24, 55–61. doi: 10.1016/j.jfca.2010.04.004
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Рандаццо, К.Л., Питино, И., Де Лука, С., Шифо, Г.О., и Каджиа, К. (2008). Влияние диких штаммов, используемых в качестве закваски и дополнительных культур, на летучие соединения сыра пекорино сицилиано. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 122, 269–278. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2007.12.005
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Ревилла, И., Лобос-Ортега И., Вивар-Кинтана А., Гонсалес-Мартин М.И., Эрнандес-Йерро Х.М. и Гонсалес-Перес К. (2014). Колебания содержания витаминов А и Е при созревании сыров разного состава. Чехия J. Food Sci. 32, 342–347. дои: 10.17221/518/2012-CJFS
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Родригес Д., Сантос С. Х., Роча-Сантос Т. А. П., Гомес А. М., Гудфеллоу Б. Дж. и Фрейтас А. С. (2011). Метаболическое профилирование потенциальных пробиотических или симбиотических сыров с помощью спектроскопии ядерного магнитного резонанса (ЯМР). Дж. Агрик. Пищевая хим. 59, 4955–4961. дои: 10.1021/jf104605r
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Роза, А., Максиа, А., Путцу, Д., Ацери, А., Эра, Б., Фаис, А., и соавт. (2017). Химический состав фруктового масла Lycium europaeum , полученного путем сверхкритической экстракции CO2, и оценка его антиоксидантной активности, цитотоксичности и абсорбции клетками. Пищевая хим. 230, 82–90. doi: 10.1016/j.foodchem.2017.03.019
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Роза, А., Мургия С., Путцу Д., Мели В. и Фальчи А.М. (2015). Кубосомы на основе моноолеина влияют на липидный профиль в клетках HeLa. Хим. физ. Липиды 191, 96–105. doi: 10.1016/j.chemphyslip.2015.08.017
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Саад, Н., Делатр, К., Урдачи, М., Шмиттер, Дж. М., и Брессолье, П. (2013). Обзор последних достижений в области пробиотиков и пребиотиков. LWT Food Sci. Технол. 50, 1–16. doi: 10.1016/j.вес.2012.05.014
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Сабихи, Л., Сатиш, М.Х.К., и Матур, Б.Н. (2014). Bifidobacterium bifidum в пробиотическом сыре Эдам: влияние на созревание сыра. J. Food Sci. Технол. 51, 3902–3909. doi: 10.1007/s13197-013-0945-7
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Самир Б., Гангули С., Хетра Ю. и Сабихи Л. (2020). Разработка и характеристика пробиотического сыра рикотта из буйволиного молока. LWT Food Sci. Технол. 121:108944. doi: 10.1016/j.lwt.2019.108944
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Сакселин М., Корпела Р. и Майра-Макинен А. (2003). «Введение: классификация функциональных молочных продуктов», в Функциональные молочные продукты , редакторы Т. Маттила-Сандхольм и М. Саарела (Бока-Ратон, Флорида: CRC Press), 1–16. дои: 10.1533/55736917.1
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Сильветти Т., Капра Э., Моранди С., Cremonesi, P., Decimo, M., Gavazzi, F., et al. (2017). Профиль микробной популяции во время созревания сыра Silter с защищенным обозначением происхождения (PDO), произведенного с автохтонной заквасочной культурой и без нее. LWT Food Sci. Технол. 84, 821–831. doi: 10.1016/j.lwt.2017.06.022
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Сингх, Т.К., Дрейк, М.А., и Кадвалладер, К.Р. (2003). Вкус сыра Чеддер: химическая и органолептическая точки зрения. Компр. преп.Пищевая наука. Пищевая безопасность 2, 166–189. doi: 10.1111/j.1541-4337.2003.tb00021.x
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Талвалкар, А.Л., и Кайласапати, К.А. (2004). Обзор токсичности кислорода в пробиотических йогуртах: влияние на выживание пробиотических бактерий и методы защиты. Компр. Преподобный Food Sci. Пищевая безопасность 3, 117–124. doi: 10.1111/j.1541-4337.2004.tb00061.x
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Тапиа, М. С., Альзамора, С.М. и Чирифе Дж. (2007). «Влияние активности воды (aw) на микробную стабильность как препятствие для сохранения пищевых продуктов», в Water Activity in Foods: Fundamentals and Applications , eds GV Barbosa-Cánovas, AJ Fontana, SJ Schmidt, and TP Labuza (Hoboken, NJ : Wiley), 239–271. дои: 10.1002/
70376454.ch20
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Терпоу А., Боснеа Л., Канеллаки М., Плессас С., Бекатору А., Безирцоглу Э. и др. (2018). Способность к росту нового потенциального пробиотика штамма Lactobacillus paracasei K5 , включенного в промышленный белый рассольный сыр в качестве дополнительной культуры. J. Food Sci. 83, 723–731. дои: 10.1111/1750-3841.14079
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Тофало Р., Фуско В., Бонлейн К., Кабиш Дж., Логриеко А.Ф., Хаберманнет Д. и соавт. (2019). Жизнь и время дрожжей в традиционных пищевых ферментациях. Крит. Преподобный Food Sci. Нутр. 59, 1–30. дои: 10.1080/10408398.2019.1677553
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Томашевская, Л., Ракицка М., Рымович В. и Ривинска А. (2014). Сравнительное исследование метаболизма глицерина в эритрит и лимонную кислоту в дрожжевых клетках Yarrowia lipolytica. FEMS Yeast Res. 14, 966–976. дои: 10.1111/1567-1364.12184
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Трюгг, Дж., и Уолд, С. (2002). Ортогональные проекции на скрытые структуры (O-PLS). Дж. Хим. 16, 119–128. doi: 10.1002/cem.695
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Турчи, Б., Нуволони Р., Фратини Ф., Педонезе Ф., Эбани В.В. и Черри Д. (2011). Сыр Caciotta della Garfagnana : отбор и оценка аутохтонных мезофильных молочнокислых бактерий в качестве стартовых культур. Итал. Дж. Аним. науч. 10:e22. doi: 10.4081/ijas.2011.e22
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Валенсуэла Дж., Флорес А., Васкес Л., Васек О. и Майо Б. (2019). Производство γ-аминомасляной кислоты (ГАМК) штаммами молочнокислых бактерий, выделенными из традиционных беззаквасочных молочных продуктов, изготовленных из сырого молока. Бенефис. Микробы 10, 579–587. дои: 10.3920/BM2018.0176
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Юнита, Д., и Додд, К.Э.Р. (2018). Динамика микробного сообщества сыра из сырого молока с голубыми прожилками из Соединенного Королевства. J. Dairy Sci. 101, 4923–4935. doi: 10.3168/jds.2017-14104
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Zhang, L., Zhang, X., Liu, C., Li, C., Li, S., Li, T., et al. (2013).Производство сыра Чеддер с использованием пробиотика Lactobacillus plantarum K25 и его влияние на снижение уровня холестерина в модели на мышах. World J. Microbiol. Биотехнолог. 29, 127–135. doi: 10.1007/s11274-012-1165-4
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Зелинская, Д., и Коложин-Краевская, Д. (2018). Молочнокислые бактерии пищевого происхождения могут проявлять пробиотические свойства: обзор. Биомед Рез. Междунар. 2018:5063185. дои: 10.1155/2018/5063185
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Darkness Falls (Кейт Маршалл, #3) Роберта Брындзы
3.5 звезд
В этой третьей книге из серии «Кейт Маршалл» бывший полицейский детектив ищет женщину, которая исчезла более десяти лет назад. Книгу можно читать как отдельную.
*****
В 1995 году Кейт Маршалл работала детективом-констеблем в столичном округе, пока не обнаружила, что ее босс, старший детектив-инспектор Питер Конвей, с которым у нее были романтические отношения, был серийным убийцей.
Последующий скандал, а также тот факт, что Кейт была беременна ребенком Питера, привели к ее увольнению.С тех пор Кейт стала алкоголичкой, потеряла c
3,5 звезды
В этой третьей книге из серии «Кейт Маршалл» бывший полицейский детектив ищет женщину, которая исчезла более десяти лет назад. Книгу можно читать как отдельную.
*****
В 1995 году Кейт Маршалл работала детективом-констеблем в столичном округе, пока не обнаружила, что ее босс, старший детектив-инспектор Питер Конвей, с которым у нее были романтические отношения, был серийным убийцей.
Последующий скандал, а также тот факт, что Кейт была беременна ребенком Питера, привели к ее увольнению.С тех пор Кейт стала алкоголичкой, потеряла опеку над своим (и Питером) сыном Джейком в пользу своих родителей, начала ходить в АА и стала преподавать криминологию в Эшдин-колледже на юге Англии. В Ашдине Кейт живет в домике на берегу и каждое утро начинает с купания в прибое.
Сейчас 2015 год, и Кейт оставила свою преподавательскую должность, чтобы открыть частное детективное агентство. Кейт управляет агентством из офиса по аренде караванов, который она унаследовала от своей подруги (и спонсора АА) Майры.
Кабинет Кейт также служит кладовой для трейлеров, поэтому пространство наполовину заполнено полотенцами, простынями и моющими средствами.
Напарником Кейт в детективном агентстве является ее бывший помощник учителя Тристан Харпер, обладающий способностями к следственной работе.
А 19-летний сын Кейт Джейк — на летних каникулах в университете — помогает с караванным предприятием и возит туристов на лодке.
Бизнес частного детектива Кейт переживает не лучшие времена, поэтому она рада получить звонок от женщины по имени Бев Эллис, чья дочь Джоанна Дункан исчезла двенадцать лет назад.Полиция отложила дело Джоанны на полку, и Бев хочет, чтобы Кейт продолжила поиски, даже если в результате останется только тело, которое нужно похоронить.
На момент исчезновения Джоанна занималась журналистскими расследованиями и недавно разоблачила члена парламента, который брал взятки для заключения контрактов на строительство. Джоанна также расследовала заявления о том, что женатый член парламента использовал арендованных мальчиков, что в то время вызвало бы большой скандал.
Скорбящая мать Бев Эллис и ее бойфренд Билл — богатый подрядчик со связями — владеют полицейскими файлами, касающимися дела Джоанны, так что у Кейт и Тристана есть хорошее начало.Вскоре они узнают, что примерно в то время, когда Джоанна исчезла, она расследовала исчезновение двух геев, которые проводили время в коммуне скваттеров.
Чтобы продолжить расследование, Кейт и Тристан наводят справки о (ныне несуществующей) коммуне и ее жителях; поговорите с друзьями Джоанны; поговорите с (неверным) мужем Джоанны Фредом;
интервью редактора Джоанны в газете;
выследить разоблаченного члена парламента Джоанну и т. д.
Кейт и Тристан также могут получить информацию от своих контактов в офисе коронера и полицейском управлении.
Тем временем серийный убийца с талантом к маскировке подбирает геев в этом районе и убивает их.
В ходе своих расследований Кейт и Тристан снова и снова натыкаются на одни и те же имена, но не могут связать обстоятельства исчезновения Джоанны, пока не происходит неожиданный прорыв.
В дополнение к их профессиональной работе мы можем заглянуть в частную жизнь персонажей. Кейт борется со своей трезвостью и скучает по своей подруге Майре; У Тристана финансовые проблемы и старшая сестра, которая не одобряет его детективную работу; Джейку приходится иметь дело с отцом-серийным убийцей; и так далее. С другой стороны, Кейт, Тристан и Джейк иногда собираются на вкусный шашлык на пляже.
Некоторые повороты в книге вызывают недоверие, но мне понравилась история, и я рекомендую ее любителям детективов и поклонникам Кейт Маршалл.